PHⅡ-7通过升高ROS诱导K562和K562/A02凋亡

目的探讨靛玉红衍生物——PHⅡ-7对K562和K562/A02的体外杀伤作用及其机制。方法利用WST-8试剂盒、细胞凋亡检测以及活性氧(ROS)检测研究PHⅡ-7对K562和K562/A02发生杀伤作用的机制。共聚焦显微镜及Western blot分析观察药物处理前后细胞的变化。结果细胞毒实验证实PHⅡ-7对K562和K562/A02有相近的杀伤作用。给予上述两种细胞2μmol·L-1PHⅡ-7可见明显的ROS水平升高。PHⅡ-7对K562及K562/A02具有诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性。加入ROS的抑制剂NAC可抑制给药后细胞内ROS水平的提高,同时也抑制了PHⅡ-7处理后细胞的凋亡。共聚焦显微镜观察发现药物处理的K562和K562/A02细胞出现明显的凋亡形态改变,Western blot分析表明单用PHⅡ-7可以引起PARP-1及caspase-3,caspase-9的切割,当PHⅡ-7与NAC共同作用之后,上述改变均被抑制。结论 PHⅡ-7可以通过诱导K562/和K562/A02凋亡来实现对上述细胞的杀伤作用,该作用很有可能与其升高细胞内的ROS水平有关。     

间充质干细胞在肿瘤微环境形成中的作用

间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）是一类具有多向分化潜能的细胞,广泛存在于成体结缔组织和器官中, 可向损伤组织和包括肿瘤的炎症部位迁移,并参与肿瘤微环境的构成,在肿瘤发生发展的各个阶段发挥重要作用。随着研究不 断深入,间充质干细胞对肿瘤影响逐步得到认识并成为当今肿瘤领域的研究热点之一。本文主要从间充质干细胞的特性、对肿 瘤的影响、对肿瘤微环境和免疫细胞的作用、参与血管生成以及相关临床试验等方面来进行综述。     

免疫检查点在肿瘤放疗中的应用进展

放射治疗诱导DNA损伤与细胞死亡,并且通过改变肿瘤表型、肿瘤微环境,参与内源性免疫反应的调节。免疫检查点信号途径在抗微生物免疫反应中参与维持自身耐受,限制组织损伤,但其在抗肿瘤免疫中抑制细胞毒T细胞活化与功能,增强免疫抑制细胞作用,导致免疫逃逸。阻断免疫检查点信号能够恢复抗肿瘤免疫,延缓肿瘤进程。近年来,放疗与免疫治疗联合应用已成为基础与临床研究的热点。在此就放疗对机体免疫系统的作用、免疫检查点的负性调控机制以及放疗联合阻断免疫检查点用于肿瘤治疗的研究进展进行总结,以期为拓展肿瘤综合治疗提供新思路。     

人脐带来源间充质干细胞向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化

目的:观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell,HUMSC)向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化.方法:二步法体外诱导HUMSC向肝细胞分化,通过Real-time PCR和Western blotting检测不同时间点HUMSC中肝细胞特异性基因甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)及白蛋白(albumin,ALB)mRNA和蛋白水平的变化;Transwell实验观察HUMSC在HepG2肝癌细胞条件培养基作用下的趋化现象;采用皮下-原位移植的方法建立BALB/c裸鼠的HepG2肝癌细胞原位移植瘤模型,利用慢病毒感染的方法将HUMSC标记CMV或AFP启动子驱动的fLuc,制备成MSC.CMVLuc或MSC.AFPLuc,并将其注射入荷瘤肝组织,IVIS成像系统观察MSC.CMVLuc向肿瘤部位的迁移归巢及MSC.AF-PLuc在肝癌微环境中向肝细胞分化.结果:HUMSC在体外诱导培养过程中出现细胞形态学变化证明其向肝细胞分化,同时诱导培养后AFP、ALB mRNA和蛋白的表达明显升高(均P＜0.05);HUMSC向HepG2肝癌细胞的趋化呈瘤细胞密度依赖性(P ＜0.01);MSC.CMVLuc注射后2d迁移并聚集于肝脏,注射后5d肝脏内发光信号进一步增强;MSC.AFPLuc肝内注射后24h已向肝细胞分化,注射第7天AFP启动子活性最强,注射第9天活性消失.结论:在小鼠体内外证明了HUMSC具有向肝脏归巢及分化的能力,为今后MSC应用于肝癌基因靶向治疗提供了一种新的策略.     

MCP-1/CCR2轴促进脐带间充质干细胞向肺癌组织归巢

目的:探讨单核细胞趋化蛋白-l(monocyte chemoatractant protein-1,MCP-1)/趋化因子(C-C模体)受体2[chemokine(C-C motif) receptor 2,CCR2)轴在人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)向肺癌归巢中的作用.方法:采用组织块培养法从健康新生儿脐带组织中分离HUMSCs并鉴定,构建BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型.体外应用Transwell趋化实验、体内应用IVIS Xenogen动物活体成像系统检测HUMSCs是否向肺癌归巢,ELISA法检测肺癌细胞A549培养上清中MCP-1分泌水平,转染shRNA敲低肺癌细胞内MCP-1的表达和用抑制剂RS504393抑制HUMSCs细胞表面的MCP-1受体CCR2后,体内外检测HUMSCs向肺癌归巢能力的改变.结果:成功分离得到HUMSCs并完成鉴定,成功建立BALB/c裸鼠皮下肺癌移植瘤模型.HUMSCs在体内外均能向肺癌归巢(P＜0.01),肺癌细胞高表达MCP-1.成功构建稳定低表达MCP-1的肺癌A549细胞系,与对照组相比,shRNA1和shRNA2敲低组趋化HUMSCs的数目明显减少[(80.0±33.0)、(94.0±16.0)vs (167.0±41.0)个,均P＜0.05],抑制HUMSCs细胞表面MCP-1受体CCR2后,体内外均显著抑制HUMSCs向肺癌的趋化能力(P＜0.05).结论:MCP-1/CCR2轴促进HUMSCs向肺癌归巢.     

