新生大鼠实验性脑室周围白质软化模型的建立及评价

背景:脑室周围白质软化症由于缺乏公认有效的动物模型,影响了对脑室周围白质软化发病机制和干预的研究,因此建立可靠的动物模型来进行脑室周围白质软化症的研究很有必要。目的:制作2日龄SD大鼠脑室周围白质软化动物模型。设计:随机对照动物实验。单位:四川大学华西第二医院儿科。材料:选用36只生后2dSD大鼠,清洁级,雌雄不限,体质量6～8g,由四川大学华西实验动物中心提供,小鼠抗O4由Chemicon公司提供,兔抗胶质纤维酸性蛋白、兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白、兔抗髓鞘碱性蛋白、SABC免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供,兔抗小鼠IgG-FITC由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。方法:实验于2005-05/12在四川大学华西第二医院妇儿实验室完成。随机摸球法将大鼠分为脑室周围白质软化组和对照组,每组18只。脑室周围白质软化组行右侧颈总动脉结扎手术,体积分数为0.06氧气和体积分数为0.94氮气处理4h,分别在缺氧72h,14d及28d取6只处死。对照组只进行右侧颈总动脉分离术而不作结扎及缺氧处理,时间段与脑室周围白质软化组配对。①脑组织病理学观察:各组大鼠经心脏灌注固定行常规苏木精-伊红染色及电镜检查。②免疫组织化学检测:造模72h,采用胶质纤维酸性蛋白、β-淀粉样蛋白前体蛋白、小鼠抗O4免疫组化方法观察脑室周围白质软化组脑组织组织学变化;造模14d,采用兔抗髓鞘碱性蛋白免疫组化方法观察髓鞘碱性蛋白改变。③神经行为学检测:术后28d对两组小鼠进行悬吊试验(大鼠前腿抓住水平玻璃棒,离开桌面45cm记录大鼠掉下的时间,评分标准:1分:<10s;2分:10～30s;3分:30s～2min;4分:2～5min;5分:>5min)、倾斜板试验(大鼠倒置于45°斜面上,记录大鼠转为头向上>135°角度的时间)、旷场试验(无顶方盒箱底用墨线分成9个等分小格,大鼠置于中央小方格内,观察30s内活动情况,大鼠1/2以上身体从所在方格进入相邻方格记1分;大鼠后肢站立计1分;二者相加为其总分)、圆筒实验(将大鼠放入20cm×30cm×5cm的圆桶内,记录大鼠后腿站立时,前爪最初承重触及桶壁次数,以同侧触及次数/总触及次数×100%,对侧触及次数/总触及次数×100%作分析),记录各项评分并进行统计学处理。主要观察指标:①苏木精-伊红染色和电镜观察缺氧缺血后脑组织病理学改变。②免疫组化兔抗胶质纤维酸性蛋白、兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白、兔抗髓鞘碱性蛋白和小鼠抗O4观察缺氧缺血后相应细胞和组织改变情况。③神经行为学评价观察缺氧缺血后大鼠神经行为改变(各实验得分)。结果:实验大鼠36只均进入结果分析。①光镜和电镜病理学检查发现脑室周围白质软化组大鼠早期可见显著侧脑室周围脑白质损害,远期可见显著的脑室扩大,髓鞘减少。②脑室周围白质软化组大鼠脑白质胶质纤维酸性蛋白阳性细胞积分吸光度值高于对照组(6566.93±455.56,1069.32±791.71,P<0.05),胶质纤维酸性蛋白阳性细胞平均直径大于对照组[(11.69±0.97),(8.24±0.22)μm,P<0.05],兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白阳性细胞积分吸光度值高于对照组[(59304.07±6864.03),(15132.29±2455.52),P<0.05],兔抗髓鞘碱性蛋白阳性细胞积分吸光度值低于对照组[(21764.29±1981.63),(69174.72±3199.90),P<0.05],小鼠抗O4阳性标记的异常细胞数大于对照组[(54.08±11.99),(1.25±0.51)个,P<0.05]。③脑室周围白质软化组大鼠悬吊试验玻棒悬吊时间短于对照组[(1.27±0.14),(4.24±0.59)min,P<0.05],倾斜板试验转头时间长于对照组[(7.17±2.32),(3.27±0.82)s,P<0.05],旷场试验评分低于对照组[(3.68±0.82),(12.67±1.00)min,P<0.05],圆筒实验显示脑室周围白质软化组大鼠左侧肢体活动较右侧肢体减少[(19.25±2.77),(64.55±0.36)%,P<0.05]。结论:2日龄SD大鼠单侧颈总动脉结扎-缺氧模型病理组织学观察可见明显的脑白质损害,神经行为明显异常,符合脑室周围白质软化病理及行为改变,模型制作成功。     

