肌层浸润性膀胱癌患者BLCA-1含量的变化和临床意义

目的:探讨肌层浸润性膀胱癌患者尿液和血清膀胱癌特异性核基质蛋白-1(bladder cancer Soecifimclear matrix proteim-1,BLCA-1)含量的变化和意义.方法:采用竞争性ⅡLISA法检测22例肌层浸润性膀胱癌患者、21例健康体检者和23例前列腺增生(BPH)患者尿液和血清BLCA-1的含量.结果:膀胱癌患者尿液BLCA-1的含量明显高于健康体检者和BPH患者(P＜0.01);膀胱癌患者血清BLCA-1含量明显高于健康体检者(P＜0.05),与BPH患者比较差异无统计学意义(P＞0.05).膀胱癌患者血清BLCA-1含量与年龄和病理分级有关(P＜0.05):≥60岁膀胱癌患者血清BLCA-1含量明显高于＜60岁膀胱癌患者,高级别膀胱癌患者血清BLCA-1含量明显高于低级别膀胱癌患者.膀胱癌患者检测尿液、血清BLCA-1敏感度(77.28％vs56.37％)比较差异无统计学意义(P＞0.05);检测尿液BLCA-1的特异度明显高于检测血清(93.18％ vs 59.09％,P＜0.05).结论:BLCA-1可能对肌层浸润性膀胱癌具有一定的诊断价值.     

膀胱癌细胞Cx43对顺铂抗肿瘤作用影响研究

目的 连接蛋白43(connexin43,Cx43)在人体正常组织及肿瘤组织中广泛表达,并且参与细胞的生长控制和组织分化.本研究探讨采用RNA干扰技术沉默膀胱癌5637细胞株Cx43蛋白表达对顺铂化疗敏感性的影响.方法 体外培养膀胱癌5637细胞和正常尿路上皮SV-HUC-1细胞,采用蛋白质印迹法检测膀胱癌5637细胞系和正常尿路上皮SV-HUC-1细胞中Cx43蛋白表达,应用免疫荧光技术检测膀胱癌5637细胞系中Cx43蛋白的定位.采用RNA干扰技术沉默膀胱肿瘤5637细胞株Cx43蛋白的表达并用顺铂(3μg/mL)处理SiRNA-Cx43组(实验组)和SiRNA-Control(对照组)后,通过CCK-8检测实验组、对照组及野生型5637细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测两组癌细胞的凋亡;采用蛋白质印迹法检测顺铂处理后野生型5637细胞后细胞中Cx43、Cleaved Caspase-3的表达及实验组和对照组中Cx43、Cleaved Caspase-3和Bcl-2的表达.结果 膀胱癌5637细胞中Cx43表达较正常尿路上皮细胞高,相对蛋白表达量分别为1.013±0.102和0.556±0.054,两细胞系比较差异有统计学意义,t=3.789,P=0.019;免疫荧光检测Cx43主要定位于细胞质中.CCK-8结果显示,膀胱癌5637细胞随着顺铂药物的浓度(0.75、1.5、3和6μg/mL)和时间(0、1、2、3 d)的增加,细胞的增殖减少,采用重复测量方差分析,各组间比较,差异有统计学意义,F=153.634,P＜0.001;实验组增殖较对照组明显减少,差异有统计学意义,F=9.949,P=0.02.流式细胞仪检测结果显示,实验组和对照组凋亡率分别为(63.00±4.58)％和(34.33±6.03)％,差异有统计学意义,t=7.457,P＜0.01.蛋白质印迹法结果显示,5637细胞随着药物(顺铂3 μg/mL)作用时间增加,Cx43蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义,F=178.868,P＜0.001;而CleavedCaspase-3逐渐升高,差异有统计学意义,F=21.643,P＜0.001.顺铂(3μg/mL,4h)处理实验组和对照组后,CleavedCaspase-3蛋白相对表达量分别为0.740±0.092和0.373±0.091,差异统计学意义,t=6.394,P=0.001;BclL-2蛋白相对表达量分别为0.260±0.066和0.817±0.068,差异统计学意义,t=4.814,P=0.005 结论 沉默膀胱癌5637细胞中Cx43蛋白表达能提高顺铂的敏感性,可能与反常定位于细胞质中的Cx43参与线粒体介导的凋亡途径有关.     

Cx43通过P38/MAPK信号途径增强膀胱癌细胞的侵袭能力

目的：探讨连接蛋白43（connexin 43,Cx43）对膀胱癌细胞侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法: 选取2014年6月至2015年9月间承德医学院附属医院泌尿外科52例膀胱癌手术组织标本及32例癌旁组织,以及人膀胱癌细胞株5637。用免疫组化方法检测膀胱癌组织中Cx43蛋白表达。将Cx43脂质体、空白脂质体、siRNA及siRNA对照质粒转染5637细胞,Western blotting验证过Cx43表达和干扰效果;用Transwell侵袭实验检测5637细胞侵袭能力的变化,用Western blotting检测5637细胞MMP-2、MMP-9和P-P38蛋白表达水平的变化。结果: 膀胱癌组织中Cx43蛋白的表达水平明显高于癌旁组织\[(5.21±0.33) vs（2.84±0.19）,P<0.01\]。转染Cx43脂质体和siRNA成功上调/下调5637细胞中Cx43的表达。Cx43过表达组5637细胞的侵袭能力高于对照组\[穿膜细胞数：（1.36±0.04） vs （0.70±0.15）个,P<0.01\], siRNA干扰组细胞的侵袭能力低于对照组\[穿膜细胞数：（0.20±0.08） vs （0.59±0.13）个,P<0.05）。Cx43过表达组细胞MMP-2、MMP-9、P-P38/P38蛋白水平均高于对照组（P<0.01或P<0.05）,siRNA干扰组均低于对照组低(均P<0.01)。结论: Cx43增强膀胱癌5637细胞的侵袭能力,其机制可能是通过激活P38/MAPK信号途径实现的。