亚砷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对MAPK／ERK信号通路的影响

目的探讨亚砷酸对肺腺癌A549细胞凋亡、MAPK／ERK信号通路的影响及其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验组采用不同浓度(1、3、6 μmol／L)亚砷酸处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体,Western blotting检测Bcl 2、Bax、p53、Caspase 3及MAPK／ERK信号通路相关蛋白表达水平,RT PCR检测PCNA、CDK2、CyclinA1表达量。结果实验组肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡率、凋亡小体数量随着亚砷酸处理时间延长而降低,且存在剂量反应效应(P<005);Western blotting结果显示，实验组肺腺癌A549细胞中Bax、p53、Caspase 3、p JNK／JNK及p38蛋白水平高于对照组,而Bcl 2、p ERK／ERK蛋白含量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005);RT PCR结果显示实验组肺腺癌A549细胞PCNA、CDK2、CyclinA1表达量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005)。结论亚砷酸可以通过下调细胞周期基因水平、上调细胞凋亡相关因子含量、降低MAPK／ERK信号传导,来诱导肺腺癌A549细胞凋亡。     

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的 运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法.方法 通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测.结果 刺激组50 mW/cm2和60 mW/cm2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求.结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法.     

近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

目的：建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法：选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1% I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验：测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果：体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养 36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。 ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54) μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论：ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。     

低强度脉冲超声对人脐带干细胞体外增殖和成软骨分化的影响

目的:研究低强度脉冲超声(LIPUS)对体外培养人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)增殖和成软骨分化的影响。方法:将P_4代h UCMSCs随机分为对照组(C组)L30组(30m W/cm~2)、L_(50)组(50m W/cm~2)、L_(80)组(80m W/cm~2),对照组予超声假照处理,各LIPUS刺激组分别刺激5、10、20min/d。LIPUS刺激后观察细胞生长情况,连续刺激1—5天后采用CCK-8检测细胞增殖活性;连续刺激并成软骨诱导培养2周后分别采用ELISA法检测软骨特异性胞外糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原蛋白(Col2)的浓度,以及细胞阿利新蓝染色和Col2、DAPI荧光染色观察上述两种软骨特异性蛋白的分布水平。结果:①LIPUS刺激5d后观察刺激5min/d时L50组细胞集落更为密集,细胞增殖活性组内比较高于L30组和L80组(P0.05),组间比较高于对照组(P0.05),刺激10min/d、20min/d时各实验组随着刺激强度增加细胞增殖受到抑制,以L80组抑制增殖效果最显著(P0.05)。②LIPUS刺激并成软骨诱导5min/d时L30组细胞更为扁平宽大且阿利新蓝染色面积及Col2荧光强度较L50组、L80组及对照组更大,进一步分析胞外分泌GAG和Col2蛋白的含量为实验组高于对照组,以L30最为显著(P0.05),刺激10min/d、20min/d时各实验组之间以及与对照组组间无显著性差异。结论:①适宜参数的LIPUS刺激促进细胞增殖,以(50m W/cm~2、5min/d)最为显著,但随着刺激强度增大和刺激时间的延长,细胞的增殖能力下降;②在细胞诱导因子的协同作用下,在不影响细胞增殖率的情况下适宜参数(30m W/cm~2、5min/d)的低强度脉冲超声可促进人脐带间充质干细胞成软骨分化。     

海洋生物提取物中抗皮肤光老化活性成分的研究进展

 海洋生物是海洋资源的重要组成部分,具有抗菌、抗氧化、抗炎及光保护等生物活性,在医用护肤品和药物的生产中有重要的贡献。长期紫外线照射是皮肤外源性老化的主要原因。紫外线照射可损伤表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞,引起皮肤萎缩、皱纹及皮肤肿瘤等。海洋生物中有众多光保护物质,包括类菌孢素氨基酸、硫酸多糖、类胡萝卜素和多酚类物质等,这些物质在皮肤护理、化妆品和医药产品中有很大的开发潜力。本文综述了近年来海洋生物中的光保护物质及其在皮肤光老化中的应用进展。     

MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的定位和本质鉴定

目的检测和分析非肌性肌球蛋白重链ⅡA(NMMHC-ⅡA)在MYH9-RD患者中性粒细胞胞浆中的定位及表达,以确定包涵体的构成本质。方法应用间接免疫荧光技术,观察MYH9-RD患者及正常对照者NMMHC-ⅡA在胞浆中的定位和分布情况;应用Western blot技术检测和分析中性粒细胞中NMMHC-ⅡA在患者和正常对照者之间蛋白表达水平的差异。结果免疫荧光技术清楚地显示了患者中性粒细胞胞浆中呈绿色荧光的"梭形"包涵体的形态和轮廓,与瑞特姬姆萨染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰;而正常对照者除有散点状的荧光斑点外,无包涵体形成;Western blot结果显示患者NMMHC-ⅡA表达量较正常对照者降低。结论 MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要成份是NMMHC-ⅡA,NMMHC-ⅡA的显阴性作用导致了包涵体的形成。     

