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由于免疫原性,鼠源性单克隆抗体在人体疾病治疗方面受到限制,运用基因重组技术,将抗体轻链、重链可变区基因连接,构建单链Fv(ScFv)基因.表达制备ScFv片段,由于其分子小,免疫原性弱,有潜在应用前景.本实验将获得的抗人肺癌单克隆抗体轻重链可变区基因,通过Linker基因序列连接并克隆至pIg20表达载体,表达制备抗人肺癌scFv融合蛋白.现报道如下.l 材料与方法1.1 抗人肺癌单克隆抗体3D_3(McAb3D_3)重链可变区基因(VH)克隆至表达载体pIg20,以SmaⅠ,XbaⅠ分别双酶切VH及pIg20质粒,以粘末端方式,将SmaⅠ-VH-Xba片段连接到pIg20载体,连接产物电穿孔法转染BL21菌,筛选鉴定.阳性子命名为pIgVH.1.2 将McAb3D_3轻链可变区基因(VL)克隆至pIgVH,以BgLⅡ、NcoⅠ分别消化中pIgVH及VL,以粘 相似文献
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野生型p^53基因导入对培养的兔血管平滑肌细胞生长的抑制作用 总被引:10,自引:1,他引:10
为探索腺病毒载体重组野生型p53基因转染平滑肌细胞的效率及其应用于动脉粥样硬化和动脉再狭窄的基因治疗的可能性,构建了野生型p53基因的生长缺陷型重组腺病毒载体。在体外培养条件下转染兔血管平滑肌细胞。应用生化染色法、免疫组化法及聚合酶链技术等检测了外源基因的转染效率及表达效果。应用细胞计数及同位素参入技术测定了p53基因对平滑肌细胞的抑制效果。流式细胞仪检测了平滑肌细胞。结果显示:腺病毒载体可快速有效地将外源基因转导进入平滑肌细胞,在转染细胞内可检测到外源性p53cDNA,并可高效表达p53蛋白。p53重组腺病毒载体转染细胞后,可显著抑制细胞生长,细胞计数减少,DNA合成减少,并可导致细胞死亡。流式细胞仪检测有部分细胞体积缩小,DNA减少。结果提示,野生型p53基因重组腺病毒载体转染平滑肌细胞可有效抑制细胞生长,有可能成为动脉粥样硬化和再狭窄的基因治疗手段。 相似文献
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目的观察同型半胱氨酸(Hey)水平与冠心病(CHD)的关系,并探讨蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G基因多态性、叶酸、维生素B12(VitB12)与Hcy水平及CHD的关系。方法 选择190例经冠状动脉造影证实的CHD患者(CHD组)和100例冠状动脉造影正常者为对照组。应用荧光偏振免疫分析法测定Hey水平,离子捕获分析法测定叶酸水平,微粒酶免疫分析法测定VitB12水平。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析MTRRA66G基因多态性。结果 CHD组血Hcy水平显著高于对照组(15.8±8.8)μmol/L与(12.9±6.3)μmol/L,P=0.002。叶酸、VitB12水平与血Hcy水平呈负相关。叶酸、VitB12与CFD无关。MTRR A66G基因多态性GG纯合子、AG杂合子和AA野生型3种基因型组间血Hcy水平差异无显著性意义。(P=0.908)。MTRR A66G各基因型在CHD组和对照组的分布差异无显著性意义(P=0.198)。结论CHD患者血Hcy水平升高,叶酸、VitB12水平与血Hcy水平呈负相关。MTRR A66G基因多态性与血Hcy水平及与CHD均无关。 相似文献
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载脂蛋白A-Ⅳ基因36O位点与阿尔茨海默病和帕金森病的关系研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 探讨载脂蛋白 A- (apolipoprotein A- ,Apo A- )基因 3 60位点多态性和血脂指标与阿尔茨海默病 (Alzheimer disease,AD)和帕金森病 (Parkinson disease,PD)的关系。方法 应用存在特异性引物的简便、直接的聚合酶链反应 (PCR)方法 ,检测具有临床诊断证据的 3 9例 AD患者 [(77.7± 8.1 )岁 ]、3 6例 PD患者[(74.8± 1 0 .0 )岁 ]和 2 0 8名健康人 [(5 4.3± 1 1 .2 )岁 ]Apo A- 基因 3 60位点 (Gln/His)的突变 ,同时应用常规临床化学方法检测上述人群的血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)和高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)水平。结果 在所有患者和健康人群中 ,均未发现 Apo A- 3 60 His等位基因携带者 ;两个病患组与对照组血清 TC和HDL-C水平差异无显著性 ,但病患组血清 TG水平却显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;PD组血清 TG水平显著高于 AD组 (P <0 .0 5 )。结论 此研究未发现 Apo A- 基因 3 60位点突变基因型携带者 ,故无法探讨其与 AD和PD的关系 ;血脂水平与 AD和 PD的关系有待扩大病例样本进一步研究 相似文献
