辅助生殖技术中胚胎冻存新观念及解冻移植策略的探讨

体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization&embryo transfer,IVF-ET)技术作为帮助不孕不育夫妇获得后代的重要治疗手段,已经广泛应用于临床中。近十年,随着临床个体化控制性卵巢刺激(individual controlled ovarian stimulation,iCOS)方案等临床技术的改进、胚胎实验室培养体系的精准提高,使得在新鲜周期中可利用胚胎率提高,因此胚胎冷冻保存技术作为IVF衍生技术,已成为胚胎实验室不可或缺的基本技术。     

成熟卵泡获卵率对体外受精结局的影响

目的比较在体外受精-胚胎移植/卵细胞浆内单精子注射（IVF-ET/ICSI）过程中,控制性超促排卵（COH）后成熟卵泡获卵率对IVF-ET/ICSI的实验室和临床结局的影响。方法回顾性分析2010年5月至2010年12月四川大学华西第二医院行IVF-ET/ICSI治疗的693例患者,共746个周期,根据获卵率将患者分为A组：获卵率≥80%;B组：获卵率50%～79%;C组：获卵率30%～49%;D组：获卵率〈30%。比较4组患者的临床和实验室结局。结果 A、B组卵子成熟率、受精率、卵裂率和可移植胚胎形成率等各项临床和实验室结局比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。随着获卵数的减少,获卵数最低的D组的卵子成熟率、受精率、卵裂率和可移植胚胎形成率与A组和B组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;同时,D组的临床妊娠率、胚胎种植率和累积妊娠率明显低于其他各组（P〈0.05）。C组受精率、卵裂率、可移植胚胎形成率和临床妊娠率也显著低于A组（P〈0.05）,C组卵裂率、临床妊娠率低于B组（P〈0.05）,但C组的累积妊娠率与A组和B组相似（P〉0.05）。结论获卵率减少可导致卵子成熟率、受精率、卵裂率和可移植胚胎形成率下降,直接导致临床妊娠率下降。     

超声结合彩色多普勒在多囊卵巢综合征的诊断和治疗中的应用

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是育龄妇女最常见的妇科内分泌疾病,在生育期女性无排卵性不孕患者中,PCOS发生率约为70%[1],以高雄激素、无排卵及胰岛素抵抗为特征,临床常表现为月经稀发或闭经、肥胖、多毛、痤疮、不孕等。PCOS的远期并发症较多,包括妊娠期糖尿病、心血管疾病风险增加[2]等。PCOS多起病于青春期,但青春期PCOS患者的月经异常往往被认为是生理现象而忽视。及早和准确诊断P-COS对于有效治疗PCOS和预防远期并发症有重要的意义。目前采用的PCOS的诊断标准包括:排卵少或不排卵;有高雄激素血症的临床和生化特征;超声检查发现卵巢呈现多囊性改变[3]。     

盆底神经肌肉电刺激治疗薄型子宫内膜患者的临床研究

目的探讨盆底神经肌肉电刺激(PFNES)治疗,对于薄型子宫内膜(TE)患者子宫内膜厚度(ET)与血流灌注及妊娠情况的影响。 方法选择2016年5月至2018年5月,在四川大学华西第二医院生殖医学科与生殖内分泌科接受门诊治疗、有生育需求的96例TE患者为研究对象。根据其是否接受PFNES治疗,将其分为研究组(n＝51,采取雌激素+PFNES治疗)和对照组(n＝45,仅采取雌激素治疗)。2组患者治疗前、后ET与子宫动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、子宫动脉收缩期与舒张期持续时间比值(S/D)的组间与组内比较,采用成组t检验与配对t检验。2组患者自然妊娠率、流产率比较,采用χ²检验。与所有患者签署临床研究知情同意书。本研究获得四川大学华西第二医院伦理委员会的批准(审批文号：2015026)。2组患者年龄、不孕年限,基础雌二醇、卵泡刺激素(FSH)、促黄体激素(LH)水平,治疗前ET与子宫动脉PI、RI、S/D等临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。 结果①治疗后,研究组TE患者ET值为(9.2±1.1)mm,显著厚于其治疗前的(5.4±0.8)mm与对照组的(7.9±0.7)mm,并且差异均有统计学意义(t＝6.327、4.352,均为P<0.001)。②治疗后,研究组TE患者子宫动脉PI、RI及S/D分别为(0.52±0.16)、(0.23±0.06)与(2.05±0.29),均显著低于其治疗前的(0.89±0.23)、(0.79±0.22)与(4.86±1.02),以及对照组的(0.78±0.12)、(0.67±0.14)与(3.92±1.02),并且差异均有统计学意义(t＝4.178、6.743、7.246、6.583、5.235、5.932均为P<0.001)。③治疗1年后,研究组患者自然妊娠率为43.1%(22/51),显著高于对照组的13.3%(6/45),并且差异有统计学意义(χ²＝10.279,P＝0.001);而2组患者流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论采取PFNES治疗可增加TE患者的ET,提高子宫内膜血流灌注及其容受性,进而提高自然妊娠率。     

