维生素D对乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞凋亡的影响

目的:探究维生素D对人乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞活力的影响；Hoechst33258染色检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞凋亡的影响；实时定量PCR法检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞凋亡相关分子Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响；无血清悬浮培养法（serum-free medium,SFM）富集乳腺癌干细胞,显微镜下观察维生素D对乳腺癌干细胞球大小和数量的影响；实时定量PCR法检测维生素D对乳腺癌干细胞凋亡相关分子Bax、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。结果:MTT法检测结果显示，维生素D可显著抑制乳腺癌细胞活力，且随着维生素D浓度升高，乳腺癌SUM159细胞活力的下降具有一定的剂量依赖效应，单因素方差分析显示，差异具有统计学意义(P＜0.01)；Hoechst33258染色结果显示，维生素D可诱导乳腺癌SUM159细胞发生细胞凋亡形态改变；进一步PCR法检测结果显示，维生素D可显著上调乳腺癌SUM159细胞促凋亡蛋白Bax mRNA的表达，下调抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达，单因素方差分析显示，差异具有统计学意义(P＜0.01)。SFM培养可有效富集乳腺癌干细胞，维生素D干预可明显抑制SFM富集的乳腺癌干细胞球的大小和数量，且与对照组相比，维生素D可显著上调乳腺癌干细胞球Bax mRNA的表达水平，下调Bcl-2 mRNA的表达水平，单因素方差分析显示，差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论:维生素D可抑制乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞活力，诱导乳腺癌细胞凋亡。     

羟基红花黄色素A对内皮细胞EA.hy926缺氧复氧后凋亡的抑制作用研究

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对缺氧复氧诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测不同缺氧(8、12 h)、复氧(4、8、12 h)时间对细胞活力的影响以及不同浓度HSYA(0.1、1、10、100μmol/L)对缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力的影响。Western blotting法检测HSYA对缺氧12 h,复氧8 h后EA.hy926细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9蛋白表达的影响。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞中Bax、Bcl-2m RNA表达的影响。Hoechest染色、流式细胞术检测HSYA对缺氧12 h复氧8 h后EA.hy926细胞凋亡的影响。结果与对照组比较,缺氧8、12 h,复氧4、8、12 h后EA.hy926细胞活力均显著下降,其中缺氧12 h、复氧8 h后细胞活力下降最为显著(P0.001),且Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著上升、Bcl-2蛋白表达水平显著下降。与模型组比较,HSYA 10μmol/L能够明显提高缺氧复氧后细胞活力(P0.01),并显著上调Bcl-2蛋白表达水平,下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结论 HSYA能有效抑制缺氧复氧导致的EA.hy926凋亡,其机制可能与下调Bax、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达有关。     

维生素D调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌干细胞活性

目的 探讨维生素D对乳腺癌干细胞活性的影响及其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测不同浓度（1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L）维生素D对乳腺癌SUM159细胞活力的影响,用无血清培养基悬浮培养富集乳腺癌干细胞CSCSUM159,分析维生素D对乳腺癌干细胞活性的影响。Western blot和Real-time qPCR 分别检测乳腺癌干细胞标志物CD133、CD44、Oct-4、Nanog以及Wnt/β-catenin信号通路相关分子p-GSK-3β、β-catenin、c-Myc和cyclin-D1的表达。结果 MTT法检测结果显示,1 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L维生素D均可显著抑制乳腺癌SUM159细胞的活力（P＜0.01）。无血清悬浮培养可有效富集乳腺癌干细胞CSCSUM159。维生素D可使乳腺癌干细胞CSCSUM159的成球数量减少,且细胞成球大小较对照组小。Western blot和Real-time qPCR检测结果显示,维生素D干预后,乳腺癌干细胞CSCSUM159中CD133、CD44和Nanog的蛋白表达下调,Wnt/β-catenin信号通路相关分子p-GSK-3β、β-catenin和c-Myc蛋白表达及β-catenin、c-Myc和cyclin-D1 mRNA表达亦下调（P＜0.05）。结论 维生素D可抑制乳腺癌干细胞活性,可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路活性有关。