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。     

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶在系统性红斑狼疮患者肾组织中的表达及临床意义

目的 探讨活化诱导的胞嘧啶核苷脱氨酶（AICDA）在系统性红斑狼疮（SLE）患者肾组织中的表达及临床意义。方法 收集2013年3月至2017年6月于中南大学湘雅医学院附属海口医院就诊的73例SLE患者和36例原发性膜性肾病（Ⅱ期）患者（对照组）肾穿刺活组织检查的肾组织,利用免疫组织化学染色方法检测肾组织中AICDA的表达水平。分析AICDA的表达与SLE患者临床病理参数（病理分型、系统受累情况、疾病活动度评分、治疗转归）的关系。结果 SLE患者肾组织中AICDA的表达水平高于原发性膜性肾病患者,差异有统计学意义（6.12±2.47 vs 3.33±1.91,P<0.05）。Ⅲ型（5.25±4.06）、Ⅳ型（6.88±2.20）、Ⅴ型（6.10±1.66）、Ⅲ+Ⅴ型（5.75±2.34）、Ⅳ+Ⅴ型（5.72±2.37）狼疮性肾炎患者间AICDA的表达水平差异无统计学意义（P均>0.05）。有口腔溃疡、间质性肺炎、神经系统损害、关节炎、血液系统损害和浆膜炎SLE患者肾组织中AICDA的表达水平分别高于无上述系统损害者（7.02±2.14 vs 4.17±1.97,7.86±2.39 vs 4.98±1.76,9.83±1.34 vs 5.39±1.92,6.88±2.04 vs 2.93±1.21,7.51±1.81 vs 3.70±1.23,7.29±2.33 vs 5.34±2.29;P均<0.01）。SLE疾病活动度评分越高,AICDA的表达越强,组间差异有统计学意义（P<0.01）。SLE完全缓解患者肾组织中AICDA表达低于未完全缓解患者,但差异无统计学意义（5.84±2.39 vs 6.80±2.56,P>0.05）。结论 AICDA与SLE的发生和发展有关,有望为SLE的治疗带来新的靶点。     

海口地区α地中海贫血缺失型基因类型分析

目的探讨海口地区α地中海贫血的发病率及分析缺失型基因的类型。方法对具有仪地中海贫血高风险的278人使用裂口PCR（gap—PCR）法进行缺失型基因的检测。结果278人中检出仪地中海贫血111人,发病率为39．93％。d地中海贫血缺失型基因类型分布为东南亚缺失型杂合子（-SEA／αα）28例,东南亚缺失型纯合子（-SEA,-SEA）4例,右缺失型杂合子（-α3．7／αα）23例,右缺失型纯合子（-α3．7／-α3．7）4例,左缺失型杂合子（-α4．2／αα）17例,左缺失型纯合子（-α4．2／-α4．2）2例,血红蛋白H病21例,3．7＼4．2双重杂合子（-α3．7／-α4．2）4例,α地中海贫血复α地中海贫血8例。结论α地中海贫血是最常见、危害最大的单基因遗传病,在海口地区属于高发病区,做好α地中海贫血基因类型的诊断对于优生优育起到极其重要的指导意义,提高整体人类出生素质。     

非小细胞肺癌中长链非编码RNA LINC00460表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织中长链非编码RNA LINC00460（lncRNA LINC00460）的表达情况及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法 将中南大学湘雅医学院附属海口医院2014年1月—2015年6月收治的73例NSCLC患者纳入研究对象,使用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测NSCLC患者癌组织样本和对应癌旁正常组织中lncRNA LINC00460的表达水平,并分析其与患者临床病理特征（性别、年龄、肿瘤大小、临床类型、临床分期、分化程度、是否淋巴转移）及预后的关系。结果 RT-qPCR检测结果显示,73例NSCLC患者癌组织中lncRNA LINC00460的平均相对表达量（8.45±2.91）高于癌旁组织（1.73±0.92）,二者相比差异具有统计学意义（P<0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理分型的NSCLC患者癌组织中lncRNA LINC00460相对表达量比较差异均无统计学意义（P>0.05）,但不同TNM 分期、分化程度及是否发生淋巴结转移的差异均有统计学意义（P<0.05）,即TNM分期越高、分化程度越低、发生淋巴结转移者,则lncRNA LINC00460相对表达量越高。根据患者癌组织中lncRNA LINC00460的表达水平,将其分为高表达组（≥8.45）和低表达组（<8.45）,其中高表达组（24例）与低表达组（49例）的无进展生存期分别为9.7个月（95%CI：7.6~11.9个月）和18.6个月（95%CI：13.8~23.6个月）,差异有统计学意义（P<0.05）;高表达组与低表达组的总生存期分别为13.2个月（95%CI：10.1~17.2个月）和23.8个月（95%CI：17.4~28.8个月）,差异也有统计学意义（P<0.05）。结论 lncRNA LINC00460在NSCLC患者癌组织中表达上调,其表达水平升高与NSCLC的恶性程度有关,可能对NSCLC的预后判断具有一定的指导意义。