NGAL基因5′侧翼区转录调控元件的分段定位鉴定

目的 :对中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)基因 5′侧翼区的转录调控元件进行分段定位鉴定。方法 :以双荧光素酶报告基因检测系统检测NGAL基因 5′侧翼区 ( -14 3 1～ +84)转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用。结果 :在NGAL基因 5′端 -945～ -65 8和 -65 7～ -4 172个区段发现了转录增强子元件与转录激活蛋白之间的相互作用 ,而在 -4 16～ -15 2区段则发现了转录沉默子元件与转录抑制蛋白之间的相互作用。结论 :在NGAL基因5′侧翼转录调控区可能至少存在着 2个转录增强子元件和 1个转录沉默子元件     

NGAL基因3′端序列转录调控元件的克隆与鉴定

目的:将不同长度的NGAL基因 3′端序列(包括外显子、内含子和部分3′侧 翼非翻译序列)克隆到pGL3 Promote (pGLP)载体中,通过检测报告基因荧光素 酶活力,确认NGAL3′端序列中是否含有增 强子或抑制子元件。方法:应用PCR技术 从SHEEC细胞基因组DNA中扩增出不同 长度的NGAL基因片段F5(1880bp)和F (826bp),将其克隆到pGEM Teasy载体 并测序验证;再亚克隆到pGL3 Promoter载 体中,获得pGLP F5和pGLP F7表达载体 将pGLP F5和pGLP F7载体分别与pRL TK载体共转染HeLa、EC109和Vero细胞 通过检测相对荧光素酶活力,确认这些 NGAL基因片段中是否含有增强子元件 结果:我们成功构建了pGLP F5和pGLP F 重组载体。Hela、EC109和Vero转染细胞 与pGL3 Promoter相比,酶活力未表现出明 显的增强或减弱。结论:在本研究的实验 条件下,NGAL基因F5和F7片段内潜在的 顺式作用元件并没有发挥作用,或作用不 明显。     

核受体PXR在宫颈鳞癌组织及SiHa细胞中的表达及临床意义

目的:探讨核受体孕烷X受体(PXR)在宫颈鳞癌组织的表达及与宫颈鳞癌发生的关系。方法:采用免疫组织化学及细胞免疫化学检测核受体PXR在41例宫颈癌组织及宫颈鳞癌细胞株SiHa中的表达。结果:PXR在宫颈鳞癌细胞株SiHa中有表达;正常宫颈组织有PXR表达,41例宫颈鳞癌组织中PXR的阳性率为59.5%,且宫颈癌组织中明显低表达。结论:PXR的表达水平与宫颈癌的发生有一定的相关性,可能成为今后判断宫颈癌预后有价值的标志物。     

NGAL基因3′端序列转录调控元件的克隆与鉴定

目的：将不同长度的NGAL基因3′端序列(包括外显子、内含子和部分3′侧翼非翻译序列)克隆到pGL3-Promoter(pGLP)载体中，通过检测报告基因荧光素酶活力，确认NGAL3′端序列中是否含有增强子或抑制子元件。方法：应用PCR技术从SHEEC细胞基因组DNA中扩增出不同长度的NGAL基因片段F5(1880bD)和F7(826bp)，将其克隆到pGEM-T easy载体，并测序验证；再亚克隆到pGL3-Pro-moter载体中，获得pGLP-F5和pGLP-F7表迭栽体；将pGLP-F5和pGLP-F7载体分别与pRL-TK载体共转染HeLa、EC109和Vero细胞，通过检测相对荧光素酶活力，确认这些NGAL基因片段中是否含有增强子元件。结果：我们成功构建了pGLP-F5和pGLPF7重组载体。Hela、EC109和Vero转染细胞与pGL3-Promoter相比，酶活力未表现出明显的增强或减弱。结论：在本研究的实验条件下，NGAL基因F5和F7片段内潜在的顺式作用元件并没有发挥作用，或作用不明显。     

新生仔鼠早期性别的快速鉴定

目的：快速鉴定新生仔鼠的性别。方法：根据GenBank上Sry核酸序列,设计小鼠mSry引物。双盲法对12只新生仔鼠（〈7 d龄）及已知性别雄性小鼠抽提鼠尾组织DNA,并进行PCR性别鉴定。结果：雄性仔鼠尾组织DNA样品中扩增出1条189 bp的DNA片段,雌性仔鼠DNA样品没能有效扩增出特异的Sry片段。结论：利用PCR检测鼠尾中的mSry是一简便快捷、有效的新生仔鼠早期性别鉴定手段。     

危重患者血浆中性粒细胞明胶蛋白酶相关载脂蛋白浓度的测定及其临床意义

Objective To detect the concentration of plasma neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) and the clinical significance in critically ill patients. Methods Fifty-four critically ill patients in ICU were enrolled in the present study with 23 health persons as controls. Plasma NGAL concentration was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on the 1 st and 7th day from 54 adult patients in ICU and the controls (control group). Results The plasma NGAL concentrations of ICU patients were significantly higher than those of the controls (P ＜0.001 ). NGAL concentrations were no significant difference between the Death group and the Survival group on the 1 st day(P = 0. 259). But there was a markedly significant difference in Acute Physiology and Chronic Health Evaluation (APACHE) Ⅱ scores (P ＜0. 001 ). The APACHE Ⅱ scores on the 7th day significantly decreased in the improved patients (P =0.019) and showed a subtle tendency of increase in the deteriorated patients ( P =0.403) in comparison to the first day. The plasma NGAL levels followed the same trends, but showing a significant increase even in deteriorated patients ( P = 0. 016 and P= 0. 034, respectively). Conclusions The plasma NGAL concentrations of critically ill patients is significantly increased. Combined with APACHE Ⅱ scores,it can provide useful and available data of the disease state of critically ill patients.     