新生儿奴卡氏菌病1例

病例 患儿男,6天。因发热2天,黄疸1天入院。入院前2天,无诱因发热,体温达39℃。肌注青霉素1天,体温未降并出现皮肤黄染。患儿系第1胎第1产,足月顺产,无胎膜早破。查体:体温38.8℃,脉搏180次/分,呼吸58次/分,反应好,呼吸急促、规则。皮肤轻度黄染,无皮疹。双肺无罗音,心腹（一）,四肢肌张力正常。入院诊断新生儿上感,败血症?予先锋霉素V,新青霉素Ⅱ抗感染。入院后2小时,患儿出现烦躁不安,下腹壁及大腿皮肤弥漫潮红。17小时后,全身出现大量红斑,中心见数个浅黄色粟粒疹,体温持续高热,急查血白细胞2.1×109 L,红细胞 4.4 ×1012/L血红蛋白164g/L,血小板76×109/L,中胜粒细胞81％,淋巴细胞19％,中性粒细胞胞浆中均含有较多中毒颗粒。立即改用菌必治、青霉素,氧哌嗪青霉素,     

2种机械通气模式在极低出生体重早产儿呼吸窘迫综合征中的呼吸支持作用

目的探讨高频振荡通气(HFOV)及同步间隙指令通气+压力支持通气(SIMV+PSV) 2种机械通气模式，对呼吸窘迫综合征(RDS)极低出生体重早产儿呼吸支持作用及安全性。 方法选择2017年10月至2019年10月，在四川大学华西第二医院进行气管插管-使用肺表面活性物质(PS)-拔管(InSurE)治疗失败的50例RDS极低出生体重早产儿为研究对象。采用回顾性分析法，按照机械通气治疗方法，将其分别纳入观察组(n＝25，采用HFOV通气模式治疗)和对照组(n＝25，采用SIMV+PSV通气模式治疗)。对2组受试儿的动脉血氧分压(PaO₂) 、动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)、氧合指数(OI)、机械通气治疗时间、不同分级RDS受试儿机械通气治疗时间、住院时间进行统计学分析。对2组受试儿颅内出血、支气管肺发育不良(BPD)、早产儿视网膜病变(ROP)、肺炎、新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)等RDS并发症发生率进行统计学比较。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求，所有受试儿监护人签署参加本研究知情同意书。 结果①2组受试儿性别构成比、胎龄、出生体重、生后时间、分娩方式构成比等一般临床资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。②机械通气治疗24 h后，观察组受试儿PaO₂、PaCO₂水平及OI明显高于、低于及低于对照组，分别为(90.2±13.8) mmHg (1 mmHg＝0.133 kPa)与(82.6±11.5) mmHg, (38.1±5.2) mmHg与(46.5±6.1) mmHg及10.6±2.7与17.3±3.9，并且差异均有统计学意义(t＝2.115、P＝0.040，t＝5.240、P<0.001，t＝7.484、P<0.001)。③观察组受试儿机械通气治疗时间、住院时间均短于对照组[(82.6±7.3) h vs (93.7±8.9) h，(27.5±2.5) h vs (31.5±3.0) h]，并且差异有统计学意义(t＝4.822、5.121，P<0.05)。④观察组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级RDS受试儿的机械通气治疗时间，均短于对照组，并且差异亦均有统计学意义( P<0.05)。⑤观察组受试儿机械通气治疗相关并发症发生率为4.0%(1/25)，低于对照组的32.0%(8/25)，并且差异有统计学意义(χ²＝4.878, P<0.05)。 结论对RDS极低出生体重早产儿采取SIMV+PSV通气模式治疗，较HFOV能显著改善其临床症状，减少机械通气治疗相关并发症发生率。SIMV+PSV通气模式治疗，是该类受试儿安全、有效的治疗方式之一。     

