同种异体大鼠移植肺中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的定量表达

背景：急性排斥反应的发病机制主要是T细胞介导的免疫应答，Th1，Th2细胞及其分泌的细胞因子互相调节、交叉作用在其中起重要作用。研究表明，原始Th细胞向Th1或Th2细胞分化受转录因子T—bet和GATA结合蛋白3的表达所调控。 目的：在前期实验基础上，应用实时荧光定量聚合酶链反应法测定大鼠移植肺组织中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的mRNA表达，初步分析转录因子T-bet和GATA结合蛋白3在肺移植急性排斥反应中的作用及其意义。设计、时间及地点：单一样本观察的随机对照动物实验，于2003-08/2008-04在瑞士苏黎世大学医院胸外科实验室和深圳市人民医院临床研究中心完成。 材料：纳入LBNFI大鼠10只和Lewis大鼠30只，以建立大鼠左侧原位肺移植模型。方法：将大鼠按随机数字表法分为5组，以肺移植后3，5d作为观察急性排斥反应的时间点：①空白对照组（n=5）：取正常Lewis大鼠左肺组织。②冷缺血对照组（n=5）：冷低钾右旋糖酐液灌注后取Lewis大鼠右侧肺组织。③同系移植组（n=5）：Lewis-Lewis大鼠肺移植后5d，取移植左肺组织。④同种异体移植3d组（n=4）：LBNF1-Lewis大鼠肺移植后3d，取移植左肺组织。⑤同种异体移植5d组（n=6）：LBNF1-Lewis大鼠肺移植后5d，取移植左肺组织。 主要观察指标：应用实时荧光聚合酶链反应法，定量检测各组大鼠肺组织中转录因子T—bet和GATA结合蛋白3的表达。 结果：①T—bet在同种异体移植5d组中的表达有所增高，但与其他各组间差异均无显著性意义（P〉0．05）。②GATA结合蛋白3在同种异体移植5d组中的表达水平低于空白对照组、冷缺血对照组及同系移植组（P〈0．05）。③同种异体移植5d组中T-bet／GATA结合蛋白3比值高于其他各组（P〈0.05），其他各组间差异均无显著性意义（P〉0．05）。 结论：移植肺组织中GATA结合蛋白3比T-bet的改变更敏感．起主导作用；T—bet／GATA结合蛋白3比值可作为评价肺移植急性排斥反应的客观指标之一。     

血管铸型技术检测组织工程多孔支架血管化的实验研究

目的　探索利用血管铸型技术观察组织工程多孔支架体内再血管化情况的可行性。　方法　将DegraPol多孔管状支架置入SD大鼠腹腔大网膜包埋1周,应用解剖学中的血管铸型技术,观察组织工程支架体内形成新生血管的情况。　结果　大网膜包埋后在DegraPol支架外部发现有较多的蓝色显影微细血管环绕,在微孔支架内部,蓝色显影穿透支架并沿支架内孔分布。　结论　血管铸型适合用于微血管检测,可作为组织工程人工器官再血管化检测的一种新方法。     

小鼠气管异位移植后肺移植慢性排斥反应模型的建立

目的通过建立小鼠的气管异位移植模型来模拟肺移植慢性排斥反应,为国内的闭塞性细支气管炎研究提供一种新的模型选择。方法同种异体移植组（Allograft组）以BALB／c小鼠为供者,C57BL／6小鼠为受者,同系移植组（Isograft组）供受者均为BALB／c小鼠。取供体小鼠的气管、左右主支气管连续气道作为供体,异位移植到受体小鼠背部皮下。分别于移植后第5、14、28天时,各取3只,将移植气管段取出作组织学分析。结果18例模型动物全部存活,无感染。病理切片示Allograft组小鼠移植气管管腔闭塞,慢性炎细胞浸润广泛,气管上皮完全脱落,纤维组织增生明显,呈现闭塞性细支气管炎表现;Isograft组小鼠移植气管的组织形态未见明显异常。结论小鼠异位气管移植的动物模型简单、经济、稳定性强、重复性好,能准确复制肺移植后闭塞性细支气管炎的病理过程。     

大网膜与颈部皮下包埋DegraPol支架促进体内再血管化的比较

背景:如何解决工程化器官植入体内时快速血管化问题是组织工程取得成功的关键问题.目的:比较大网膜与颈部皮下两种方法包埋促进组织工程支架材料DegraPol血管化的差异,为工程化组织体内快速再血管化寻找有效方法.方法:应用解剖学中的血管铸型技术,比较DegraPol支架置入大鼠颈部皮下和腹部大网膜包埋新生血管形成的不同.结果与结论:DegraPol支架外部发现大网膜包埋组比颈部皮下包埋组有更多的蓝色显影微细血管环绕,在微孔支架内部,也有相对丰富的新生血管形成.颈部皮下包埋组在微孔支架内部未发现新生血管形成.大网膜包埋组再血管化程度高于颈部皮下组,差异有显著性意义(P<0.05).提示大网膜包埋有效地促进血液循环建立,可作为组织工程化组织再血管化的可行方法.     

