2型糖尿病患者血清同型半胱氨酸水平分析

目的 探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)水平与2型糖尿病(T2DM)的相互作用关系.方法 选择该院内分泌科2011年7～12月住院的T2DM患者(T2DM组),以及相同数量同期健康体检者(健康对照组)作为研究对象,采用循环酶法检测血清Hcy,同时检测糖化血红蛋白(HbA1c)、血脂、血糖、叶酸、维生素B12.结果 T2DM组血清Hcy水平[(18.4±4.5)μmol/L]明显高于健康对照组[(11.2±2.5)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.01),2组髙Hcy血症的发生率分别为33.70%与9.70%.以血清Hcy>15 μmol/L为标准,将T2DM组分成高Hcy组和正常Hcy组,2组慢性并发症的发生率分别为64.29%、34.55%,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 T2DM患者血清Hcy水平明显高于健康对照组,高Hcy与T2DM慢性并发症的发生有关.     

表达白细胞介素-23基因的小鼠乳腺癌细胞系的建立及其对肿瘤的抑制作用

目的 利用逆转录病毒作为载体将小鼠白细胞介素（IL）-23基因转染小鼠乳腺癌细胞（MA-891），建立分泌IL-23的肿瘤细胞株（IL-23／MA-891），观察对其生长特点及体内成瘤情况。方法 应用逆转录病毒载体（LXSN）将IL-23基因质粒经崛（ecotropic）和PA317（amphotropic）两种包装细胞包装后，转染MA-891细胞，经G418筛选后获得表达IL-23的IL-23／MA-891细胞。采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）鉴定转染细胞mRNA的表达；激光共聚焦显微镜（LSCM）观察其蛋白表达；用ELISA法检测IL-23／MA-891细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力；用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞体外增殖能力；用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-23的IL-23／MA-891细胞观察其体内致瘤性的变化，小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果 IL-23转染MA-891细胞后，在mRNA水平水平可获得稳定表达；LSCM可观察到其细胞内表达。IL-23基因转染MA-891细胞后，与对照组比较，其体外增殖能力不受影响，致瘤率也无改变，但IL-23基因转染组肿瘤生长明显受到抑制（P〈0．05）。结论 成功建立表达小鼠IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞系（IL-23／MA-891）；在体内，IL-23转染组具有明显的抗肿瘤作用。     

IL-23基因转染小鼠乳腺癌细胞的体内外促凋亡作用研究

目的:将小鼠IL-23基因转染小鼠乳腺癌细胞MA-891,检测该细胞在体内外的凋亡变化,探讨IL-23抗肿瘤作用机制.方法:应用逆转录病毒载体(LXSN)将含 IL-23 基因质粒经ψ2(亲嗜性)和PA317(双嗜性) 2种细胞包装,G418筛选获得携带 IL-23 基因的病毒,后者转染MA-891细胞,经G418筛选后获得IL-23/MA-891阳性克隆.用ELISA法检测IL 23/MA-891细胞分泌IL-23的能力,用MTT比色法检测细胞体外增殖能力.小鼠皮下接种转染IL-23/MA-891细胞,观察其体内致瘤性变化;用流式细胞术及TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况;用RT-PCR和Western 印迹法检测肿瘤组织Fas和survivin的表达.结果: IL-23 基因成功转染MA-891细胞,获得了IL-23高表达细胞IL-23/MA-891.转染 IL-23 基因不影响MA-891细胞的体外生长和细胞凋亡,但体内 IL-23 基因转染组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤组织细胞凋亡率增高( P <0.01),细胞表面Fas的表达水平明显增加( P <0.01),survivin表达水平明显降低( P <0.01).结论:转染小鼠 IL-23 基因后对小鼠乳腺癌细胞MA-891的体外凋亡无影响,但在体内 IL-23 可能通过降低survivin表达和上调Fas表达,诱导细胞凋亡而产生抗肿瘤作用.     

IL-18基因转染膀胱癌细胞的建立及其抑瘤作用研究

目的 将IL-18基因转染膀胱癌细胞(T24),检测该细胞体内外的凋亡变化,探讨IL-18的抗肿瘤作用机制.方法 用含IL-18的基因IL-18/PA317转染T24细胞,经G418筛选后获得IL-18/T24阳性克隆.采用RT-PCR鉴定转染细胞mRNA的表达;用ELISA法检测IL-23/NA-891细胞培养上清中IL-18的分泌;用MTT比色法检测细胞体外增殖能力;观察IL-18/T24细胞生长情况、移植瘤的生长情况;用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率.结果 成功将IL-18基因转染T24细胞获得高表达IL-18细胞IL-18/T24.转染IL-18基因不影响124细胞的体外生长和细胞凋亡,但体内IL-18基因转染组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤组织细胞凋亡率增高(P<0.01).结论转染IL-18基因后时膀胱癌细胞(IL-18/T24)的体外凋亡无影响,但在体内IL-18能够诱导细胞凋亡,产生抗明显肿瘤作用.     