儿科重症监护病房医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎的临床研究

目的探讨儿科重症监护病房(PICU)医院获得性鲍曼不动杆菌肺炎(ABHAP)的发病情况、危险因素及耐药特点,探讨其预防和治疗措施。 方法选择2013年9月至2014年9月于四川大学华西第二医院PICU发生医院获得性肺炎(HAP)的91例患儿的临床病历资料为研究对象。根据患儿是否为ABHAP,将其分为研究组(n＝19)与对照组(n＝72)。采用回顾性分析方法分析所有患儿的年龄、性别、基础疾病、合并症、免疫功能、危重评分、发生HAP前于PICU住院时间、留置胃管情况、有创机械通气时间、抗菌药物使用情况、合并其他病原菌感染情况、药物敏感试验结果及治疗转归等。对HAP患儿病原菌分布情况,以及ABHAP发病情况、耐药特点及其相关危险因素进行统计学分析。两组患儿年龄、性别构成比、危重评分、基础疾病及合并症等基本临床资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。 结果①本研究91例HAP患儿,共计培养出159株病原菌,其中鲍曼不动杆菌(AB)为48株,97.9%(47/48)来自呼吸道分泌物标本。②48株AB对常用的第3、4代头孢菌素耐药率均>70%,对亚胺培南与哌拉西林/他唑巴坦耐药率均为70.8%(34/48),对氨苄西林/舒巴坦、左氧氟沙星耐药率分别为66.7%(32/48)、27.1%(13/48)。③研究组HAP患儿PICU住院时间≥15 d、有创机械通气时间≥10 d、广谱抗菌药物使用时间≥7 d及合并先天性心脏病比例,均分别显著高于对照组,并且差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论AB是PICU内HAP的重要病原菌之一,耐药性强。缩短住院时间及有创机械通气时间、合理使用抗菌药物,早期根治患儿先天性心脏病,预防肺炎反复发生,有利于预防和治疗ABHAP。     

过敏性紫癜患儿常见吸入物过敏原皮肤点刺试验结果分析

目的分析过敏性紫癜(HSP)患儿对常见吸入物过敏原阳性反应状况,为HSP的病因诊断及防治提供依据。方法选择2011年2月至2012年5月四川大学华西第二医院收治的110例HSP患儿为研究对象,采用丹麦ALK-ABELLO公司试剂,通过皮肤点刺试验对13种常见吸入物过敏原进行检测(本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,征得受试对象监护人知情同意,并与监护人签署临床研究知情同意书)。结果本组110例患儿中,共计107例检出阳性过敏原,阳性率为97.3%;阳性率最高的前3种过敏原分别是粉尘螨、屋尘螨和美洲大蠊,阳性率分别为93.6%,79.1%和63.6%;本组对3种及以上吸入物过敏的患儿共计101人,占总人数的91.8%;屋尘螨、热带螨、狗、艾蒿和霉菌Ⅰ等5种吸入物过敏原阳性率性别差异比较,差异有统计学意义(P<0.05);而HSP肾炎与常见吸入物过敏原间无相关关系。结论绝大部分HSP患儿存在常见吸入物过敏,减少吸入物过敏原的接触可能对HSP病情控制有一定作用。     

未成熟大鼠实验性脑室周围白质软化动物模型的建立及评价

目的建立2日龄SD大鼠脑室周围白质软化(PVL)动物模型,并进行评价。方法2日龄SD大鼠65只,随机分为PVL组和对照组。PVL组行右侧颈总动脉结扎手术,6%氧、94%氮混合气体处理4 h,分别在缺氧后72 h,14及28 d处死;对照组行假手术,不进行缺氧处理,时间段与PVL组配对。模型评价方法:常规HE染色及电镜检查;免疫组化学观察PVL72 h组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β淀粉样前体蛋白(-βAPP)、O4和PVL 14 d组髓磷脂碱性蛋白(MBP)改变;采用悬吊、倾斜板、旷场和圆筒试验对术后28 d大鼠进行神经行为学检测。结果HE染色和电镜显示PVL组早期右侧侧脑室周围脑白质损害,远期并脑室扩大,髓鞘减少。免疫组织化学显示PVL组大鼠白质GFAP和-βAPP阳性染色A值较对照组明显增强,GFAP阳性细胞平均直径较对照组增大;PVL组大鼠MBP阳性染色较对照组减弱;O4阳性标记的异常细胞数较对照组增多。神经行为学检测PVL组与对照组织比较有明显异常。结论2日龄SD大鼠右侧颈总动脉结扎-缺氧模型符合PVL病理及行为改变。     

新生儿奴卡氏菌病1例

病例患儿男,6天.因发热2天,黄疸1天入院.入院前2天,无诱因发热,体温达39℃.肌注青霉素1天,体温未降并出现皮肤黄染.患儿系第1胎第1产,足月顺产,无胎膜早破.查体:体温38.8℃,脉搏180次/分,呼吸58次/分,反应好,呼吸急促、规则.皮肤轻度黄染,无皮疹.双肺无罗音,心腹(一),四肢肌张力正常.     