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目的探讨载脂蛋白A-Ⅳ(apolipoprotein A-Ⅳ,ApoA-Ⅳ)基因360位点多态性和血脂指标与阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)和帕金森病(Parkinson disease, PD)的关系. 方法应用存在特异性引物的简便、直接的聚合酶链反应(PCR)方法,检测具有临床诊断证据的39例AD患者[(77.7±8.1)岁]、36例PD患者[(74.8±10.0)岁]和208名健康人[(54.3±11.2)岁]ApoA-Ⅳ基因360位点(Gln/His)的突变,同时应用常规临床化学方法检测上述人群的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) 水平. 结果在所有患者和健康人群中,均未发现ApoA-Ⅳ 360 His等位基因携带者;两个病患组与对照组血清TC和HDL-C水平差异无显著性,但病患组血清TG水平却显著高于对照组(P<0.05);PD组血清TG水平显著高于AD组(P<0.05). 结论此研究未发现ApoA-Ⅳ基因360位点突变基因型携带者,故无法探讨其与AD和PD的关系;血脂水平与AD和PD的关系有待扩大病例样本进一步研究. 相似文献
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1981~2001年北京市职业人群血清总胆固醇水平的变动 总被引:4,自引:0,他引:4
分析1981年至2001年20年间北京市部分职业人群血清总胆固醇水平的变化。在力求做到血脂测定标准化的基础上,回顾性分析20年来北京市部分机关和企事业单位工作人员47434人次总胆固醇水平的变化,按年度、性别、年龄分组统计,结果发现,总胆固醇水平从1981年至1988年间上升幅度较大,年龄调整均值男性上升0.73mmol/L(28m/dL),女性上升0.62mmol/L(24mg/dL)。至1990年已达最高值,2001年低于1991年,男、女年龄调整均值分别回落0.21mmol/L(8mg/dL)及0.23mmol/L(9mg/dL)。男女总胆固醇水平随年龄上升,从青年至老年,男性上升约20%,而女性升高达35%,上升趋势基本一致。不同年龄组间上升幅度有明显的男女差异,青年期男性大于女性,中年以后女性上升幅度增大,从40~49岁至50~59岁组男性平均上升3%.而女性上升达14%.60岁以后上升很少。所以总胆固醇水平在50岁以前男性高于女性,50岁以后女性高于男性。以1985年、1991年和2001年为例,无论男女,年龄标化的高胆固醇检出率[总胆固醇≥5.17mmol/L(200mg/dL)、≥5.69mmol/L(220mg/dL)及≥6.02mmol/L(240mg/dL)]1991年比1985年明显增高,而2001年与1991年相差不多且有所回落。目前北京市职业人群的总胆固醇年龄调整均值男性4.86mmol/L(188mg/dL),女性4.78mmol/L(185mg/dL),年龄标化高胆固醇检出率≥5.7mmol/L者约20%,≥6.2mmol/L者约10%。结果提示,北京市职业人群血清总胆固醇水平及年龄标化的高胆固醇检出率在80年代升幅较大.90年代不再升高且有所回落。 相似文献
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老年人亚甲基四氢叶酸还原酶、蛋氨酸合成酶基因多态性及同型半胱氨酸水平与冠心病的关系 总被引:4,自引:0,他引:4
目的探讨老年人同型半胱氨酸(Hcy)水平与冠心病的关系,并对亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)A1298C基因多态性、蛋氨酸合成酶(MS)A2756G基因多态性与Hcy水平及冠心病的关系进行探讨. 方法 177例老年人为研究对象,其中129例冠状动脉造影证实为冠心病患者(冠心病组),48例冠状动脉造影完全正常(对照组).荧光偏振免疫分析法测定Hcy水平,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析MTHFR A1298C、MS A2756G基因多态性. 结果冠心病组血Hcy水平显著高于对照组[(16.2±8.6)对(12.7±5.0)μmol/L,P<0.01].MTHFR A1298C基因多态性CC纯合子和AC杂合子血Hcy水平均显著低于AA野生型[(9.1±2.5)、(13.5±6.6)对(16.0±8.3)μmol/L,P<0.01],CC纯合子和AC杂合子间血Hcy水平差异无显著性(P>0.05);MTHFR 1298CC纯合子在冠心病组的分布频率显著低于对照组(3.1%对14.6%,P<0.05).MS A2756G基因多态性GG+AG基因型血Hcy水平显著低于AA野生型[(12.8±6.5)对(15.6±8.1)μmol/L,P<0.05],MS 2756GG+AG基因型在冠心病组的分布频率显著低于对照组(9.3%对20.8%,P<0.05). 结论本研究入选的老年人群中,冠心病患者血Hcy水平升高.MTHFR 1298CC基因型及MS 2756 GG +AG基因型与低血Hcy水平相关,它们可能会通过降低血Hcy水平而减少老年人冠心病的发生. 相似文献
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四氢叶酸还原酶基因C677T突变与阿尔茨海默病有关 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 调查一些候选基因的多态性与阿尔茨海默病 (Alzheimer disease,AD)发病的关系。方法 利用Roche公司 Roche Molecular System(RMS)提供的同时检测多种基因多态性的方法 ,检测 1 5种与脂代谢、血压和血栓形成相关基因的 2 9个多态性位点的基因型 ,比较 3 7例 AD患者和 84名健康人在这些等位基因频率方面的差别。结果 AD组载脂蛋白 E(Apo E)常见基因多态性 (ε2、ε3、ε4)和甲烯四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因的 C677T多态性分布与健康对照组相比有显著不同。Apo Eε4和 MTHFR基因的 677T等位基因的频率在AD组显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 MTHFR基因的 677T等位基因可能是除 Apo Eε4外另一个与 AD发病有关的遗传危险因素 相似文献