旋转生物反应器培养对组织工程气管软骨力学强度的影响

目的研究旋转生物反应器培养对组织工程气管软骨力学强度的影响，探索适宜的组织工程气管软骨培养方法。 方法分离2周龄Lewis大鼠剑突软骨细胞传代培养，收集第3代软骨细胞种植到DegraPol管状支架上，静态培养7d，然后将软骨细胞-支架复合物分别置于旋转生物反应器内培养（生物反应器组）或继续静态培养培养3周（静态培养组）。取出软骨细胞-支架复合物，以噻唑蓝（MTT）法测定软骨细胞增殖活性，结果以吸光度（A）值表示（每组n=6）；以Zwick1445型材料试验机测定软骨细胞-支架复合物的最大应变值和应力值（每组n=4）；并制备扫描电镜标本，观察软骨细胞在DegraPol支架中培养后的超微结构变化。 结果不同条件下培养3周，生物反应器组和静态培养组A值分别0.17±0.05、0.12±0.01，最大应力值分别为（0.33±0.04）和（0.26±0.01）MPa，最大应变值分别为（3.53±0.91）和（1.71±0.13）mm/mm，2组间3项指标的差异均有统计学意义（均P〈0.05）。扫描电镜观察显示生物反应器组获得更好的软骨样结构和更多的细胞外基质。 结论旋转生物反应器能够提供更好的体外培养条件，有利于组织工程气管软骨的形成。     

旋转生物反应器用于提高组织工程气管软骨力学强度的实验研究

针对体外静态培养方法的缺点,采用旋转生物反应器培养组织工程气管软骨,探讨工程化软骨合适的体外培养条件.选用大鼠剑突软骨细胞种植到DegraPol管状支架上,然后分别于传统静态培养和生物反应器内培养.于体外培养3周和6周后,取出软骨细胞-DegraPol支架复合物,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性,GAG浓度测定细胞外基质分泌情况,应力-应变机械力学方法测定最大应变和应力的变化,并制备扫描电镜标本观察软骨细胞在DegraP01支架中培养后的超微结构.体外培养3周应用MTT法测定A值分别为:静态培养的细胞-支架复合物组0.12±0.01,生物反应器组0.17±0.05(每组n=6).GAG浓度测定静态培养组为(0.14±0.03) μg/mg,生物反应器组为(0.22±O.03) μg/mg(每组n=6).应力-应变机械力学测定结果为,体外培养3周应变值:生物反应器组为(3.53±0.91),静态培养组为(1.71±0.13).应力值生物反应器组为(0.33±0.04) MPa,静态培养组为(0.26±0.01) MPa.体外培养6周应变值:生物反应器组为(0.57±0.10),静态培养组为(0.48±0.07),应力值生物反应器组为(0.16±0.02) MPa,静态培养组为(0.09±0.02) MPa(每组n=4).扫描电镜观察显示生物反应器组获得更好的软骨样结构和更多的细胞外基质.应用旋转生物反应器能够提供适宜的机械应力刺激,可作为体外构建组织工程化气管软骨的可行的培养方法.     

供体脾细胞联合抗CD154输注诱导肺移植免疫耐受

目的 探讨供体特异性输注(DST)联合共刺激阻断(DST/抗CD154)诱导肺移植后闭塞性细支气管炎(OB)免疫耐受机制.方法 建立小鼠DST/抗CD154方案诱导的免疫耐受模型术后15、25、100 d取出移植气道检测形态学改变,利用CSME-80鼠cDNA芯片检测15d耐受组和同种异体移植组移植物内基因表达差异,分析差异有统计学意义的基因表达与排斥和耐受之间的关系.选择部分差异表达基因行实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR),鉴定验证基因芯片的可靠性.结果 免疫耐受组OB前期存在大量显著表达差异基因,Rapl信号通路、CD40/CD40L相关及其他T细胞表面分子相关基因、细胞周期、细胞生长等促进纤维增殖的部分基因显著下调表达.部分促炎因子同同种异体移植组一样上调表达.结论 Rap1信号通路、CD40/CD40L相关及其他T细胞表面分子相关基因、细胞周期、细胞生长等促进纤维增殖下调表达的部分基因等可能与肺移植慢性排斥反应耐受相关.     