高呼气末正压通气治疗高原肺水肿重症患儿的临床疗效观察

目的探讨高呼气末正压(PEEP)通气治疗高原肺水肿(HAPE)重症患儿的临床疗效。 方法选择2010年1月至2017年6月，于四川省甘孜藏族自治州人民医院儿童重症监护病房收治的42例接受同步间歇指令性通气(SIMV)联合PEEP通气治疗的HAPE重症患儿为研究对象。按照其入院顺序，将其随机分为低PEEP通气组(n＝21)与高PEEP通气组(n＝21)，2组患儿接受有创机械通气治疗时，呼吸机初始PEEP分别设置为<5 cmH₂O(1 cmH₂O＝0.098 1 kPa)、5～7 cmH₂O。2组患儿治疗前、后的心率，呼吸频率(RR)，血氧饱和度(SpO₂)，动脉血气分析指标，机械通气治疗时间，患儿住院时间及急性病生理与长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分比较，采用成组t检验，上述指标组内比较，采用配对t检验。本研究遵循的程序符合四川省甘孜藏族自治州人民医院人体试验委员会制定的标准，经过该伦理委员会批准(批准文号：2010-K-12)，并且与所有患儿监护人签署临床研究知情同意书。 结果① 2组患儿年龄、治疗前APACHE Ⅱ评分、HAPE发病时间等一般临床资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。② 42例患儿接受SIMV联合PEEP通气治疗后，40例患儿存活，2例放弃治疗。③机械通气治疗2 h后，高PEEP通气组患儿的心率、RR，均显著低于低PEEP通气组，而SpO₂显著高于低PEEP通气组，差异均有统计学意义(t＝4.062、P<0.001，t＝4.392、P<0.001，t＝－3.219、P＝0.006)。低PEEP通气组患儿治疗2 h后，心率、RR均显著低于治疗前，并且差异均有统计学意义(t＝24.646、20.125，P<0.001)。高PEEP通气组患儿治疗2 h后，心率、RR均显著低于治疗前，SpO₂则显著高于治疗前，并且差异亦均有统计学意义(t＝31.159、19.913、－8.022，P<0.001)。④机械通气治疗24 h后，低PEEP通气组、高PEEP通气组患儿的氧合指数[动脉血氧分压(PaO₂)/吸入氧气分数(FiO₂)]、血清pH值及动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)，均较组内治疗前明显改善，并且差异均有统计学意义(低PEEP通气组：t＝－17.374、－7.607、12.338，P<0.001；高PEEP通气组：t＝－13.645、－12.262、17.949，P<0.001)。机械通气治疗24 h后，高PEEP通气组患儿PaO₂/FiO₂显著高于低PEEP通气组，PaCO₂则显著低于低PEEP通气组，2组比较，差异均有统计学意义(t＝2.820、P＝0.013，t＝3.230、P＝0.006)。⑤高PEEP通气组患儿机械通气治疗时间、住院时间及治疗后APACHEⅡ评分分别为(36.7±2.8) h、(14.0±0.4) d、(16.9±7.9)分，均显著低于低PEEP通气组的(40.2±4.0) h、(18.4±0.5) d、(18.6±2.2)分，2组比较，差异均有统计学意义(t＝2.316、P＝0.035，t＝5.985、P<0.001，t＝2.499、P＝0.025)。 结论采用SIMV联合PEEP通气模式治疗HAPE重症患儿效果良好，采取高PEEP通气(呼吸机初始PEEP为5～7 cmH₂O)模式，对该病患儿相对更为安全，可更好地提高HAPE重症患儿治疗疗效。     

谷氨酸受体2和钙离子在新生大鼠脑室周围白质软化症发病机制中的作用探讨

目的：观察α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸（α-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionie acid，AMPA）受体亚单位谷氨酸受体2（GluR2）在2日龄缺氧缺血新生鼠脑白质中的表达，并检测脑白质细胞内游离Ca2+浓度在缺氧缺血后不同时间点的变化及其意义。方法：建立2日龄SD大鼠缺氧缺血脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia, PVL）模型，分别应用荧光定量PCR和Western Blot检测脑白质缺氧缺血后12，24，48 h和72 h GluR2 mRNA和蛋白表达的变化；用Furo 2/ AM荧光探针和双波长荧光分光光度计分别检测脑白质细胞内游离Ca2+浓度。结果：与对照组相比，PVL组大鼠脑白质GluR2 mRNA 和蛋白含量在缺氧缺血后24 h开始降低，并持续降低至72 h（P<0.05）； PVL组大鼠脑白质细胞内游离Ca2+浓度在缺氧缺血后12 h开始升高，持续增高至72 h（P<0.05）。结论：GluR2表达减少可能导致脑白质细胞内钙离子超载，引起细胞损害。［中国当代儿科杂志，2007，9（4）：313-316］     

关于“生长抑素对重症消化道术后婴儿胃肠激素水平和临床预后的影响:一项前瞻性随机对照研究”一文的专家点评北大核心CSCD

“生长抑素对重症消化道术后婴儿胃肠激素水平和临床预后的影响:一项前瞻性随机对照研究”这篇文章发表在本刊本期第995~999页。该文被评为本期优秀论文。本刊邀请了四川大学华西第二医院李德渊教授为该文做了点评,供读者阅读参考。