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目的对2012年秦皇岛口岸的首例登革热输入性病例进行分子溯源,确定病毒的基因型别及感染来源。方法应用ELISA方法和实时荧光RT-PCR方法对患者进行初筛,利用RT-PCR法扩增病毒的NS1基因并测序,根据获得的序列进行同源性分析、遗传距离计算及系统进化树的构建。结果从患者2份血清(QHD-01-BS1和QHD-01-BS2)中检测到Ig M抗体阳性,从QHD-01-BS1及尿液(QHD-01-US)中检测到登革热2型病毒的NS1基因。同源性分析发现QHD-01-BS1(US)与COM基因型中的印度株GWL39 INDI-01和GWL18 INDI-01同源性最高,为97.3%;QHD-01-BS1(US)的遗传距离与COM基因型遗传距离最小,为0.04;进化分析显示QHD-01-BS1(US)与GWL39 INDI-01和GWL18 INDI-01亲缘关系最近。结论分子溯源证实患者感染的登革热病毒与来源于印度的登革热2型病毒亲缘关系最近,指示其传染源极有可能在印度。 相似文献
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目的 对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法 蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果 从自纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒;分别命名为M110和M113,这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变。脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT—PCR扩增、序列测定,证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明,M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因I型的H241株(Y19176)同源性最高。分别为99%、98%;NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96.5%、97.1%。结论 从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因I型,表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。 相似文献
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中俄边境中部地区不同生境鼠类初步调查研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的调查2008年中俄边境中部地区不同生境鼠的种类组成和携带体外寄生虫的情况。方法采用夹夜法捕鼠。结果本次调查共捕获啮齿类动物4科7属计266只,同时捕获啮齿类动物的体外寄生虫蚤371只、螨133只、蜱1只。4种生境分布的鼠种的多样性不同,田地的鼠种多样性最高,其次为草地及林区,口岸的鼠种最为单一。同时,所有生境下捕获黑线姬鼠占21%,黑线仓鼠占21%,长尾黄鼠占16%,东方田鼠占13%,大林姬鼠占11%,棕背鼠平占10%,花鼠占7%及褐家鼠占1%。结论为中俄边境地区深入开展鼠类防治研究提供了重要依据。 相似文献
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目的对中国-老挝边境口岸地区云南省勐腊县和老挝勐新县采集的蚊虫标本进行版纳病毒检测。方法2009年8月在勐腊县、勐新县人房和畜圈采集蚊虫标本,从蚊虫研磨液中提取RNA,用RT-PCR方法扩增版纳病毒第3、5、7、9、l1、12节段序列,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测核酸扩增阳性标本的基因组带型,利用MEGA 4软件进行系统进化分析。结果共检测蚊虫标本80批,其中3批老挝标本扩增到版纳病毒第3、7、11节段核酸序列,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示3个阳性分离物的基因组均为12条带双链RNA,系统进化分析显示3个老挝版纳病毒分离物位于2个进化分支,其中1株与越南分离株关系最近。结论首次从老挝蚊虫标本中检测到版纳病毒,老挝分离株与中国、越南分离株之间发生了基因重配。 相似文献
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目的 了解自1980-2012年在世界各地分离的版纳病毒分子遗传进化特征。方法 采用多种生物信息学分析方法,对1980-2012年我国及世界各地分离的版纳病毒进行基于第12节段基因序列的系统进化、分子溯源分析。结果 版纳病毒的共同进化祖先出现时间为315(95% HPD:63~619)年前,第12节段的进化速率为2.33×10-3(95% HPD:2.84×10-4~8.52×10-3)碱基替换/位点/年,提示版纳病毒属于新发快速进化的虫媒病毒。结论 版纳病毒属于快速进化的新发虫媒病毒,其地域分布范围进一步扩大且已经分化出新的病毒变种,应加强对该病毒在自然界分布及其致病性的监测。 相似文献
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目的建立用于检测黄病毒属的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法。方法从GenBank中检索黄病毒属代表株的全基因序列,通过DNAstar进行序列比对和blast进行保守序列搜索和分析,用Beacon Designer 7.0软件进行引物和TaqMan探针设计,以乙脑毒株MB090509 RNA为模板,优化反应条件并应用于现场蚊虫标本检测。结果确定黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR反应条件为:45℃15 min,95℃10 min,95℃10 s→54℃45 s,40次循环,引物和探针终浓度为200 nmol/L。灵敏度为常规RT-PCR方法 100倍,检出限2.9×10-3噬斑形成单位(PFU)/mL,与甲病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、布尼亚病毒属均无交叉反应。从161份现场蚊虫标本中检测出11份阳性标本,经病毒分离、测序均被证实为乙脑病毒。结论本研究建立的黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有广泛应用价值。 相似文献
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目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。 相似文献
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〔目的〕掌握中越河口—老街边境地区鼠携带汉坦病毒、钩端螺旋体和鼠疫杆菌的情况。〔方法〕2008年11月和2009年4月在云南省河口县和越南老街市的居民区用鼠笼捕鼠,取鼠肺、肝和肾脏组织。从鼠肺中提取RNA,用RT-PCR方法扩增汉坦病毒核酸;从鼠肝和肾脏中提取DNA,用PCR方法分别扩增鼠疫杆菌和钩端螺旋体核酸。〔结果〕在河口—老街边境地区捕获黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠、小家鼠、臭鼳鼱和斯氏家鼠共198只,黄胸鼠数量最多,占总数的79.8%;从老街黄胸鼠鼠肺中检测到3份汉坦病毒核酸,阳性率为4.41%;从河口黄胸鼠、褐家鼠和大足鼠鼠肾中共检测到7份钩端螺旋体核酸,河口黄胸鼠钩端螺旋体核酸阳性率为11.36%;未检测到鼠疫杆菌核酸。〔结论〕中越河口—老街边境地区鼠传疾病病原有汉坦病毒和钩端螺旋体,应加强当地鼠传疾病的监测。 相似文献
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目的 建立5种生物恐怖细菌的快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法 ,即炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西斯菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的多重检测.方法 针对炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西菌、类鼻疽伯克霍尔德菌的特异性基因序列设计6对引物和相应的特异性探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,标记的PCR产物与包被在不同编码微球上的相应探针杂交,用悬浮芯片扫描仪检测.结果 多重PCR悬浮芯片检测体系能够正确的检测和鉴定5种生物恐怖细菌,特异性好,灵敏度高,可用于恐怖样本的高通量筛查.结论 建立了多重PCR基因悬浮芯片快速检测几种生物恐怖细菌的方法 . 相似文献