耐多药结核病的治疗进展

耐多药结核病（MDR-TB）指至少耐异烟肼和利福平两种药物的结核病,由于近年来抗结核药物的广泛应用,细菌耐药性明显提高,再加上化疗方案不合理、治疗药物中断或社会因素等原因,其发病率逐年升高,且因其病程长、治疗费用高、治愈率低、复发率高,成为各国突出的公共卫生问题。据国际卫生组织（WHO）／国际防痨和肺病联合会（IUATLD）的最新耐药监测估计,全球每年新出现30～60万 MDR-TB 患者,而我国是全球耐药结核病疫情较高的国家之一,目前估计我国有12万耐多药结核病例,约占全球的1／4。WHO 已将我国作为全球27个 MDR-TB 高负担国家之一。面对如此严峻的局势,对治疗 MDR-TB 的研究也越来越深入。     

丙戊酸钠在γδT细胞对肺癌A549细胞免疫中的作用

目的:研究丙戊酸钠(Sodium Valproate,VPA)作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂对肺癌A549细胞MICA蛋白的影响,并探讨丙戊酸钠在人外周血γδT细胞对肺癌A549细胞免疫中的作用.方法:用Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单核细胞(PBMC),用流式细胞仪分选纯化γδT细胞,用IL-2及唑来磷酸刺激γδT细胞扩增.用不同浓度的丙戊酸钠处理肺癌A549细胞,培养24小时后用PCR及Western blot检测MICA的变化.将分离纯化的γδT细胞与处于对数期生长的肺癌A549细胞混合培养,并加入VPA、MICA抗体处理,24小时后用LDH法检测γδT细胞的细胞毒性.结果:加入VPA后,PCR及Western blot结果显示肺癌A549细胞MICA蛋白在转录及表达上均增强；分离纯化的γδT细胞经体外扩增后,对肺癌A549细胞有较强的细胞毒性作用；加入VPA后γδT细胞对肺癌A549细胞的细胞毒性作用较未加入组增强(P＜0.05).结论:体外扩增的γδT细胞对肺癌A549细胞产生较强的细胞毒性杀伤作用；组蛋白脱乙酰酶抑制剂-丙戊酸钠可上调A549细胞MICA的表达,并增强γδT细胞对肺癌A549细胞的杀伤作用.     

结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建及其联合人IL-12表达质粒诱导的小鼠细胞免疫应答观察

目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答。方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体PCDNA3.1的相应酶切位点。(2)动物实验:50只C57BL/6N小鼠随机分为:①Ag85A基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组);②重组Ag85A基因疫苗组;③卡介苗BCG组(阳性对照);④空载体组(阴性对照);⑤PBS组(空白对照)。基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次,约0.3 ml/只。第三次免疫小鼠后28天,处死各组小鼠,分离脾细胞,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFNγ-、IL-2、IL-4水平;乳酸脱氢酶释放法检测脾细胞杀伤活性;分离的脾细胞经TB-PPD刺激后,XTT比色法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果:(1)成功构建结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗。(2)联合免疫组能诱导较强烈的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-r和IL-2水平显著高于Ag85A基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少;特异性CTL杀伤活性明显增强;淋巴细胞增殖活性也明显高于其他组别。结论:hlL-12表达质粒能够增强结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗所诱导的小鼠免疫应答。     

结核菌素纯蛋白衍生物刺激人γδT细胞效应分析

目的 探讨结核菌素纯蛋白衍生物(pure protein derivative,PPD)对人外周血γδT细胞的刺激效应.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)后,经尼龙毛柱法分离得T细胞.分别以卡介苗和PPD刺激γδT细...     

丹参、人参及蛤蚧组方对大鼠肺纤维化凋亡基因作用的研究

目的 研究丹参、人参及蛤蚧组方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化模型凋亡基因的表达,探讨该组方抗肺纤维化的作用机制.方法 SD雄性大鼠50只随机分为对照组、模型组、醋酸泼尼松组、治疗Ⅰ组(低剂量组:丹参83 mg/kg、人参50mg/kg及蛤蚧50mg/kg)及治疗Ⅱ组(高剂量组:丹参166mg/kg、人参50mg/kg及蛤蚧50 mg/kg);于第28天处死大鼠,RT-PCR 法检测大鼠肺组织bax及bcl-2基因mRNA表达水平,用单克隆抗体免疫组化法检测bax及bcl-2蛋白含量.结果 bax基因mRNA及蛋白在模型组、醋酸泼尼松组、治疗Ⅰ组及治疗Ⅱ组的表达明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);同时模型组升高幅度明显,治疗Ⅱ组升高幅度较低,两者相比差异有统计学意义(P ＜0.01);bcl-2基因mRNA及蛋白在醋酸泼尼松组、治疗Ⅰ组及治疗Ⅱ组的表达升高,并治疗Ⅱ组升高更明显,与模型组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丹参、人参及蛤蚧组方能通过调节细胞凋亡,下调bax活性,增强Bcl-2的活性,抑制细胞凋亡,减少纤维积聚和纤维化形成.     

呼吸道组织振荡技术对气道滞留物清除的影响

目的设计、制作可产生气道振荡的小型装置，并在体检测其对气道滞留物消除的影响。方法利用空气动力学原理，通过调节呼气附加装置出气口角度、大小及盖口钢珠重量等方法，控制装置的频响范围，并应用于人体测试，呼吸道主要部位放置压力感受器，傅立叶分析方法分析共振频率和振幅。采用同位素标记气溶胶吸人后1照像的方法，观察该装置对气道滞留物消除过程的影响。结果该装置自身的频响范围为每秒10-20次，应用于人体测得呼吸道从口咽部至肺叶支气管开口处的共振频率为每秒13～14次，呼气时气道压力为18—23cmH2O，压力振荡幅度为1-2．3cmH2O。使用该装置可明显缩短气道内放射性气溶胶的半数消除时间。结论 该小型呼气附加装置的使用，可增加气道壁的震荡，改善气流特点，促进气道滞留物的消除，可望成为慢性阻塞性肺疾患(COPD)气道粘液高分泌患者方便、实用的促排痰工具。     

PBL教学模式在呼吸内科见习中的应用研究

目的探讨以问题为基础的教学法(PBL)和以授课为基础的教学法(LBL)在呼吸内科见习教学中的应用效果。方法随机将进入呼吸内科见习的100名学生均分为PBL教学组和LBL教学组,通过教学考核比较两种教学方法的效果,并对两组学生进行问卷调查。结果 PBL教学组学生的理论和实践考试成绩均优于LBL教学组,说明PBL教学模式能调动学生学习的积极性,提高学生解决临床问题的能力。结论 PBL教学模式优于LBL教学模式,它有助于激发学生学习兴趣和培养学生临床思维。     

诊断学教学体会与教学改革探索

对诊断学教学实践进行实例总结,并提出建议：诊断学教师要比医生会讲课,比教师更懂医;重视医德教育和教学方法,将执业医师资格考试内容渗透到教学中;以执业医师资格考试为导向,改革实践教学及考核手段。