G 蛋白偶联受体激酶 3 在口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其可能的机制

[ 摘 要 ] 目的：探讨沉默 G 蛋白偶联受体激酶 3（G protein-coupled receptor kinase 3,GRK3）对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法：利用 Oncomine 数据库分析 GRK3 在正 常口腔组织及 OSCC 组织中的表达水平。用 RNA 干扰技术敲降 GRK3 在 OSCC 细胞 WSU-HN6 和 CAL27 中的表达,用 qPCR 法验证干扰效率后,采用 CCK-8 法和流式细胞术分别检测敲降 GRK3 对 OSCC 细胞增殖和凋亡的影响,Transwell 小室 法检测对 OSCC 细胞迁移、侵袭能力的影响,qPCR 法检测对 OSCC 细胞周期、上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）和基质金属蛋白酶（matrix metallopeptidase,MMP）相关分子 mRNA 水平表达的影响,WB 法检测 EMT 及 MMP 相关分子的蛋白表达水平变化。结果：OSCC 组织中 GRK3 的表达水平显著高于正常口腔组织（P<0.01）。转染 si-GRK3 后,OSCC 细胞中 GRK3 mRNA 表达水平均下调 70% 以上。敲降 GRK3 可显著抑制 OSCC 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均 P<0.01）,对细胞凋亡无显著影响（P>0.05）。敲降 GRK3 表达后,OSCC 细胞的 G0/G1 期比例显著增高（P<0.01）,细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）、Cyclin D3、细胞周期蛋白依赖性激酶 2（cyclin-dependent kinases 2,CDK2）和 CDK4 基因的 mRNA 表达降低 （均 P<0.05）;EMT 相关分子波形蛋白（Vimentin）、Zeb1 和 Slug 表达降低,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达升高（均 P<0.05）; MMP3 和 MMP9 表达降低（均 P<0.05）,MMP2 和 MMP7 表达无明显变化（均 P>0.05）。结论：GRK3 可通过调节细胞周期促 进 OSCC 细胞的增殖能力,并通过调控 EMT 和 MMP 增强细胞的迁移和侵袭能力。     

LncRNA SNHG1通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨LncRNA SNHG1对肾透明细胞癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制。方法利用划痕实验和Transwell实验检测SNHG1对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响,利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG1是否可结合miR-199a-3p,利用实时荧光定量PCR检测SNHG1与miR-199a-3p表达的关系。结果抑制SNHG1的表达后,细胞迁移和侵袭能力均升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示SNHG1能够吸附miR-199a-3p(P<0.01)。实时荧光定量PCR实验结果显示抑制SNHG1的表达可促进miR-199a-3p的表达(P<0.01)。结论 SNHG1可通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭。     

胶体金免疫层析法快速检测CRE碳青霉烯酶效果评价

目的 评估胶体金免疫层析法(GICA)快速检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)碳青霉烯酶类别的临床应用价值.方法 收集CRE非重复临床分离株73株,采用聚合酶链反应(PCR)鉴定碳青霉烯酶基因型,并采用GICA快速检测CRE的碳青霉烯酶.以PCR为参考方法,评估GICA快速检测CRE碳青霉烯酶的准确性.结果 PCR检...     

他汀类药物对免疫细胞功能的调节作用及机制

他汀类药物是羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的抑制剂,因其显著的降脂功能而广泛应用于治疗动脉粥样硬化和心血管疾病.近年来研究发现,他汀类药物在CD4+T细胞介导的多种自身免疫性疾病中显示了免疫调节功能,可有效预防和治疗这类疾病.本文将对他汀类药物的免疫调节功能及潜在机制进行初步的探讨.     

口腔鳞状细胞癌细胞TLR3表达及其配体poly(I:C)的诱导凋亡作用

目的研究口腔鳞状细胞癌细胞中Toll样受体3(TLR3)的表达及其配体poly(I:C)的生物学作用。方法 RT-PCR和流式细胞术检测口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27和HB中TLR3mRNA和蛋白表达。以100μg/mLpoly(I:C)处理CAL-27,分别于刺激后24、48和72h时点采用MTT比色法测定细胞活力,24h时点采用流式细胞术检测细胞凋亡;并设立空白对照。结果 CAL-27和HB中TLR3mRNA和蛋白均呈高表达。CAL-27经poly(I:C)处理后,各检测时点的细胞活力均显著低于空白对照细胞(P<0.05);细胞凋亡率明显高于空白对照细胞[(16.67±1.202)%vs(7.00±1.155)%](P<0.05)。结论口腔鳞状细胞癌细胞内高表达TLR3,其配体poly(I:C)能诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡。     

