免疫共沉淀结合双向电泳分离相互作用蛋白质的方法优化

目的：建立和优化有针对性的免疫共沉淀（CO-IP）与双向电泳（2DE）-质谱联合的技术来鉴定相互作用蛋白质。方法：利用特异性抗体通过CO-IP对细胞全蛋白中的目标蛋白进行富集,用不同洗脱液洗脱目标及其相互作用蛋白,并行2DE分离。结果：对CO-IP过程、洗脱液成分、上样量等关键步骤进行优化,得到满意的2DE图谱。结论：成功优化CO-IP与2DE分离技术,为通过蛋白质组学研究信号通路中重要蛋白质的相互作用提供有效方法。     

食管鳞癌恶性表型相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:利用蛋白质组学技术探讨与人食管鳞癌细胞(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)恶性表型转化相关的差异表达的蛋白质谱.方法:采用二维双向电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionisation timE-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)法鉴定人食管上皮永生化细胞株NECA-E6E7-hTERT和ESCC细胞株EC1、EC18、EC109差异表达的蛋白质分子,采用Western印迹法和免疫细胞化学法验证annexin A2在人食管上皮永生化细胞和ESCC细胞中的差异表达,实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)分析annexin A2 mRNA的表达水平.结果:鉴定出5倍以上差异表达的蛋白质分子15个,其中3个蛋白质在ESCC细胞中表达下调,12个蛋白质表达上调;Western 印迹法和免疫细胞化学法验证了ESCC细胞中annexin A2蛋白的表达低于人食管上皮永生化细胞;而annexin A2 mRNA表达与其蛋白表达模式不一致.结论:本研究鉴定出的差异表达蛋白质谱为建立食管癌高发区高危人群筛查和早期诊断的分子指标和生物预防提供了重要线索.annexin A2翻译后调控可能是导致ESCC中annexin A2蛋白表达下调的主要原因.     

大鼠肝癌发育基因的表达与调节

本文从研究大鼠肝癌和新生大鼠肝的信使核糖核酸(mRNA)着手,分析了癌胚之间基因表达的异同,研究了AFPmRNA和TATmRNA致癌基因等的变化规律,使用地塞米松对它们的表达进行了调节。地塞米松的类似物知母皂甙也显示出对AFP的抑制作用。 材料与方法 一、动物的诱癌及处理 使用100～     

癌细胞染色质的结构和基因表达(三)

六、癌细胞基因表达的改变肿瘤损害是由许多已经改变了遗传表型,其组织学及生物学性质均与其他细胞不同的细胞所组成。其特点:(1)癌细胞较原来的组织细胞核着色更深,染色质及有丝分裂更多;(2)癌损伤显示对正常组织侵犯的病理性质;(3)癌细胞从肿瘤原来的位置转到另外的组织或器官,即为转移。 (一)癌——一种基因疾病所有细胞都来自遗传上相似类型的细胞。其涵义是一旦某个细胞变成癌细胞,其     

癌细胞染色质的结构和基因表达(一)

美国佛蒙特大学医学院生物化学教授——邱政夫博士,应邀于1982年9月24日来我院讲学,历时一周,讲述了“癌细胞染色质的结构和基因表达”。来自全国各地的学者认为内容很好,极为关注。本刊应要求,将讲稿译文连载发表,以飨读者。     

超氧阴离子参与白藜芦醇诱导的人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究超氧阴离子（O2^-·）、H2O2、线粒体膜电位（砌口）在白藜芦醇（nSV）诱导人急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡中的作用。方法：以碰’V（10．0、50．0、100．0μmol／L）分别作用HL-606、12、24h后，用流式细胞术检测细胞内O2^-、H2伤及MMP水平；四氮唑蓝凝胶法检测RSV作用HL-6024h后超氧化物歧化酶（SOD）的活性；MTt法检测SOD和RSV共同作用HL-60后的细胞生存率；锥虫蓝细胞计数法检测N-乙酰-L-半胱氨酸（NAc）和RSV共同作用HL-50后的细胞生存率。结果：RSV可使HL-50内O2^-·水平升高，H2-2水平、MMP降低，SOD活性无明显变化；SOD和NAC对RSV诱导的HL．60凋亡作用无明显影响。结论：RSV诱导HL-60凋亡机制是RSV引起细胞内O2^-·水平升高，MMP降低，从而启动caspases凋亡途径诱发细胞凋亡。     

癌细胞染色质的结构和基因表达(二)

三、染色质活性与基因调控在前几节中主要对染色质的结构进行了探讨。这一节中重点是探讨染色质有什么样的功能。大多数细胞的染色质,不仅仅是一个遗传信息的固定储藏所,而在其中还发生着转录、复制、重组、和修复等各种动态过程。这些过程发生的速率和频率有很大的不同。目前对其控制的机制还了解甚少。 (一)染色质的转录在染色质的一部分DNA中,似乎包含     

癌细胞染色质的结构和基因表达

邱政夫副教授的《癌细胞染色质的结构和基因表达》学术报告,共分七部分:(1)染色质;(2)染色质结构;(3)染色质活性与基因调控;(4)癌细胞的核畸变;(5)用免疫学方法研究肿瘤特异染色体成分和染色质结构;(6)癌细胞基因表达的改变;(7)阐明癌瘤演化的特殊探索手段,包括:肿瘤基因克隆与表达、基因DNA过渡到癌基因的研究及细胞杂交。报告人的研究工作重点是第五、六部分,现将其摘录于下。