二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对Hep G2细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(Hep G2细胞)为对照组,分别以50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒Hep G2细胞为处理组,培养24 h后通过Annexin V/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(Western blotting)技术检测Hep G2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况。结果与对照组相比,400μmol/L DCAN处理组可诱导Hep G2细胞凋亡(P<0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P<0.05)。DCAN作用于Hep G2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。结论高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导Hep G2细胞凋亡。     

Y-型双腔引流管+持续灌注与单腔引流管单纯引流治疗老年亚急性硬膜下血肿的疗效比较

目的比较Y-型双腔引流管+持续灌注与单腔引流管单纯引流治疗老年亚急性硬膜下血肿的疗效。方法将2013年1月至2015年12月期间收治的28例接受手术治疗的亚急性硬膜下血肿老年患者,随机分为Y-型双腔引流管+持续灌注组与单腔引流管单纯引流组,其中Y-型双腔引流管+持续灌注组17例,单腔引流管单纯引流组11例。比较2组术后1 d,2 d,3 d,14 d,3个月OM线上第5层面的中线偏移值。并比较两组引流液恢复正常所需时间及复发率。结果 Y-型双腔引流管+持续灌注组与单腔引流管单纯引流组中线偏移距离术前无显著性差异,术后1 d两组中线偏移距离仍无显著性差异,但术后2 d,3 d,14 d,3个月中线偏移距离存在显著性差异。治疗组引流液清亮需要的中位时间为2 d,无1例复发。对照组引流液清亮需要中位时间为3 d,2例复发,差异有统计学意义(P0.05)。结论 Y-型双腔引流管+持续灌注治疗亚急性硬膜下血肿安全可靠,方法简便易行。     

人骨保护素-分枝杆菌热休克蛋白70融合蛋白的克隆与表达及其活性鉴定

目的:为解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题,拟克隆入骨保护素功能区与分枝杆菌热休克蛋白70肽段融合基因,进一步观察其在大肠杆菌中的表达并鉴定活性.方法:实验于2006-05/2007-09在首都医科大学免疫学系实验室完成.采用反转录-聚合酶链反应技术从人骨肉瘤细胞系MG63总RNA中扩增骨保护素成熟肽段编码区基因,构建pGEM-TEasy-骨保护素重组质粒.以此为模板,聚合酶链反应扩增骨保护索-热休克蛋白70功能区DNA,构建重组表达载体pET-28a-骨保护素-热休克蛋白70,将其转化E.coli.BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷诱导后收集菌体蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白免疫印迹鉴定该融合蛋白的表达,以破骨细胞生长抑制实验及抑炎实验检测该融合蛋白的生物学活性.结果:①实验最终获得人骨保护素全长基因片段,人骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA片段已被正确插入到pET-28a载体中,转化菌株可表达人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白.②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示约在Mr22000处有蛋白的超表达,而未诱导菌株未发现有此条带.③蛋白免疫印迹检测表明,融合蛋白能与抗人骨保护素单克隆抗体特异性结合.④破骨细胞生长抑制实验表明,该融合蛋白能够减少破骨细胞的生成数量,具有体外抑制骨破坏的生物活性.⑤抑炎实验表明,融合蛋白具有显著减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应程度的作用,说明融合蛋白中热休克蛋白70具有抑制炎症的生物学活性.结论:在E.coli.BL21(DE3)中表达了骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白,体外功能实验证实该融合蛋白具有一定的生物学活性.     

L型锁定加压钢板治疗胫骨远端干骺端骨折的临床观察

目的 探讨胫骨远端前外侧L型锁定加压钢板治疗胫骨远端干骺端骨折临床效果.方法 回顾分析2008年1月～2010年3月24例胫骨远端干骺端骨折患者的临床资料,其中骨折部位距离胫骨远端关节面的平均长度为13 mm,AO/ASIF分类:A1型3例,A2型5例,A3型8例,B1型3例,C1型4例,C3型1例,采用胫骨远端L型锁定加压钢板内固定手术治疗.结果 24例获得随访,平均随访11.3个月,骨折均获愈合,临床愈合时间2.5～5个月,根据Johner-Wruhs评分标准,良12例,好10例,中2例,无差评病例.结论 胫骨远端前外侧L型锁定加压钢板设计合理,固定效果良好.     

