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目的:构建一种可通过荧光成像进行体内外示踪的纳米基因载体,并对其生物相容性进行初步评价。 方法:在量子点Qdots表面修饰壳聚糖后形成荧光纳米颗粒CS-Qdots,检测其电镜形态、光学特征、表面电荷和傅里叶转换近红光谱(FTIR),并将其注射入裸鼠移植瘤内观察体内成像信号;以凝胶阻滞电泳检测CS-Qdots携带质粒DNA的能力,并利用激光共聚焦显微镜观察其转染报告基因绿色荧光蛋白在细胞内的表达情况。通过MTT试验检测细胞相对增殖率(RGR)、测定溶血率和小鼠急性毒性试验评价CS-Qdots的生物相容性。结果:电镜观察显示CS-Qdots纳米颗粒粒径为20-30nm,zeta电位分析其表面电位为28.02 ± 1.15 mV,FTIR图谱显示出壳聚糖的特征谱带,发射光谱分析CS-Qdots 最大发射峰值在630nm。凝胶阻滞电泳显示纳米颗粒和DNA的比例大于10:1混合以后不再向正极泳动,激光共聚焦观察CS-Qdots能携带质粒pEGFP-C1在HepG2细胞内表达绿色荧光蛋白,小鼠活体成像中CS-Qdots在裸鼠移植瘤内有较强荧光成像信号。MTT试验显示,50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和 400μg/ml的CS-Qdots共孵育的细胞RGR分别为1、1、0.917和0.875,而相应浓度的Qdots孵育细胞RGR为1、0.85、0.621和0.326;浓度在100μg/ml 以上的Qdots量子点溶血率均大于5%,而CS-Qdots纳米颗粒的400μg/ml以内溶血率均小于5%。小鼠尾静脉注射CS-Qdots 72h急性毒性试验显示,与生理盐水对照组相比,没有明显的脏器病理损伤,肝肾功能正常,血细胞计数正常。结论:成功构建了荧光纳米颗粒CS-Qdots,它能有效转染基因在细胞内表达,具有较高的生物相容性,并可在体内外进行荧光成像,是可示踪基因的运送的纳米载体。关键词:量子点;荧光纳米颗粒;可示踪基因运送;生物相容性 相似文献
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目的:探讨免疫球蛋白转录因子2(ITF2)在卵巢癌中的表达及临床意义。方法:免疫组化法检测20例卵巢良性囊腺瘤、20例卵巢交界性囊腺瘤、40例卵巢恶性肿瘤中ITF2表达水平,并分析其表达量与临床病理参数之间的关系。选取卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910及永生化卵巢上皮细胞IOSE80,Western blot法检测细胞中ITF2表达水平,划痕实验检测卵巢癌细胞的转移能力。结果:卵巢癌与交界性肿瘤中ITF2蛋白阳性表达率明显高于卵巢良性囊腺瘤(55.0%、45.0%vs 25.0%,P0.05)。卵巢癌中ITF2表达水平与病理分级、FIGO分期有关(P0.05)。卵巢癌细胞株SKOV3与HO8910中ITF2表达量高于正常卵巢上皮细胞IOSE80,ITF2表达量更高的SKOV3细胞的转移能力明显高于HO8910细胞(P0.05)。结论:ITF2在卵巢癌组织中多呈高表达,且与肿瘤转移能力相关。提示ITF2蛋白可能参与卵巢癌的发生和发展,有望成为卵巢癌诊断与治疗的一个潜在生物学标记。 相似文献
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报告1例由革兰阳性厌氧菌大芬戈尔德菌导致的前十字韧带重建术后膝关节感染。患者在接受前十字韧带重建术后出现发热、膝关节疼痛、肿胀, 通过病史、体格检查、影像学检查和第二代测序技术确诊为前十字韧带重建术后大芬戈尔德菌感染。通过文献复习, 检索并分析了37篇大芬戈尔德菌感染性疾病的文献, 同时回顾了厌氧菌的鉴定要点、第二代测序技术的应用和前十字韧带重建术后感染的治疗现状。关节镜下前十字韧带重建术后感染发生率较低, 厌氧菌感染则更为罕见;厌氧菌培养困难, 利用第二代测序技术可辅助诊断。在优先保留重建韧带的基础上, 联合使用关节镜下清创引流冲洗术和敏感抗生素治疗为主。 相似文献
