血清TMT标记定量蛋白质组学对多囊卵巢综合征病因研究

目的 通过应用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)联合液相色谱-串联质谱(liquid chromatography/tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术、差异表达蛋白及其相关生物通路对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)患者病因研究。 方法 本研究纳入20例PCOS患者作为PCOS组,18例正常女性作为对照组。通过TMT联合LC-MS／MS检测所有研究对象的空腹血清样本,对数据进行统计学和生物信息学分析。 结果 鉴定了38个差异表达蛋白质,其中21个蛋白在PCOS中表达上调(FC≥1.2,P＜0.05),17个在PCOS中表达下调(FC≤0.83,P＜0.05)。采用京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和Reactome对差异表达蛋白进行富集分析,分别富集到18个和78个通路。将两个数据库富集分析结果整合,均发现补体级联反应的富集通路,共同涉及的差异表达蛋白为甘露糖结合蛋白(mannose-binding protein,MBL)。 结论 PCOS患者体内可能存在补体系统的过度激活,差异蛋白MBL可能是其中的关键致病因子。     

加昧酸枣仁汤不同剂型中菝葜皂甙元含量测定

目的测定加味酸枣仁汤两种不同剂型中菝葜皂甙元的含量。方法紫外分光光度法测定加味酸枣仁汤不同剂型菝葜皂甙元含量。结果加味酸枣仁汤煎剂中菝葜皂甙元含量为8．76mg／g，免煎剂中为61．273mg／g。平均回收率为101．48％（RSD=1．7％）。结论采用紫外分光光度法测定复方中菝葜皂甙元含量的方法有简便快捷、准确、重现性好等优点。实验结果表明该法测得加味酸枣仁汤免煎剂中菝葜皂甙元含量明显高于煎剂,说明免煎颗粒有效成分提取较完全。     

加味酸枣仁汤不同剂型中菝葜皂甙元含量测定

目的测定加味酸枣仁汤两种不同剂型中菝葜皂甙元的含量。方法紫外分光光度法测定加味酸枣仁汤不同剂型菝葜皂甙元含量。结果加味酸枣仁汤煎剂中菝葜皂甙元含量为8.76mg/g,免煎剂中为61.273mg/g。平均回收率为101.48(%RSD=1.7%)。结论采用紫外分光光度法测定复方中菝葜皂甙元含量的方法有简便快捷、准确、重现性好等优点。实验结果表明该法测得加味酸枣仁汤免煎剂中菝葜皂甙元含量明显高于煎剂,说明免煎颗粒有效成分提取较完全。     

