Snail与E-cadherin在食管癌中的表达及临床意义

目的研究食管癌中转录因子Snail及黏附因子E-cadherin的表达,并探讨与食管癌浸润转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测68例食管癌组织和40例癌旁组织中Snail,E-cadherin的表达情况,分析两者在不同分化程度的食管癌中的表达,以及与临床病理因素之间的关系。结果食管癌组织Snail阳性率(82.4%)显著高于癌旁组织(42.5%)(p<0.05),Snail的表达与食管癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移及远处转移有关(p<0.05)。食管癌组织E-cadherin的阳性率(36.7%)显著低于癌旁组织(87.5%)(p<0.05),E-cadherin的表达与食管癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期及远处转移有关(p<0.05)。食管癌组织中Snail与E-cadhrin的表达呈负相关(p<0.05)。结论Snail蛋白高表达与E-cadherin蛋白低表达可能参与食管癌浸润转移的发生,并且联合检测可作为其重要生物学标志,有助于食管癌早期诊断和预后评价。     

4800张年门诊处方质量调查与分析

目的：调查我院门诊处方质量及不合理用药情况。方法：2005年每月随机抽查4800张处方进行质量调查分析，于年终汇总。结果：我院门诊处方不合格率为0.87％，其中五联以上用药不合格率占0．32％，60岁以上患者处方不合格率占1.27％。结论：老年患者的联合用药器慎重应用，药师应积极进行用药指导。     

Snail、E-cadherin与上皮性肿瘤浸润、转移的关系

肿瘤经常被看作是正常发育过程的破坏形式,一些在胚胎发育期起重要作用的基因常常在癌组织中被发现,提示它们可能参与一些启动肿瘤发生和促进肿瘤转移的关键步骤,包括局限性侵袭,通过体循环播散,甚至转移。抑制E-eadherin转录的一些调控因子被证明是在胚胎发育期启动上皮细胞问充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的重要基因,Snail家族成员作为一类锌指转录因子在此过程中发挥着主要作用。大量研究表明,转录因子Snail通过与E-cadhefin启动子区的E-盒（E-box）结合,下调E-cadhefin的表达进而诱导EMT的发生。EMT与肿瘤细胞的原位侵袭和远处转移有着密切的关系,目前已成为肿瘤研究中的热点。这对于彻底揭示肿瘤发生发展的细胞分子生物学机制,开发肿瘤治疗的新思路、途径具有重要的理论和实际意义。     

NFATc1对人肺腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响

目的 探究NFATc1对肺腺癌NCI-H1299细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,以及NFATc1发挥作用的生物学机制。方法 通过Realtime PCR检测NFATc1在三种肺腺癌细胞系中的相对表达水平,利用慢病毒载体构建稳定敲减NFATc1的NCI-H1299细胞系。MTT检测NFATc1对细胞增殖能力的影响,平板克隆形成实验检测NFATc1对克隆形成能力的影响,Transwell检测NFATc1对细胞迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术检测NFATc1对细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测NFATc1对凋亡、EMT相关蛋白和MAPK信号通路蛋白表达的影响。结果 肺腺癌NCI-H1299细胞系中NFATc1表达水平相对较高。沉默NFATc1表达可以显著抑制细胞增殖(P＜0.05)、克隆形成(P＜0.05)、迁移(P＜0.05)和侵袭(P＜0.05)能力,抑制细胞周期在G1期(P＜0.05),促进细胞凋亡(P＜0.05)。Bax、Cleaved caspase-3和E-Cadherin蛋白表达增加(P＜0.05),CDK4、c-Myc、ERK、p-ERK和N-Cadherin蛋白表达降低(P＜0.05)。结论 在人肺腺癌NCI-H1299细胞中抑制NFATc1表达,可以显著抑制细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制MAPK信号通路相关。     

防己诺林碱对肺癌H1299和A549细胞的作用及其分子机制研究

目的 探究防己诺林碱在肺癌中的作用及其分子机制。方法 MTS法检测经10、15、20、30、40和60 μM/L防己诺林碱处理的肺癌H1299和A549细胞的增殖情况,通过Caspase3、Caspase8和Caspase9活性检测试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。Western blot检测MAPK信号通路(p-Akt、PI3K、mTOR和Akt蛋白)、增殖和转移(MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1和P21蛋白)、周期和凋亡(Cyclin D2、Bcl2、MCL-1、Bax和p53蛋白)相关蛋白的表达情况,通过Real-time PCR检测PI3k、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2、MCL-1、Bax、Bcl2和TP53基因表达情况。结果 防己诺林碱会抑制肺癌H1299和A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡,增加Caspase3、Caspase8和Caspase9酶活性。经防己诺林碱处理后,PI3K、p-Akt、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2蛋白表达降低,P21、MCL-1、Bax和p53蛋白表达升高,并且表现为剂量依赖性,但对Akt蛋白表达无影响;PI3K、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2基因表达降低,TP53、MCL-1和Bax基因表达增加。结论 防己诺林碱通过调控MAPK信号通路、增殖和转移、周期和凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

TAM通过PLGF/Flt-1和TGF-β1通路促进非小细胞肺癌生长和肿瘤血管异生的研究

目的 探讨胎盘生长因子(PLGF)介导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞和肿瘤相关巨噬细胞(TAM)之间相互作用的具体机制。方法 采用尾静脉注射法将转染腺病毒(AAV)的NSCLC A549细胞注入10周龄的雄性NOD/SCID小鼠体内,构建小鼠肺癌动物模型。流式细胞技术检测瘤体内各种巨噬细胞(MΦ)亚型,RT-qPCR检测肿瘤细胞和TAM中PLGF、血管内皮生长因子受体(Flt-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平。根据A549细胞和MΦ细胞的培养条件不同,分为单纯A549组,单纯MΦ组,A549+MΦ组,A549+MΦ+sFlt-1组(加入10 μg/L sFlt-1),PLGF+MΦ组(加入100 ng PLGF)和PLGF+MΦ+sFlt-1组(加入100 ng PLGF和10 μg/L sFlt-1)。Transwell、MTT法分别检测不同共培养条件下A549细胞的增殖和迁移能力。根据HUVEC细胞的培养条件,分为对照组、条件培养基(CM)组、CM+SB431542组、TGF-β1组和TGF-β1+SB431542组,HUVEC细胞胶原凝胶测定法检测肿瘤血管异生情况。结果 与RFP-细胞相比,PLGF主要由肿瘤细胞表达(31.72±4.69 vs. 2.31±0.06,P＜0.001),而Flt-1主要由CD163+的巨噬细胞表达(P＜0.001)。A549+MΦ组A549细胞增殖能力显著强于单纯A549组和A549+MΦ+sFlt-1组(OD值:3.62±0.23 vs. 4.53±0.34 vs. 3.71±0.37,P＜0.05)。TAM/M2巨噬细胞中TGF-β1的表达量高于M1巨噬细胞(0.99±0.23 vs. 0.07±0.02,P＜0.05)。CM组和TGF-β1组中HUVEC细胞管状结构的形成最多(P＜0.05),TGF-β1抑制剂SB431542可抑制这一现象。结论 TAM和NSCLC细胞间通过PLGF/Flt-1和TGF-β1信号通路间的交互作用,促进NSCLC的生长和血管异生。