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目的:制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法:采用薄膜水化?机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫(suphurhexafluoride,SF6)气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶(simplex herpes virus thymidine kinase,HSV?TK)质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK?8和流式细胞(FCM)分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破(ultrasound?targeted microbubble destruction,UTMD)技术对BEL?7402和SMCC?7721细胞的杀伤作用。结果:电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT?PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV?TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK?8 和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL?7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性(P < 0.05)。结论:具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。 相似文献
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血脂蛋白(a)与类风湿关节炎患者心脑血管事件关系的初步探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨类风湿关节炎(RA)患者心血管事件与其血脂成分中脂蛋白(a)[Lp(a)]的关系。方法纳入2007年2月-2007年9月收住风湿免疫科各类疾病患者,测定其血脂全套、血沉、C反应蛋白、类风湿因子。结果393例患者中LD(a)升高(〉300mg/L)在RA患者(36/393)中更常见(P〈0.01),其他血脂成分各疾病无明显差异;RA患者心脑血管事件发生率高于其他患者,心脑血管事件发生率与Lp(a)浓度成正相关;糖皮质激素+慢作用药物(DMARDs)治疗2周后,RA患者甘油三酯、低密度脂蛋白、脂蛋白B浓度均较入院时下降(P〈0.05)。结论RA患者血清Lp(a)的异常升高可能是该病患者发生心脑血管事件的关键因素。 相似文献
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目的:探讨磁性纳米颗粒Fe3O4@PEI介导靶向自杀基因联合磁流体热疗对肝癌移植瘤的特异性杀伤作用。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的自杀基因p[HRE]AFP-HSVTK和肿瘤细胞成像报告基因载体p[HRE]AFP-Luc,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功。共沉淀法制备Fe3O4 纳米粒并以聚乙烯亚胺(PEI)修饰后得到磁性纳米颗粒Fe3O4@PEI,将其作为肿瘤基因治疗的载体和磁流体热疗的介质,并利用透射电镜、粒径仪、傅里叶转换红外光谱等对Fe3O4@PEI进行表征鉴定。利用小动物活体成像仪检测Fe3O4@PEI 系统运送报告基因p[HRE]AFP-Luc 至荷瘤裸鼠后的生物发光信号。p[HRE]AFP-HSVTK/Fe3O4@PEI作用于肝癌细胞后,以MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测凋亡细胞比例,动物实验验证体内肿瘤生长速度及瘤体质量抑制效果,并用透射电镜分析肿瘤组织的亚细胞结构。结果:成功构建磁性纳米颗粒Fe3O4@PEI以及重组载体p[HRE]AFP-HSVTK和p[HRE]AFP-Luc,经尾静脉注射Fe3O4@PEI运送的p[HRE]AFP-Luc后,活体成像系统显示仅能在裸鼠肿瘤组织检测到明显的成像信号,其主要器官病理组织分析无明显病理损伤。在体外肿瘤细胞杀伤试验中,联合治疗组细胞增殖抑制率分别高于磁流体热疗组和基因治疗组[ (76.02±7.33)% vs (42.31±4.28)%、(47.76±4.81)%,均P<0.05],联合治疗组瘤细胞的凋亡率高于单独热疗组和基因治疗组[ (34.05±3.41)% vs (14.41±1.55)%、(11.64±1.20)%,均P<0.01]。体内治疗实验显示,联合治疗组移植瘤体积增长明显减慢甚至下降,瘤块质量显著小于其他单独治疗组(P<0.05);瘤块细胞亚结构出现明显的凋亡形态。结论:自杀基因p[HRE]AFP-HSVTK对肝癌细胞具有选择性杀伤作用,Fe3O4@PEI可以作为有效的基因治疗载体和磁流体热疗的介质,其介导的肝癌靶向治疗联合磁流体热疗能特异地抑制肝癌移植瘤。 相似文献