非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病患者血糖动态波动水平及其对预后的影响

目的探究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)合并2型糖尿病(T2DM)患者血糖动态波动水平及其对预后的影响。方法回顾性分析2016年2月至2017年10月上海交通大学医学院附属第九人民医院就诊的NAFLD合并T2DM患者(NAFLD+T2DM组)和NAFLD患者(NAFLD组)各42例临床资料,并将同期体检的42名健康者纳入对照组。比较三组一般资料[体重质量指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(Fins)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、血糖波动情况[平均血糖水平、平均血糖波动幅度(MAGE)、最大血糖波动幅度(LAGE)]差异;根据NAFLD+T2DM组就诊6个月后肝纤维化程度[非酒精性脂肪性肝病肝纤维化评分(NAFLDFS)]分为预后较好组(NAFLDFS评分0. 676)及预后较差组(NAFLDFS评分≥0. 676),比较其就诊时血糖动态波动情况,并使用Pearson相关分析法分析血糖动态波动水平与预后的相关性。结果 NAFLD+T2DM组、NAFLD组及对照组性别、年龄比较,差异无统计学意义(P 0. 05);而其他一般资料(BMI、FBG、Fins、Hb A1c、AST、ALT)、血糖波动(平均血糖、MAGE、LAGE)水平比较,均为NAFLD+T2DM组 NAFLD组对照组(P 0. 05)。就诊6个月后,42例NAFLD+T2DM患者中NAFLDFS评分0. 676有29例,纳入预后较好组; NAFLDFS评分≥0. 676有13例,纳入预后较差组;预后较好组就诊时MAGE、LAGE水平均低于预后较差组(P 0. 05)。经Pearson相关分析显示,NAFLD+T2DM组预后情况与MAGE、LAGE呈负相关(P 0. 05)。结论 NAFLD合并T2DM患者血糖波动幅度较大,且血糖波动水平较高者,预后情况越差,临床应对血糖波动幅度较大者予以干预措施,以改善患者预后。     

蟛蜞菊内酯对人肾癌细胞的体外生长抑制作用

目的　探讨蟛蜞菊内酯对人肾癌细胞的生长抑制作用及相关机制。 方法　采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察蟛蜞菊内酯对肾癌细胞活力的影响;通过流式细胞分析检测蟛蜞菊内酯对肾癌细胞凋亡和细胞周期的影响;通过免疫印迹法检测细胞凋亡和细胞周期相关蛋白的表达水平。 结果　蟛蜞菊内酯能够以剂量依赖的方式抑制肾癌细胞 ACHN 和 786-O 的生长;蟛蜞菊内酯能显著诱导肾癌细胞发生凋亡和 G0/G1 期阻滞。蟛蜞菊内酯能明显上调促凋亡蛋白 Bax 的表达,抑制抗凋亡蛋白 Bcl-2 和 Bcl-xL 的表达。此外,蟛蜞菊内酯还可抑制细胞周期相关蛋白 cyclin D1、CDK4 及 CDK6 的表达。 结论　蟛蜞菊内酯可诱导肾癌细胞凋亡并发生细胞周期阻滞,从而影响细胞活力,抑制其生长,可作为肾癌治疗的潜在药物。     

口腔鳞状细胞癌细胞TLR3表达及其配体poly(I:C)的诱导凋亡作用

目的 研究口腔鳞状细胞癌细胞中Toll样受体3（TLR3）的表达及其配体poly （I:C）的生物学作用。方法 RT-PCR和流式细胞术检测口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27和HB中TLR3 mRNA和蛋白表达。以100 μg/mL poly（I:C）处理CAL-27, 分别于刺激后24、48和72 h时点采用MTT比色法测定细胞活力,24 h时点采用流式细胞术检测细胞凋亡;并设立空白对照。结果 CAL-27和HB中TLR3 mRNA和蛋白均呈高表达。CAL-27经poly(I:C）处理后,各检测时点的细胞活力均显著低于空白对照细胞（P<0.05）;细胞凋亡率明显高于空白对照细胞[(16.67±1.202）% vs (7.00±1.155)%]（P<0.05）。结论 口腔鳞状细胞癌细胞内高表达TLR3,其配体poly(I:C）能诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡。