人血液酪氨酸蛋白激酶的研究——(Ⅲ)1—异丙基—6—氨基—噻吩骈[3,4—d]嘧啶—2,4—二酮对人淋巴细胞膜TPK活性的抑制作用

文报道了人工合成的1—异丙基—6—氨基—噻吩骈〔3,4—d〕嘧啶—2,4—二酮对人淋巴细胞膜TPK活性的抑制作用,IC_(50)约为300μmol/L。动力学实验结果表明,该化合物对TPK的抑制作用与ATP呈竞争性,而与多肽底物Poly(Glu—Ala—Tyr)_(6;3:1)呈非竞争性。放射自显影结果进一步证实了该化合物对TPK的抑制作用。     

大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区HSP90的表达

目的观察大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区热休克蛋白90（HSP90）的表达。方法应用免疫印迹法观察大鼠脑缺血/再灌注后不同时间点海马CA1区HSP90的表达。结果缺血/再灌注30 min后HSP90的表达开始增高,6 h达最高峰,持续升高至第3天,6 h后HSP90的表达与对照组相比较有显著性差异（P〈0.05）。结论大鼠脑缺血/再灌注早期可诱导海马CA1区HSP90的合成及表达增加,表明HSP90参与了脑缺血有关的病理及生理过程。     

大鼠PDZ1-FLAG的亚克隆及pcDNA3.1载体的构建

目的亚克隆大鼠PDZ1-FLAG基因片段并构建pcDNA3.1载体.方法以pAdTrack-CMV-PDZ1为模板,采用PCR法获得PDZ1-FLAG的双链DNA;与pcDNA3.1载体用T4 DNA连接酶连接;连接产物转化大肠杆菌JM109进行筛选、序列测定.结果①得到了PDZ1-FLAG的双链DNA;②酶切鉴定能观察到PDZ1-FLAG和pcDNA3.1两条带;③PDZ1-FLAG测序图谱与文献报道完全一致.结论获得了含目的基因PDZ1-FLAG的pcDNA3.1载体.     

论心理干预技术对当前我国解决突发公共事件中的重要性探讨

随着我国社会经济的高速发展，人民群众生活水平的不断提高，以及我国法制建设的不断推进，一些过去并不突出的社会矛盾也逐步突显出来，特别是最近几年来，我国各个地方先后发生了多起突发公共事件，其中个别的还酿成了重大事件，在国内外造成丁严重的负面影响。在事后分析中发现，很多事件如果在开始时采取及时有效的措施，完全可以将事件消灭在萌芽之中，而如何及时有效的解决突发公共事件.     

两类钙通道拮抗剂对缺氧大鼠海马脑片Ca2+/CaM PK Ⅱ 活性的影响

用离体孵育的大鼠海马脑片模型，研究了两类钙通道拮抗剂对缺氧海马脑片Ca2 /CaM PKⅡ活性的影响。结果如下：(1)缺氧30min导致大鼠海马脑片Ca2 /CaM PKⅡ活性降至对照组的16.4%；(2)100μmol/L氯胺酮可部分拮抗缺氧导致的酶活性下降，使之恢复至对照组的40.6%；(3)10μmol/L苄丙咯可使缺氧导致的酶活性下降恢复至对照组的35.8%；(4)15μmol/L苄丙咯和50μmol/L氯胺酮联合用药可产生协同作用，使缺氧导致的酶活性下降恢复至对照组的63.8%。由此得出结论：缺氧对海马脑片Ca2 /CaM PKⅡ活性的抑制作用与NMDA受体门控的钙通道和Na /Ca2 交换通道异常开放有关。     