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目的:探讨UF-1000i尿沉渣分析仪的真菌计数在真菌性尿路感染中的应用价值。方法:将237份无菌操作留取的中段尿标本进行真(细)菌培养鉴定,并在UF-1000i尿沉渣分析仪上进行真菌数量的检测和人工显微镜镜检,分析UF-1000i尿沉渣分析仪的诊断价值。结果:真菌培养阳性31例,以真菌培养结果为金标准,UF-1000i尿沉渣分析仪真菌计数AOC曲线下面积为0.997时,真菌最佳诊断临界值为85.10个/μl,用该值诊断尿路真菌感染的灵敏度为0.9678,特异度为0.9757,阳性预测值为0.8571,阴性预测值为0.9950;当诊断临界值为161.55个/μl时,诊断尿路真菌感染的特异度为100%,以此11.34%(27/237)的样本可以快速初筛为真菌性尿路感染;当临界值为30.15个/μl时,诊断尿路感染的阴性预测值为100%,以此83.54%(198/237)的样本可以快速排除真菌性尿路感染;人工显微镜检查23例阳性标本也为UF-1000i检测阳性。结论:UF-1000i尿沉渣分析仪检测真菌可作为临床真菌性尿路感染的快速筛检,结合人工显微镜检查可以快速确诊真菌性尿路感染。 相似文献
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目的:制备抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单抗西妥昔(C225)偶联的磁性白蛋白纳米球,对其表征并联合磁流体热疗观察其体外抑制肺癌细胞的效果。方法:化学共沉淀法制备Fe3O4磁性纳米粒,去溶剂化?交联法制备磁性白蛋白纳米球(magnetic albumin nanospheres,MANs),然后用双功能交联剂N?琥珀酰亚胺?3?(2?吡啶二硫代)丙酸酯[N?succinimidyl?3?(2?pyridyldithio)propionate,SPDP]将C225偶联其上制备C225?MANs。纳米球的形态、平均粒径、zeta电位、抗体结合率、含铁量、细胞靶向性及磁热动力学均被表征。最后采用CCK?8及流式细胞(flow cytometry,FCM)分析检测C225?MANs介导的体外双靶向磁流体热治疗肺腺癌细胞GLC?82的效果。结果:透射电镜显示制备的C225?MANs为球形,Fe3O4纳米粒被封装其内,Fe含量约2.0 mg/mL;平均水合粒径约为140 nm,带负电;在输出电流20 A、输出频率200 kHz的交变磁场作用下,不同Fe含量的C225?MANs能在 60 min内升温到39.3 ℃~52.0 ℃,且加热30 min后温度能保持恒定。FCM荧光检测显示抗体结合率为79.74%。免疫荧光实验和细胞MRI成像证实C225?MANs能够靶向GLC?82细胞。CCK?8与FCM分析显示双靶向联合治疗组的细胞增殖率明显低于其他治疗组,而凋亡率明显高于其他治疗组(P < 0.05)。结论:C225?MANs对肺腺癌细胞GLC?82具有良好的靶向效应,且双靶向磁流体热疗联合分子靶向治疗在体外能有效抑制肺癌细胞。 相似文献
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铜绿假单胞菌细菌生物膜形成及耐药性分析 总被引:3,自引:1,他引:2
目的建立铜绿假单胞菌细菌生物膜模型,比较浮游状态和生物膜中铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药性。方法用临床分离的铜绿假单胞菌孵育医用硅胶材料(硅胶导尿管)建立细菌生物膜,经银染法和扫描电镜观察生物膜的形成情况,测定6种抗菌药物对分离菌在浮游状态的最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及生物膜形成以后最小生物膜清除浓度(MBEc)。结果经银染法和扫描电镜观察,导尿管表面形成了细菌生物膜;抗菌药物对生物膜的MBEC为浮游状态下MIC和MBC的100~1000倍。结论体外建立细菌生物膜,并经银染法观察生物膜的形成是方便可行的;铜绿假单胞菌形成细菌生物膜以后对常用抗菌药物的耐药性远远高于浮游菌。 相似文献