人睾丸组织中成熟精子的分离方法初探

探索简单、适用的体外分离睾丸组织中成熟精子的方法,以用于男性无精子症病人行卵母细胞内单精子注射受精-胚胎移植为目的。用含不同浓度透明质酸酶的10 %人血白蛋白人类输卵管液培养人睾丸曲细精管组织匀浆2 4 h,再用Percoll梯度离心法洗涤后计算所获各级精子的总数,并设置前后对照和空白对照进行比较。用不同浓度透明质酸酶处理后的4个实验组分别与2个对照组比较,实验组所获得的各级精子的总数高于对照组,有显著差异(P<0 .0 1)。实验组中透明质酸酶浓度分别为5 0、10 0、15 0 u/ ml的10 %人血白蛋白人类输卵管液处理组获得的各级精子总数组间比较,处理前对照和处理后空白对照之间比较,无显著差异(P>0 .0 5 )。而用浓度为2 0 0 u/ ml的10 %人血白蛋白人类输卵管液处理组获得的各级精子的总数与其它浓度处理组之间比较存在统计学差异(P<0 .0 1) ,其所获得的各级精子总数相似,但活动能力较其它浓度处理组低。透明质酸酶结合Percoll梯度离心可从人睾丸曲细精管组织匀浆中分离出较多更纯的成熟精子,但过高浓度的透明质酸酶可能会影响分离出的精子的活动能力。     

碱性成纤维细胞生长因子与卵巢癌的关系

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF,每日行结晶紫染色后测定光密度 (D4 90 )值 ,绘制细胞生长曲线 ;将 SKOV3细胞团接种于铺设有细胞外基质凝胶的 4孔板 ,每日测定癌细胞在凝胶中的浸润距离 ;建立 SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型 ,每周两次分别将 b FGF、b FGF-MAb和生理盐水注射于移植瘤周围 ,8周后测量肿瘤体积 ;对移植瘤组织切片行 因子的免疫组化染色、测定肿瘤内微血管密度 (microvessel density,MVD)。　结果　 b FGF能促进 SKOV3细胞增殖并呈浓度依赖 ,实验第 5天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞 D4 90 值是对照组的 1.0 9倍和 1.2 1倍 ;b FGF能促进 SKOV3细胞浸润并呈浓度依赖 (P<0 .0 5 ) ,第 7天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞浸润距离分别是对照组的 1.5 3倍和2 .4 5倍 ;b FGF组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 1.80倍和 1.4 6倍 (P<0 .0 5 ) ,b FGF- MAb组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 6 3.7%和 6 2 .8% (P<0 .0 5 )。　结论　b FGF能明显促进卵巢癌细胞的增殖、     