TCR组库检测方法及应用的研究进展

近年来以T细胞为基础的肿瘤免疫治疗发展迅速，但仅对部分肿瘤患者有效，因此亟待探索有效的检测方法和预测 指标。T细胞受体（TCR）是T细胞抗原识别的关键分子。T细胞在胸腺成熟过程中经历了TCR基因重排，形成了TCR高度多样 性，体内所有TCR类型与数量组成TCR组库。借助免疫组库测序技术可得到特定时期肿瘤患者TCR组库的信息，如TCR多样 性、克隆性等特点，为个体化肿瘤免疫治疗方案的选择以及疗效预测提供了新线索。二代测序技术和单细胞测序技术的发展极 大地扩展了TCR组库研究的深度与广度，极大地促进其在肿瘤免疫治疗领域的应用。本文通过对TCR组库测序应用领域、测序 方法及其统计学评估指标进行综述，展示了TCR组库检测作为新型生物标志物来预测及评估患者预后的潜能，为个体精准化肿 瘤免疫治疗提供新策略。     

过继性T细胞治疗在非小细胞肺癌中的研究进展

T细胞是获得性抗肿瘤免疫的重要细胞亚群,但肿瘤组织中的T细胞数量少,且处于免疫抑制甚至耗竭状态,这是导致肿瘤免疫逃逸和免疫检查点抑制剂等抗肿瘤免疫治疗效果不佳的重要原因。过继性T细胞治疗主要包括肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes,TILs）、嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T）、T细胞受体工程化T细胞（T-cell receptor engineering T cell,TCR-T）治疗,其通过体外筛选扩增富集肿瘤特异性T细胞或通过基因改造赋予T细胞新的抗原特异性（CAR-T、TCR-T）,有效克服了肿瘤浸润T细胞不足的缺陷。虽然过继性T细胞治疗在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的研究起步较晚,但已显示治疗的安全可行性和初步抗肿瘤效果,值得进一步深入研究。本文将对TILs、CAR-T、TCR-T的原理、培养方法、生物学特征以及在NSCLC治疗中的研究进展进行综述,以期为优化临床研究设计和开展新型NSCLC免疫治疗提供新思路。      

基于生物信息学分析的肝细胞癌预后相关基因的筛选

[摘要] 目的：利用生物信息学方法筛选出肝细胞癌（HCC）组织与正常肝组织之间差异表达基因（DEG）,从转录组层面分析这些候选基因参与HCC发生发展的内在机制及其与HCC患者预后相关基因的临床意义。方法: 分别从基因表达数据库（GEO）及人类癌症基因组图谱（TCGA）网站中下载GSE45267、GSE64041、GSE84402 和TCGA中的基因表达谱,R软件和Bioconductor安装包用于筛选HCC组织与癌旁组织之间DEG,然后对这些DEG进行基因本体（GO）富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析、蛋白质相互作用（PPI）网络分析及生存分析。结果：共筛选出46 个上调基因和154 个下调基因,GO富集分析显示,这些DEG主要与细胞分裂、增殖、周期调控、氧化还原过程及某些代谢途径密切相关;KEGG通路分析显示DEG主要与色氨酸、视黄醇等代谢途径及P53 通路有关。在TCGA数据集中,6 个上调的中枢基因CCNA2、CDK1、DLGAP5、KIF20A、KPNA2、MELK的过表达被认为与HCC患者预后呈明显负相关（均P<0.01）。结论：筛选出的一组与预后负相关的中枢上调基因对HCC诊断和治疗的临床研究可能具有潜在的指导价值。     

自噬在细胞生存和肿瘤发生中的作用

自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象,它与细胞的正常生长发育进程以及多种疾病的发生发展密切联系。调控自噬的分子和信号传导途径错综复杂,作为Ⅱ型程序性死亡,自噬与凋亡相互作用,参与了细胞稳定状态的维持和疾病发生过程。近年来研究表明,自噬还可从细胞周期、凋亡相关因子、肿瘤形成过程及血管生成等方面影响肿瘤的发生与发展。     

骨桥蛋白预测早期非小细胞肺癌患者预后的意义

目的 探讨骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表达和预后意义。方法 采用免疫组织化学法检测84例非小细胞肺癌组织中OPN表达情况,利用χ 2检验和Kaplan-Meier生存曲线分析OPN表达与临床病理相关因素及患者术后总生存时间（overall survival,OS）、无疾病生存时间（disease-free survival,DFS）的关系。结果 84例非小细胞肺癌组织中OPN阳性表达率为83.3%（70/84）。在早期患者中,OPN阴性表达组DFS和OS长于OPN阳性组（χ ²=9.722,P=0.019;χ ²=6.064,P=0.014）。而晚期患者OPN阴性表达组DFS和OS与阳性组间比较差异无统计学意义。结论 非小细胞肺癌组织中存在OPN表达,OPN可能成为预测早期NSCLC患者预后的参考指标。