危重患者血浆中性粒细胞明胶蛋白酶相关载脂蛋白浓度的测定及其临床意义

目的 探讨检测危重患者血浆中的中性粒细胞明胶蛋白酶相关载脂蛋白（NGAL）的浓度及其临床意义.方法 选择23名健康成人作为对照组,54例ICU危重患者作为试验组.动态监测血浆NGAL和C反应蛋白（CRP）浓度,同时进行急性生理学和慢性健康评估（APACHE）Ⅱ评分,并观察预后.血浆中NGAL浓度的测定采用酶联免疫吸附法.结果 试验组患者的NGAL浓度平均为（7.62±3.89）ng/L,对照组为（3.40±0.50）ng/L;试验组CRP浓度平均为（68.90±79.58）mg/L,对照组为（1.73±1.13）mg/L.最终存活的37例患者进入本研究时,平均的APACHEⅡ评分为（13.27±7.02）分,NGAL为（7.61±3.42）ng/L,CRP为（74.48±80.94）mg/L,白蛋白（29.06±6.76）g/L.最终死亡的17例患者进入本研究时,平均的APACHEⅡ评分为（24.59±8.78）分,NGAL为（8.91±4.79）ng/L,CRP为（94.00±115.88）mg/L,白蛋白（30.26±9.68）g/L.危重患者血浆NGAL、CRP浓度明显高于健康成人（P＜0.01）;最终完成2次取样的24例好转患者治疗后血浆NGAL浓度、APACHEⅡ分值均明显下降（P＜0.01）;7例病情恶化最终死亡的患者治疗第7天血浆NGAL浓度显著升高（P=0.02）,而APACHEⅡ分值治疗后较入ICU时有所升高,但差异无统计学意义.入ICU时,最终存活的37例患者和最终死亡的17例患者的NGAL浓度差异无统计学意义（P=0.259）,而APACHEⅡ分值则差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 危重患者血浆NGAL浓度明显高于健康成人.NGAL浓度动态变化可能反映病情的变化,如结合APACHEⅡ评分,有助于更早更准确地评估病情变化,对提高危重患者的抢救成功率具有重要意义.     

危重患者血浆中性粒细胞明胶蛋白酶相关载脂蛋白浓度的测定及其临床意义

Objective To detect the concentration of plasma neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) and the clinical significance in critically ill patients. Methods Fifty-four critically ill patients in ICU were enrolled in the present study with 23 health persons as controls. Plasma NGAL concentration was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on the 1 st and 7th day from 54 adult patients in ICU and the controls (control group). Results The plasma NGAL concentrations of ICU patients were significantly higher than those of the controls (P ＜0.001 ). NGAL concentrations were no significant difference between the Death group and the Survival group on the 1 st day(P = 0. 259). But there was a markedly significant difference in Acute Physiology and Chronic Health Evaluation (APACHE) Ⅱ scores (P ＜0. 001 ). The APACHE Ⅱ scores on the 7th day significantly decreased in the improved patients (P =0.019) and showed a subtle tendency of increase in the deteriorated patients ( P =0.403) in comparison to the first day. The plasma NGAL levels followed the same trends, but showing a significant increase even in deteriorated patients ( P = 0. 016 and P= 0. 034, respectively). Conclusions The plasma NGAL concentrations of critically ill patients is significantly increased. Combined with APACHE Ⅱ scores,it can provide useful and available data of the disease state of critically ill patients.     

NF—κB及其在肿瘤中的生物学行为特征

NF－κB是一类普遍存在的转录因子，参与着150余种基因的转录调控，主要涉及免疫炎症反应、细胞增殖与凋亡等生物学过程。NF－κB可被许多刺激因子激活。近年来，围绕着NF－κB在肿瘤中的生物学行为特征这一问题进行了大量研究，本文综述NF－κB在肿瘤的发生、浸润、转移和耐药中的作用等方面的进展。     

酵母双杂交筛选NGAL相互作用蛋白

目的:中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋 白(neutrophilgelatinase assiociatedlipocalin, NGAL)功能不明,籍筛选与之相互作用蛋白, 构筑相互作用图谱,为揭示其功能提供新途径。 方法:利用蛋白质相互作用原理,应用酵母双杂 交技术,构建pGBKT7 NGAL载体,以NGAL 为诱饵,在人类骨髓cDNA文库中筛选与之相 互作用蛋白的基因。结果:通过酵母交配筛库、 一对一验证和β gal分析筛选出40个阳性克 隆;测序,利用网上数据库(http://www.ncbi. nlm.nih.gov)对序列进行比对,初步确定了31 种基因,其中11种为未知基因,20种为已知基 因。已知基因中含有编码区的有LGALS1、 MT2A、COX1、RNP24、ATP1B3、IGL、IGH VDJ、RARRES2、GYPA、NEB和NPC2。结论: 筛选得到31种可能与NGAL相互作用蛋白的 基因,这为研究NGAL功能及作用机制提供了 新途径。