不明原因自然流产患者蜕膜巨噬细胞抗原递呈功能的改变及意义

目的:探讨不明原因自然流产患者(USA)蜕膜巨噬细胞抗原递呈功能的改变及意义.方法:选取有卡介苗接种史的30例USA患者作为研究对象,以孕龄相当的正常妊娠人工流产妇女作为对照.通过淋巴细胞体外抗原特异性转化实验,分别以不同浓度的实验组及对照组蜕膜巨噬细胞作为抗原递呈细胞,相应的外周血T细胞作为反应细胞,以PPD、USA组(U-Ag)及对照组滋养细胞抗原(N-Ag)作为抗原,MTT法检测T细胞增殖的情况,以刺激指数(SI)反应T细胞增殖强度.流式细胞仪检测HLA-DR在巨噬细胞上的表达.结果:USA组在PPD、U-Ag和N-Ag这3种抗原分别诱导下,T细胞的刺激指数(SI)在巨噬细胞8×105/ml和16×105/ml浓度时均明显高于2×105/ml和4×105/ml,差异有显著性(P＜0.05);对照组在这3种抗原诱导下,T细胞的SI在各浓度巨噬细胞组间比较,差异无显著性(P＞0.05);两组在相同抗原和相同细胞浓度下.当巨噬细胞浓度为2×105/ml时,T细胞的SI比较差异无显著性(P＞0.05)外,其余各浓度USA组的T细胞SI均高于对照组,差异均有显著性(P＜0.05).HLA-DR在USA组蜕膜巨噬细胞上的表达为87.5±25.6%,而对照组为84.2±30.3%,两者比较差异无显著性(P＞0.05).结论:USA组的蜕膜巨噬细胞具有抗原递呈功能,滋养细胞抗原通过蜕膜局部的巨噬细胞递呈给母体免疫系统使T细胞激活,这很有可能是导致USA的重要机制.     

bFGF单克隆抗体对卵巢癌移植瘤血管生成的抑制作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在卵巢上皮性肿瘤中的表达强度与肿瘤血管生成之间的关系,及其单克隆抗体bFGFMAb对人卵巢癌移植瘤血管生成和肿瘤生长的影响。方法:(1)应用免疫组化法和图像分析系统研究bFGF在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达部位和强度;以及bFGF的表达强度与肿瘤新生血管的关系;(2)利用卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,每周2次将不同浓度的bFGFMAb注射于瘤体周围,连续8周,每周测量肿瘤体积,绘制移植瘤生长曲线;对移植瘤组织行Ⅷ因子的免疫组化染色,测定肿瘤内微血管密度(MVD)。结果:(1)bFGF主要在卵巢上皮性肿瘤细胞浆内表达,在交界性和恶性肿瘤中,部分细胞同时存在核表达;bFGF在正常卵巢组织,良性、交界性和恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达强度逐步增强,同时MVD逐步增高,二者呈正相关(P<0.001);(2)30、20、10μgbFGFMAb组移植瘤体积分别是对照组的31.34%、49.20%和71.25%,MVD分别是对照组的27.80%、52.37%和81.86%(P<0.05),其作用呈浓度依赖性。结论:bFGFMAb能明显抑制卵巢癌的血管生成和肿瘤生长,有望成为卵巢癌生物治疗的新方法。     

经阴道补充雌激素的现状

泌尿生殖道萎缩及萎缩性阴道炎是妇女绝经后因雌激素缺乏而发生的常见病。主要表现为尿频、尿急、反复尿路感染以及阴道干燥、搔痒、分泌物异常、性生活困难等 ,影响绝经后妇女生活质量。口服、经皮等途径补充雌激素治疗绝经后泌尿生殖道萎缩病症均有效 ,但作用最快的还是阴道内用药[1] 。经阴道补充雌激素是国外常用的有效治疗方法 ,临床应用已近 3 0年 ,近年在我国应用也日益增多。现就经阴道补充雌激素的现状作一综述。一、对泌尿生殖道的局部效应经阴道应用雌激素的主要目的是治疗泌尿生殖道萎缩和萎缩性阴道炎 ,大量研究已证明其临床疗…     

男性隐性梅毒患者体外受精——胚胎移植治疗的结局分析

目的 分析男性隐性梅毒患者体外受精—胚胎移植(IVF-ET)治疗的结局,为其行IVF-ET治疗知情选择提供帮助.方法 选择因女方输卵管因素不孕行IVF-ET治疗的患者45对,其中男方隐性梅毒15对(观察组),男方无梅毒感染30对(对照组),两组均行IVF-ET治疗,比较其受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率及胚胎种植率.结果 观察组受精率54.50％、卵裂率80.00％、优质胚胎率52.60％,明显低于对照组的83.43％、98.86％、75.60％(P均＜0.05),临床妊娠率(18.18％)及胚胎种植率(8.33％)分别低于对照组的46.67％、22.22％,但无统计学差异(P均＞0.05).结论 男性隐性梅毒患者行IVF-ET治疗时受精率降低,受精后形成胚胎、胚胎继续发育能力及种植潜能较低,故其行IVF-ET治疗前应充分知情同意.