异氟醚对大鼠脑缺血／再灌注诱导c—Jun磷酸化的影响

目的观察大鼠脑缺血／再灌注后c—Jun蛋白磷酸化情况以及异氟醚对其的影响。方法四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型。随机分为假手术组、直接脑缺血／再灌注组、吸入2h1．5MAC异氟醚脑缺血／再灌注组和吸入纯氧2h脑缺血／再灌注组,全脑缺血15min后分别再灌注6h。再灌注6h的大鼠进行磷酸化c—Jun（P—c—Jun）的免疫印迹和免疫组化检测。结果缺血前吸入1．5MAC异氟醚组大鼠的c—Jun磷酸化水平明显低于直接脑缺血／再灌注组和吸入纯氧2h脑缺血／再灌注组（P〈0．05）。结论异氟醚抑制c—Jun蛋白的磷酸化可能是其对大鼠缺血／再灌注性脑损伤产生保护作用的机制之一。     

HPK1在缺血性脑损伤中的作用

目的观察HPK1对sD大鼠全脑缺血／再灌注后海马CA1区锥体细胞的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15min后分别灌注30min、3h、6h、24h、3天和5天。大鼠随机分为假手术组、缺血／再灌注组、缺血／再灌注给药组和缺血／再灌注溶剂对照组。缺血／再灌注给药组再分为2组,分别脑室注射100g／L的HPK1 AS—ODNs、HPK1 MS—ODNs,每24h注射1次,连续3天,在最后一次注射24h后行四动脉结扎全脑缺血。使用免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡。结果在大鼠海马神经元中有HPK1的表达,脑室注射AS—ODNs大鼠海马CA1区存活锥体细胞明显增多。结论HPK1反义寡核苷酸对缺血／再灌注引起的海马神经元凋亡具有保护作用。     

多巴胺对大鼠海马和新纹状体脑片Ca^2＋／CaM PKⅡ活性的影响

目的 研究多巴胺（ＤＡ）对Ｃａ＾２＋／ＣａＭ ＰＫⅡ活性的影响。方法 采用大鼠海马、新纹状体脑片体外培养模型，以＾３２Ｐ掺入法测定Ｃａ＾２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性。结果（１）单纯外源性ＤＡ引起Ｃａ＾２＋／ＣａＭ ＰＫⅡ活性显著下降；海马、新纹状体脑片引起最大抑制作用的ＤＡ浓度分别是５００、１０μｍｏｌ／Ｌ。（２）酶活性随ＤＡ作用时间的延长逐渐下降；海马脑片１００μｍｏｌ／Ｌ ＤＡ作用２０ｍｉｎ酶活性方     

暂短性全脑缺血再灌注大鼠中p53蛋白表达

用微型动脉夹夹紧双侧颈总动脉和电凝永久性阻断双侧椎动脉 ,建立大鼠暂短性全脑缺血再灌注模型 ,用抗 p5 3的多克隆抗体以免疫印迹法检测海马组织中p5 3蛋白表达的变化 ,发现缺血再灌注后海马组织中p5 3蛋白含量升高 ,并有时间依赖性 ,3d达到峰值 ,4 d迅速下降暂短性全脑缺血再灌注大鼠中p53蛋白表达@袁红花$徐州医学院!徐州221002 @张光毅$徐州医学院!徐州221002脑缺血模型;;P53;;免疫印迹法     

兴奋毒性对海马脑片Ca~(2 )/CaM PK Ⅱ活性的影响

用离体孵育的大鼠海马脑片模型，研究兴奋毒性与Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩＩ活性的关系。结果表明，外源性谷氨酸或ＮＭＤＡ均可抑制Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩＩ的活性，此活性的抑制可被ＭＫ８０１完全拮抗，而ＤＮＱＸ却无明显拮抗作用；无胞外Ｃａ２＋时，谷氨酸导致的酶活性抑制程度不如有胞外Ｃａ２＋时显著；无胞外Ｍｇ２＋时，谷氨酸导致的酶活性抑制程度比有胞外Ｍｇ２＋时显著。结果提示兴奋毒性对Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩＩ活性的抑制与ＮＭＤＡ受体介导的兴奋毒性有关