miR-145靶向Six1对胃癌侵袭的影响及分子机制

目的探讨微小RNA-145（mill-145）、Six1在胃癌组织及胃癌细胞株中的表达,miR-145靶向Six1对人胃癌细胞株侵袭的影响及分子机制。方法选取2017年1月至11月长沙市第四医院经胃镜＋病理组织学确诊的进展期胃癌患者60例,采用实时荧光定量PCIR（qRT—PCR）检测miR-145mRNA及Six1在60例胃癌及配对癌旁组织中的表达,并分析其相关性。在胃癌细胞株MKN-45、BGC．823和SGC-7901中转染miR-145模拟物,qRT-PCR法检测3种胃癌细胞株中miR-145mRNA相对水平,选取miR-145mRNA表达水平最高的SGC-7901胃癌细胞株行后续实验。设模拟物组（转染mill-145模拟物）、NC组（转染miR-145阴性对照）和空载体组（不加入任何寡聚核苷酸）,采用Transwell实验检测胃癌细胞侵袭能力;小管形成实验验证促血管形成能力;Westernblotting法检测胃癌细胞株SGC-7901下游蛋白Six1、上皮钙黏着蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（vimentin）表达水平。MirTrap系统及荧光素酶报告实验验证miR-145是否靶向Six1基因。结果胃癌组织及癌旁组织中miR-145mRNA分别为0．579±0．086、1．009±0．121,差异有统计学意义（t=-22．498,P〈0．001）;Six1分别为2．516±0．208、1．041±0．227,差异有统计学意义（t=37．119,P〈0．001）;miR-145mRNA与Six1表达呈负相关（r=-0．728,P〈0．001）。过表达miR-145后,模拟物组、NC组和空载体组中,胃癌细胞穿膜细胞数分别为48．550±3．716、82．800±3．797、87．467±8．023,差异有统计学意义（F=87．789,P〈0．001）,模拟物组与Nc组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）。模拟物组、NC组和空载体组中,人脐静脉内皮细胞的成管数分别为24．333±1．211、34．167±2．041、36．500±3．209,差异有统计学意义（F=47．103,P〈0．001）,模拟物组与Nc组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）。模拟物组、NC组和空载体组中,胃癌细胞SGC-7901中Six1表达量分别为1．392±0．072、2．426±0．099、2．371±0．079,差异有统计学意义（F=289．517,P〈0．001）,模拟物组与NC组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）;模拟物组、NC组和空载体组中,E．eadherin表达量分别为4．001±0．132、2．714±0．181、2．653±0．218,差异有统计学意义（F=106．572,P〈0．001）,模拟物组与NC组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）;模拟物组、NC组和空载体组中,vimentin表达量分别为1．634±0．132、3．349±0．102、3．501±0．185,差异有统计学意义（F=389．032,P〈0．001）,模拟物组与NC组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）。MirTrap系统验证模拟物组、NC组和空载体组中靶标Six1mRNA水平分别为1．101±0．097、0．582±0．037、0．573±0．032,差异有统计学意义（F=138．922,P〈0．001）,模拟物组与NC组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）。荧光素酶报告实验Six1野生型重组载体组双荧光比值,模拟物组、NC组和空载体组分别为7．324±0．415、10．755±0．481、10．430±0．309,差异有统计学意义（F：129．345,P〈0．001）,模拟物组与NC组及空载体组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）。而模拟物组、NC组和空载体组Six1突变型重组载体组双荧光比值分别为10．938±0．091、11．077±0．126、11．028±0．205,差异无统计学意义（F=1．318,P=0．297）。MirTrap系统及荧光素酶报告实验验证miR-145靶向Six1基因。结论miR-145mRNA及Six1在胃癌及癌旁组织中差异表达,呈负相关;miR-145通过靶向Six1基因抑制胃癌细胞侵袭、血管形成及上皮问质转化。     

人乳头瘤病毒疫苗接种不良反应及相关因素分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)疫苗接种致不良反应发生的特点及一般规律,为HPV疫苗的安全推广提供依据。方法2018年1月至2018年12月,对在我院接种二价或四价HPV疫苗的女性,进行问卷调查,并且观察接种后半个月内不良反应发生情况。结果732例HPV疫苗接种对象中,以已婚女性、城市女性为主,近1年已婚女性完成宫颈癌筛查和人乳头瘤病毒检查的人数不足50%。不良反应以局部不良反应为主,其次为头晕头痛、消化道症状和发热。未发生严重不良反应。结论HPV疫苗接种后临床安全性较好。建议制定相应预防措施,减少不良反应的发生。同时,应加强宣教,消除群众对于疫苗接种负面影响的顾虑,使其充分了解疫苗接种的价值和意义。     

膜联蛋白A2对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响

目的:研究膜联蛋白A2(ANXA2)对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响.方法:采用siRNA技术沉默ANXA2在SW620细胞中的表达,实验分为干扰组、对照组和野生组,RT-PCR法检测各组ANXA2mRNA水平,Westem blot法检测各组ANXA2、纤维蛋白溶酶(PL)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,Transwell侵袭实验检测各组SW620细胞穿膜能力.结果:干扰组与对照组、野生组相比,ANXA2 mR-NA水平、ANXA2、PL、MMP-1、VEGF蛋白表达及SW620穿膜细胞数差异均有统计学意义(P＜0.05),而对照组和野生组相比上述各指标均无统计学差异.ANXA2蛋白和PL、MMP-1、VEGF蛋白水平、穿膜细胞数呈正相关(P＜0.05).结论:沉默ANXA2基因后可能通过下调PL、MMP-1及VEGF蛋白的表达,抑制SW620细胞侵袭迁移能力起到抗肿瘤作用.