Bim与BCSG1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义研究

目的 探究Bcl-2相互作用细胞凋亡调节因子(Bim)与乳腺癌特异性基因1(BCSG1)蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义.方法 选取我院2015年1月至2017年2月期间收治的60例乳腺癌患者,通过外科手术收集60例患者乳腺癌组织以及癌旁组织,通过免疫组织化学染色检测两种组织中Bim与BCSG1蛋白表达情况,分析不同分期、不同分化程度、不同病理、不同直径和是否转移情况下Bim与BCSG1蛋白表达差异.结果 免疫组织化学染色结果显示:Bim与BCSG1在乳腺癌组织中高表达,而在癌旁组织中低表达,比较差异有统计学意义(P＜0.05);肿瘤直径≥4cm、低分化程度、浸润性乳腺癌、Ⅲ-Ⅳ期和远处转移的乳腺癌患者,Bim与BCSG1阳性率明显高于肿瘤直径＜4cm、高度分化、中度分化、非浸润性乳腺癌、Ⅰ-Ⅱ期和非转移的乳腺癌患者(P＜0.05).结论 Bim和BCSG1蛋白在乳腺癌组织中高表达,且表达水平与肿瘤大小、分期、浸润、分化程度和转移性密切相关.     

电针下调脑梗死大鼠皮质缺血半影区Bax蛋白质表达

目的 观察电针对脑缺血大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达的影响，为揭示电针治疗脑缺血的机制提供实验依据。方法 雄性SD大鼠线栓大脑中动脉建立脑缺血动物模型，随机分为非电针组和电针组。用免疫组织化学的方法显示大鼠额叶皮质缺血半影区内Bax阳性细胞，观察形态和分布，并计算阳性细胞数目；用Western-blot方法检测非电针组和电针组大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达量。将非电针组和电针组大鼠的同类指标与假手术组和正常对照组的同类指标比较，寻找组间差异。结果 （1）免疫组织化学方法在对照组大鼠额叶皮质未显示出Bax免疫阳性细胞，在假手术组大鼠额叶皮质内也未见Bax免疫阳性细胞；非电针组大鼠额叶皮质缺血半影区于缺血6 h即见圆形、椭圆形和梭形的Bax免疫阳性细胞，免疫阳性产物分布充满细胞质。电针组大鼠额叶皮质缺血半影区内Bax免疫阳性细胞在形态和分布上与非电针组未见明显组间差异。电针组的阳性细胞的数量比非电针组的明显减少，差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）Western-blot方法在对照组和假手术组大鼠额叶皮质内均未检出Bax蛋白质表达。电针组大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达比非电针组的明显减少，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 2 Hz频率电针刺激曲池和足三里穴位，可以下调脑梗死大鼠额叶皮质缺血半影区Bax蛋白质表达，参与脑缺血性神经元凋亡的病理过程。     

应用免疫组织化学S-100和α-肌动蛋白抗原鉴定组织工程软骨

背景：通常采用阿辛蓝染色技术鉴定软骨组织，然而对于组织工程软骨形成早期，阿辛蓝染色不能很好的显示细胞外基质的分泌情况。 目的：拟观察采用免疫组织化学法S-100抗原结合α-肌动蛋白抗原染色鉴别人工合成组织工程化软骨结构的可行性。 设计、时间及地点：对比观察，于2006-12／2008—02在深圳市人民医院临床医学研究中心完成。 材料：2周龄SPF级SD大鼠，体质量50--60g，用于体外培养剑突软骨细胞；DegraPol材料，长20mm，内/外径分别为2．5/4mm，管壁厚度为0．75mm，由瑞士联邦理工大学聚合材料研究所提供。 方法：于第3代收集软骨细胞接种于DegraPol管状支架形成软骨细胞-支架复合物，体外培养3周后植入同系大鼠腹腔大网膜体内培养1周。分别于体外培养3周和体内培养1周后取软骨细胞-DegraPol复合物制备组织学检测标本行苏木精-伊红染色和S-100抗原、α-肌动蛋白抗体免疫组织化学染色。 主要观察指标：倒置显微镜观察软骨细胞-DegraPol复合物的变化；免疫组织化学染色鉴定软骨细胞。 结果：体外培养3周后，苏木精-伊红染色显示软骨细胞位于软骨陷窝内，软骨基质呈蓝色。种植软骨细胞于DegraPol管状泡沫材料支架内侧面，体外培养3周后，在管腔的内侧壁S-100抗原阳性表达，α-肌动蛋白抗原阴性。证实在细胞-支架复合物植入同系大鼠体内培养之前已经形成了新的组织工程化软骨层。置入动物体内培养1周后，所获得的新组织为混合性的细胞结构，S-100抗原阳性多集中在管腔的内侧壁，而α-肌动蛋白抗原阳性反应多集中在管腔的外侧壁。 结论：软骨组织S—100抗原阳性表达，结缔组织α-肌动蛋白抗原阳性表达。S-100和α-肌动蛋白抗原可作为组织工程化软骨的鉴定指标。