复旦大学生物医学研究院表观遗传研究回顾

 一般认为,表观遗传学是研究由非基因序列变化造成可遗传性状的科学,其所涵盖的调控形式广泛参与细胞生命活动的各个过程,并且在许多疾病的发生发展过程中具有重要的调控作用。人类基因组计划之后,表观遗传研究的一系列发现让人们意识到遗传信息调控的复杂性和精细性,该领域成为21世纪生命科学与医学领域最为活跃的研究方向之一。复旦大学生物医学研究院(Institute of Biomedical Sciences,Fudan University,简称“IBS”)依托于上海医学院,自建院之初就将“医学表观遗传学”列入重点研究方向,经过12年的发展,该方向上已经产生了一大批在国际上具有高影响力的原创性成果。这些成果对提升我国在世界范围内表观遗传领域的影响具有重要意义,同时对复旦大学生物医学相关学科的建设和人才培养做出了重要贡献。本文主要对复旦大学生物医学研究院在表观遗传领域取得的一批具有代表性的研究成果进行了总结与回顾。     

肝细胞核因子1B体外抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨肝细胞核因子1B(HNF1B)在前列腺癌中表达及其对肿瘤细胞生长和迁移的影响。方法:免疫组化检测HNF1B基因在患者前列腺癌组织中的表达;Western印迹法检测前列腺癌细胞系中HNF1B的表达水平。在DU-145细胞中过表达HNF1B,利用MTS检测HNF1B表达改变对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测克隆情况;Transwell实验检测迁移情况。结果:前列腺癌组织中HNF1B蛋白表达低于癌旁组织(P0.000 1),高转移、激素治疗抵抗的前列腺癌细胞HNF1B表达低于低转移前列腺癌细胞(P0.05)。过表达HNF1B可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和克隆形成(P0.05或P0.01)。结论:HNF1B是前列腺癌抑癌基因,体外可通过抑制前列腺癌的增殖、迁移和生长发挥抑癌作用。     

膀胱癌尿液脱落细胞角质素mRNA表达检测方法的建立

目的：建立采用RT—PCR对膀胱癌尿液脱落细胞CK8和CK20的mRNA表达进行分析的实验方法。方法：从22例膀胱癌患尿液脱落细胞中提取总RNA，采用RT—PCR和特异性引物进行逆转录、扩增，并用琼脂糖凝胶电泳进行分析。结果：从所有标本中提取的总RNA均有较好纯度和均一性；22例标本均表达CK8 mRNA，18例标本表达CK20 mRNA。结论：RT—PCR是一种敏感、快捷的检测膀胱癌尿液脱落细胞中CK8、CK20 mRNA表达的方法，可采用此方法从分子水平对膀胱癌患尿液脱落细胞表达产物进行无创性检测，为研究膀胱癌的发病机制、生物学行为和探索膀胱癌早期无创性诊断方法奠定了实验基础。     

ETS-2转录因子与启动子的+1～+40区结合是肝癌相关基因HCCS1的转录所必需

目的:阐明HCCS1基因启动子的转录调控机制。方法:引物延伸法确定HCCS1基因的转录起始点,通过限制性内切酶酶切介导对HCCS1基因全长启动子做进行性的5'缺失,用瞬时转染/双荧光素酶报告系统确定最小启动子,连接体扫描突变分析来确定启动子功能的关键顺式序列区,电泳迁移率实验并附以抗体介导超迁移实验来确定关键的反式因子。结果:HCCS1基因的转录起始点被定位于-177/-178处的C残基(ATG为 1)。最小启动子位于-60~ 148区(转录起始点为 1)之中。在关键的调控区( 1~ 40)所含的已知顺式序列中有2个ETS转录因子识别序列,而不是p53或NF-κB,识别序列与其相应的转录因子(ETS-2)的结合有着重要的功能内涵。结论:ETS-2转录因子与启动子的 1~ 40区中相应的顺式序列结合,在肝癌相关基因HCCS1的转录活性中起着关键作用。