阿拉伯—甘露聚糖制剂对小鼠巨噬细胞活性的影响

用化学发光方法测定了阿拉伯—甘露聚糖制剂对小鼠巨噬细胞活性的影响.发现制剂不仅可增强小鼠巨噬细胞的活性,而且可增强小鼠巨噬细胞杀伤小鼠S₁₈₀肿瘤细胞的作用.提示制剂有可能作为一种非特异性免疫增强剂提高巨噬细胞杀伤病原微生物和肿瘤细胞的活性.     

噻唑蓝比色法用来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性

我们采用噻唑蓝(MTT)比色法来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性。应用中药多糖、人工合成多糖、细菌多糖、有丝分裂素,升高cAMP浓度的药物直接活化人淋巴细胞;应用中药多糖、人工合成多糖、细菌多糖和升高cAMP浓度的药物,直接活化小鼠巨噬细胞。结果显示黄芪甙和两种升高CAMP浓度的药物对上述两种细胞有直接活化作用,尤其是两种药物相加,呈现明显地协同作用。阐明人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞活化与胞内cAMP浓度上升相关。     

鹭鸶咯口服液对小鼠巨噬细胞活化作用的研究

我们采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验观察了鹭鸶咯口服液对小鼠巨噬细胞的活化作用和吞噬功能的影响。结果表明，在８％（ｇ／１００ｍｌ）和１６％两个药物浓度，该药物对小鼠巨噬细胞均无毒性，且刺激其大量增生。对于巨噬细胞活性的影响，在体内外作用均显著。在８％、１６％、３２％三个药物浓度上，该药物对提高巨噬细胞吞噬功能均有显著作用。     

海星甾醇抗实验性心律失常的作用

目的：研究海星甾醇C01对实验性心律失常的拮抗作用。方法：麻醉大鼠股静脉快速iv5?Cl2诱发室颤（VF），记录大鼠的VF发生和死亡数，小鼠尾静脉ivCaCl2-Ach混合液（10ml/kg）诱发小鼠房颤（扑），记录房颤（扑）的发生率；麻醉大鼠冠脉结扎再灌注诱发心律失常，记录结扎5min和再灌期各时间点的心律失常发生率，并比较ST段的变化，电刺激致家兔室颤，记录室颤阈值。结果：海星甾醇C801显著降低了CaCl2诱发VF的发生率，抑制小鼠房颤（扑）的发生，对大鼠结扎期 再灌期各个时间点都有显著的抗心律失常的作用，减轻结扎造成的心肌缺血及再灌所致的心肌损伤，中高剂量组可显著提高家兔室颤阈值，降低VF的发生。结论：C01能对抗多个性和房性心律失常的实验模型，提示C01具有广泛的抗心律失常作用。     

小鼠BPI_(36-259)抗菌蛋白在原核细胞中的表达及其抗血清的制备

目的采用原核表达系统获得小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白,免疫家兔制备目的蛋白特异性抗血清。方法利用生物信息学方法预测小鼠BPI功能片段,构建pUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得mu BPI36-259基因片段,构建pET28a-mu BPI36-259重组质粒;用IPTG诱导重组质粒转化的E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得以包涵体形式表达为主的mu BPI36-259目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得兔抗鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清;用间接ELISA法检测血清抗体特异性及其效价。结果成功构建了pET28a-mu BPI36-259重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)获得以包涵体表达形式为主的目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得小鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清(效价1∶10000)。结论在原核细胞中成功获得了以包涵体表达形式为主的抗菌蛋白,免疫家兔获得的特异性抗血清可用于小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白的检测。     

短缺基本药物现状及保障措施研究

目的：调查分析我国短缺基本药物现状并提出保障短缺基本药物供应的措施。方法：通过对影响基本药物相关因素的系统调研,构建短缺基本药物数据库模型,分析存在的问题及内在联系,科学提出短缺基本药物保障措施的基本框架和主要解决措施。结果：筛选得到49种涉及短缺的药品,共58个剂型;对数据库构建影响较大的有5个因素;运用SPSS18．0软件构建全国及6个地区数据库模型,根据回归模型对影响基本药物短缺的因素进行排序,提出保障措施。结论：研究结果反映了短缺基本药物的现状,提出的政策建议可为解决基本药物短缺提供参考。