人绒毛膜促性腺激素避孕疫苗的研究进展

人绒毛膜促性腺激素避孕疫苗的研究进展曹佐武潘善培刘学高人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）是人类受孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，在妊娠早期对维持黄体分泌孕酮有重要作用。因此，ｈＣＧ被认为是发展避孕疫苗较理想的靶抗原。一、对ｈＣＧ结构的新认识ｈＣＧ与...     

小鼠白细胞介素5真核表达质粒pVAX-1mIL-5的构建及其体外表达

目的构建能表达小鼠白细胞介素5(mIL-5)的质粒并鉴定其蛋白的体外瞬时表达。方法以含有mIL-5cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得小鼠IL-5基因片段后,定向插入真核表达载体pVAX1中,获得重组表达质粒pVAX1mIL-5。通过双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。采用间接免疫荧光技术检测pVAX1mIL-5在HeLa细胞的瞬时表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,插入片段正确,间接免疫荧光检测表明其可以在HeLa细胞中瞬时表达。结论构建的真核表达质粒pVAX1mIL-5可以在HeLa细胞中瞬时表达小鼠IL-5的蛋白,为下一步利用IL-5作为DNA疫苗黏膜免疫佐剂研究奠定了基础。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外系统的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外分裂与生长的影响，将２１０个小鼠２细胞期胚胎与传代的人输卵管上皮细胞进行共培养，另以１４５个胚胎培养在单纯的培养液中作为对照。共培养的胚胎有８９．０％发育到桑椹胚，８７．１％形成囊胚，而对照组仅为６３．４％和４９．０％（Ｐ〈０．０１）。共培养胚胎发育速度也较对照组快，且发育过程中，共培养胚胎出现碎片及不规则分裂率明显低于对照组。提示人输卵管上皮细胞共培养系统可     

不同人群血清中抗透明带抗体的检测

为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透明带抗体阳性率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,不孕组阳性率 15 % ,与其他组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。ELISA检测到的透明带抗体阳性血清不与人卵巢组织切片中的透明带产生肉眼可见的沉淀反应。除了早孕组和老龄妇女 ,任何年龄阶段的女性均可出现抗透明带自身抗体 ,鉴于这些抗体不引起周期紊乱现象 ,却可能阻止受精 ,这为透明带作为避孕疫苗候选抗原的安全提供理论依据     

人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建

目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒（Human cycomegalovirus,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段-gp52C末端和pp150C末端的DNA序列，插入pPIC9K质粒，构建适于酵母表达系统的重组表达质粒，方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp52和磷酸蛋白pp150C末端的cDNA序列，设计出2对引物，利用PCR的方法，以病毒培养液上清为模板，进行二轮PCR扩增，把两个目的基因串联在一起，将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接，然后导入大肠杆菌DH5α筛选出阳性转化子，并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子，结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因，PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。结论 重组表达质粒成功地克隆了目的基因片段。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外分裂与生长的影响，将２１０个小鼠２细胞期胚胎与传代的人输卵管上皮细胞进行共培养，另以１４５个胚胎培养在单纯的培养液中作为对照。共培养的胚胎有８９．０％发育到桑椹胚，８７．１％形成囊胚，而对照组仅为６３．４％和４９．０％（Ｐ＜０．０１）。共培养胚胎发育速度也较对照组快，且发育过程中，共培养胚胎出现碎片及不规则分裂率明显低于对照组。提示人输卵管上皮细胞共培养系统可以促进胚胎体外发育，能在体外获得数量较多的高质量胚胎。     

Galectin-3在雌性小鼠生殖系统中的表达及脂多糖的影响

目的：研究galectin-3在雌性小鼠生殖系统的表达情况,利用小鼠生殖道感染模型研究galectin-3在女性生殖道感染过程中的可能作用。 方法: 采用RT-PCR的方法初步鉴定小鼠生殖系统各组织中的galectin-3 mRNA的表达水平,通过阴道黏膜注射LPS不完全弗氏佐剂乳液建立小鼠的生殖道感染模型,免疫组化对galectin-3蛋白在雌性小鼠生殖系统的表达进行定位分析。结果: 在正常小鼠的子宫、阴道、输卵管及卵巢中都能够检测到galectin-3 mRNA的表达。Galectin-3蛋白主要表达在生殖道黏膜的上皮细胞表面和子宫腺。经LPS刺激后,galectin-3蛋白在阴道、子宫颈及子宫体的表达水平提高(P＜0.05),尤其是刺激后24 h子宫颈中galectin-3的表达量增加最多(P＜0.01)。结论：LPS刺激能增加小鼠生殖道中galectin-3的表达,galectin-3在生殖道抗感染中可能发挥重要的作用。     

磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶与精子成熟

磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)基因位于人类 19号染色体上 ,是第二个被鉴定的细胞内硒依赖的谷胱甘肽过氧化物酶 ,是一种相对分子质量 (Mr)为 190 0 0的单体酶 ,它通过催化脂质过氧化物的减少来保护细胞不受脂质过氧化物介导的损害。PHGPx曾被认为是一种保护质膜的普通的抗氧化酶 ,现在认为其具有多种功能 ,如抑制脂肪氧化酶和在人类精子成熟过程中变成一种线粒体内囊的无酶活性的结构蛋白成分 ,即PHGPx在精子细胞内以可溶性过氧化物酶的形式存在 ,而在成熟精子以无活性、被氧化交叉结合、不可溶性的结构蛋白的形式持续存在     

人精子顶体反应3种检测方法的比较与评价

目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法。方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计。结果:经考马斯亮蓝和金霉素染色后,发生顶体反应的精子和没有发生顶体反应的精子均有明显的形态差异;经考马斯亮蓝染色、金霉素荧光染色和酸性磷酸酶测试法检验,孕酮诱导组与阴性对照组的精子顶体反应率均有明显差异(P<0.05)。结论:3种方法均可作为顶体反应的检测手段,但考马斯亮蓝染色更为简便和稳定。     

蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用

目的建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法.方法利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A280和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量.结果洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X＝Y/A进行估算,X为待测蛋白含量(mg),Y为洗脱峰面积(mAU×ml),A为1 g/L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU).将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Lowry法测定结果相似.结论该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值.