EICU呼吸机治疗急性脑出血伴呼吸衰竭的临床价值

目的探讨急诊危重监护室(EICU)呼吸机对急性脑出血合并呼吸衰竭患者病死率的临床价值。方法将EICU收治的71例急性脑出血合并呼吸衰竭患者分为两组。成功组17例,病死组54例,均经口气管插管连接呼吸机辅助呼吸。通气模式:CAV PEEP、同步间断压迫性通气(SIMV) 呼气末正压(PEEP)。PEEP值:5～10cmH2O(1cmH2O=0.098kPa)。其余按急性脑出血常规治疗:降低颅压、脱水、营养脑细胞、对症治疗。观察两组平均动脉压、APACHEⅡ评分值、动脉血气变化。结果成功组和病死组通气前与通气后平均动脉压、APACHEⅡ评分值、动脉血气相互比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。成功组与病死组患者通气前、通气后指标分别相互比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论EICU呼吸机对急性脑出血合并呼吸衰竭患者治疗显示了有益作用,患者通气前平均动脉压、APACHEⅡ评分、动脉血气明显影响患者的成功率。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因8的克隆化研究

目的 丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白5A(NS5A)是一种具有显著反式激活作用的病毒蛋白质。为了探索HCV NS5A病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因，我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术对于转染和未转染的肝母细胞瘤细胞系HepG2进行分析。研究结果将有助于阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCV NSSA表达质粒peDNA3．1(-)-NSSA转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，提取mRNA并进行SSH分析。对于所获基因片段序列分析表明，其中之一为新型基因片段，与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性，利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对，进行电子拼接。根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列，确定新型基因序列。结果 结果从HepG2细胞提取总RNA，多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列，测序证实，命名为NSSATP8在GenBank中注册，注册号为．AF529369.NSSATP8基因的编码序列全长为1449(nt)，编码产物由483个氨基酸残基(aa)组成。结论 HCV NS5A反式激活新型靶基因NSSATP8筛选与克隆，进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

乙型肝炎病毒E抗原反式激活靶基因的克隆化研究

目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术(bioinfonnatics)筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)e抗原(HBeAg)反式激活新型靶基因。方法 以HBeAg表达质粒pcDNA3．1(-)-HBeAg转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交(SSH)分析。对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的KozaK规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列。从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RTPCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,命名为HBeAgTP,在GenBank中注册,注册号为AY423624。结果 HBeAg TP基因的编码序列全长为324个核苷酸(nt),编码产物由107个氨基酸残基(aa)组成。结论 HBeAg反式激活新型靶基因HBeAg TP的筛选与克隆,为进一步研究。HBeAg在体内激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

应用抑制性消减杂交技术筛选NS5ATP5的上调基因

目的 通过抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A反式激活蛋白5(NS5ATP5)的反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，筛选HCV NS5ATP5蛋白反式激活靶基因。方法 以HCV NSSATP5表达质粒pcDNA3．1(-)-NSSATP5转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为对照；制备转染后的细胞裂解液，从中提取mRNA并合成cDNA，经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果 成功构建人HCV NSSATP5蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到91个白色克隆，进行菌落PCR分析，其中86个均得到100～1000bp插入片段。挑取32个插入片段测序分析。其中包括结缔组织生长因子、纤维连接蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白1等重要的基因。结论 成功筛选出HCV NS5ATP5的上调基因。     

Effects of Serum Containing Chinese Medicine Sanpi Pingwei (散癖平胃) Formula on Proliferation and Apoptosis of Human SGC-7901 Cells

Objective:To investigate the effects of serum containing Chinese medicine(CM) Sanpi Pingwei(散癖平胃,SPPW) formula on the proliferation and apoptosis of human SGC-7901 cells and the possible mechanism.Methods:Serum containing CM SPPW formula(SPPW serum) was prepared by a serum pharmacology method.Human SGC-7901 cells were incubated with SPPW serum at three different concentrations and with the anticancer drug 5-fluorouracil(5-FU),respectively.Cell proliferation was assessed by MTT assay,and cell apoptosis was detected by flow cytometry assay.Real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) and Western blot assay were employed to confirm the expressions of Bcl-2,Bax and p53 in SGC-7901 cells at mRNA and protein levels,respectively.Results:SPPW serum suppressed the proliferation of SGC-7901 cells in a time- and dose-dependent manner.The colony forming rate of negative control was 48.2%,while those in the three SPPW serum groups and the 5-FU group decreased significantly (P<0.01).The number of colony forming units in the SPPW high dosage group was significantly smaller than that in the 5-FU group(P<0.01).MTT assay showed that SPPW serum restrained the proliferation of SGC-7901 cells,and the inhibition rate increased significantly in a dose-dependent manner.Annexin V/PI Assay suggested that SPPW serum induced the apoptosis of SGC-7901 cells significantly.RT-PCR and western blot assay indicated that SPPW serum upregulated the protein and mRNA expression levels of Bax and p53 in SGC-7901 cells,but downregulated the protein and mRNA expressions of Bcl-2.Conclusions:SPPW formula inhibits the proliferation of SGC-7901 cells in vitro and induces the cell apoptosis.It plays an anticancer role by regulating the expressions of Bax,p53 and Bcl-2 in SGC-7901 cells.     

TRPC6对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响

目的 研究经典型瞬时受体电位6（transient receptor potential canonical 6,TRPC6）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs）增殖、侵袭和凋亡能力的影响. 方法 以RPASMCs为研究对象,构建TRPC6的siRNA以及过表达载体,转入细胞后采用MTT法、Transwell小室法、流式细胞法观察其对RPASMCs增殖、侵袭及凋亡能力的影响. 结果 增殖实验结果表明TRPC6过表达组可促进RPASMCs增殖,其OD值为1.13 ±0.09,TRPC6-siRNA组则可抑制RPASMCs增殖,其OD值为0.42 ±0.03;细胞侵袭结果表明TRPC6过表达组可促进RPASMCs侵袭,穿膜细胞数为108±7,TRPC6-siRNA组则可抑制RPASMCs侵袭,穿膜细胞数为38 ±3;流式细胞仪检测发现TRPC6对PASMCs凋亡几乎无影响.结论 TRPC6可显著促进RPASMCs的增殖和侵袭,在肺动脉高压的发生和发展中起着重要作用,对进一步研究TRPC6在肺动脉高压中的作用及机制奠定了基础.     

乙型肝炎病毒对c-fos基因表达调节的影响

0 引言癌基因(oncogene)是一类编码关键性调控蛋白的正常细胞基因,在正常情况下,不表达或只有有限表达,又称原癌基因(proto-oncogene).当受到理化等因素刺激时,他们可以异常表达,导致细胞的增生、分化或癌变. 众所周知,乙型肝炎病毒(HBV)不仅可引起急慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化和肝细胞癌(HCC)的发生及发展密切相关.许多实验已证实肝细胞癌变过程涉及多种原癌基因的激活和突变,其中HBV对原癌基因c-fos 的激活及表达调节也越来越受到关注.通过对HBV与c-fos之间表达调节的阐述,有助于进一步了解HBV导致HCC的分子学机制.     

乙型和丙型肝炎病毒对c-jun基因表达调节的影响

0 引言乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)不仅可引起急慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化和肝细胞癌(HCC) 的发生及发展密切相关.HCC是严重危害人民健康的疾病之一,在对HCC的致病机制的探索中,原癌基因也成为研究的的重点.研究发现,HBV和HCV均能调节原癌基因c—jun的激活与表达,从而导致肝细胞异常增