雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞生长和对HIF-1α与VEGF表达影响的观察

目的:探讨mTOR抑制剂雷帕霉素与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对HIF-1α和VEGF表达的影响。方法:分别以雷帕霉素、顺铂及雷帕霉素联合顺铂处理体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法检测人宫颈癌Hela细胞的抑制率,金氏公式评价两药联合用药的效果,采用RT-PCR法、蛋白质印迹法检测各组细胞HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达。结果:雷帕霉素和顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,分别联合应用2种浓度雷帕霉素(10和20nmol/mL)与顺铂(0.25和0.5mg/mL)协同治疗指数q值均>1.15,两者有协同作用。雷帕霉素与顺铂联合用药HIF-1αmRNA的表达为0.242±0.048,单独用药雷帕霉素组为0.428±0.068,顺铂组为0.357±0.051;雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF mRNA的表达为0.498±0.093,单独用药雷帕霉素组为0.651±0.112,顺铂组为0.623±0.125,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P<0.05;雷帕霉素与顺铂联合用药组HIF-1α蛋白的表达为0.514±0.092,单独用药雷帕霉素组为0.625±0.132,顺铂组为0.635±0.120;雷帕霉素与顺铂联合用药组VEGF蛋白的表达为0.409±0.082,单独用药雷帕霉素组为0.650±0.114,顺铂组为0.623±0.102,联合用药组与单独用药组比较表达量明显降低,P<0.05。结论:单独及联合应用雷帕霉素与顺铂对宫颈癌Hela细胞的生长均有抑制作用,两药联合应用有明显的协同作用,雷帕霉素联合顺铂具有明显下调HIF-1α、VEGF基因和蛋白表达的作用。     

雷帕霉素联合顺铂抑制人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的生长及其机制

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)与顺铂(cisplatin,DDP)单独及联合应用对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制。方法:裸鼠皮下接种HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组、RAPA组、DDP组、RAPA+DDP组。治疗过程中检测肿瘤的质量、体积,RT-PCR、免疫组化及Western blotting检测低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA及蛋白的表达。结果:RAPA+DDP组与RAPA组相比,移植瘤的质量[(0.42±0.04)vs(0.53±0.03)g,P<0.05]、体积[(568.70±36.12)vs(797.81±111.98)mm3,P<0.01]都明显减小。RAPA+DDP组与DDP组相比,移植瘤的质量[(0.42±0.04)vs(0.52±0.04)g,P<0.05]、体积[(568.70±36.12)vs(766.16±132.27)mm3,P<0.01]也明显减小。RT-PCR及Western blotting结果显示:RAPA+DDP组与RAPA组、DDP组相比,移植瘤中HIF-1αmRNA水平下调[(31.22±0.71)vs(50.58±1.25)、(48.63±1.56),P<0.05];HIF-1α蛋白水平也下调[(38.07±0.09)vs(55.69±3.60)、(59.50±1.54),P<0.05]。另外,RAPA+DDP组移植瘤中VEGF mRNA水平与RAPA组、DDP组相比明显降低[(46.64±0.60)vs(62.20±0.62)、(61.64±1.21),P<0.05];RAPA+DDP组VEGF蛋白水平也下降[(119.28±2.69)vs(150.31±4.77)、(153.84±3.39),P<0.05]。免疫组化结果显示:RAPA+DDP组与RAPA组、DDP组相比,移植瘤中HIF-1α的AOD值降低[(0.37±0.03)vs(0.57±0.06)、(0.55±0.06),P<0.05];RAPA+DDP组移植瘤中VEGF的AOD值也降低[(0.48±0.03)vs(0.62±0.04)、(0.61±0.07),P<0.05]。结论:RAPA与DDP联合应用可抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与下调HIF-1α、VEGF的表达有关。