FasL反义RNA在人食管癌TE11细胞中的表达及意义

目的 采用反义RNA技术,构建人FasL反义RNA重组逆转录病毒载体.以FasL表达阳性的人食管癌细胞株TE11为模型,研究反义RNA重组逆转录病毒表达载体对细胞FasL的阻断作用.方法 将人FasL全基因序列的DNA片段反向插入逆转录病毒pLXSN质粒上的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ位点间,建立重组质粒pL(FasL-AS)SN.将pL(FasL-AS)SN导入包装细胞PA317中,经G418筛选后收获培养上清,转染TE11细胞,建立TE11-hFasL-AS细胞系.用PCR技术检测pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11细胞中的整合;用RT-PCR法检测TE11细胞经重组病毒感染前后FasL mRAN表达量的变化;采用流式细胞仪检测TE11和TE11-hFasL-AS细胞FasL的表达及其对U937细胞凋亡的诱导.结果 将pL(FasL-AS)SN转染TE11细胞后,FasL反义RNA已整合至TEll细胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS细胞FasL mRAN及蛋白的表达水平均显著下降(P＜0.01);与TE11-hFasL-AS细胞混合培养后,U937细胞凋亡率明显低于未转染组(P＜0.01).结论 成功构建了人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体,用该载体转染的TE11细胞中FasL的表达水平明显受抑,为Fas/FasL参与的体内许多病理进程的机制研究及临床应用提供实验基础.     

白细胞介素23在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫机制

目的: 研究白细胞介素23(IL-23)在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫功能变化.方法: 将逆转录病毒介导转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞(IL-23/MA-891)、转染逆转录病毒空载体的小鼠乳腺癌细胞(LXSN/ MA-891)及亲代小鼠乳腺癌细胞(MA-891)分别接种于小鼠皮下, 观察小鼠成瘤及肿瘤生长情况; 30 d时取3组小鼠脾脏和肿瘤组织, 用ELISA法检测3组小鼠脾细胞在MA-891诱导下IFN-?、 TNF-á、 IL-12和IL-4的产生情况; 用流式细胞术(FCM)检测肿瘤组织细胞表面分子MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86的表达, 检测脾细胞中CD11c阳性细胞的比率, 并对脾细胞中CD4 、 CD8 淋巴细胞进行分选; 用免疫组织化学技术对3组肿瘤组织中CD4 、 CD8 淋巴细胞浸润情况进行检测.结果: IL-23基因转染组小鼠皮下结节生长速度明显慢于接种空载体转染组及未转染组; 接种IL-23/MA-891细胞的小鼠脾细胞可产生较水平的IFN-γ、 TNF-á和IL-12等Th1类及相关细胞因子, 与接种LXSN/MA-891细胞和MA-891细胞2组小鼠的脾细胞相比明显增高(P<0.01), 而Th2类细胞因子IL-4的水平却无统计学意义(P>0.05); 接种IL-23/MA-891细胞组小鼠脾细胞中CD11c阳性细胞率、 CD4 、 CD8 淋巴细胞比率以及肿瘤组织中CD4 、 CD8 淋巴细胞浸润程度均较LXSN/MA-891、 MA-891组明显增加(P<0.01); IL-23/MA-891细胞组小鼠肿瘤组织细胞表面MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ、 CD80、 CD86分子的表达明显提高(P<0.01).结论: 转染IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞所分泌的IL-23具有生物学活性, 增强了细胞免疫功能, 在小鼠体内发挥了明显的抗肿瘤作用.     

逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在鼠高转移性乳腺癌细胞系MA-891中的表达

目的：建立表达小鼠IL-23基因的鼠乳腺癌细胞系IL-23／MA-891，探讨外源性IL-23基因对MA-891细胞生长及其生物学性状的影响。方法：将插入IL-23基因的质粒，应用逆转录病毒载体LXSN经感染皿（ecotropic）和PA317（amphotropic）两种包装细胞包装，经G418筛选获得表达IL-23分子的PA317阳性细胞克隆，用IL-23／PA317培养上清转染MA-891细胞，获得表达IL-23的IL-23／MA-891细胞。分别用RT-PCR法、ELISA法和免疫组化染色法分析IL-23／MA-891细胞表达IL-23的mRNA和蛋白的水平，筛选出高表达IL-23的IL-23／MA-891细胞克隆用于下层研究中；用流式细胞仪检测MA-891细胞中MI-ICⅠ、MI-ICⅡ、CD80、CD86以及FAS蛋白的表达、细胞周期变化及细胞凋亡情况；用ELISA法检测IL-23／MA-891细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力，用MTT比色法检测细胞增殖反应。结果：外源性IL-23基因转染的小鼠乳腺癌细胞系IL-23／MA-891，在mRNA水平和蛋白水平均可获得稳定表达；IL-23／MA-891细胞与LXSN／MA-891和MA-891比较，细胞周期及细胞凋亡率无显著性差异（P〉0．05），H-2Kb（MHCⅠ类分子）、Ⅰ—Ab（MHCⅡ／类分子）、CD80、CD86以及FAS蛋白的表达水平无显著性差异（P〉0．05）；IL-23／MA-891细胞的增殖反应与LXSN／MA-891和MA-891细胞相比虽有所降低，但无显著性差异（P〉0．05）。然而，IL-23／MA-891细胞的培养上清可明显促进小鼠脾细胞分泌IFN-γ（P〈0．01）。结论：建立的稳定表达IL-23的IL-23／MA-891细胞，具有较强的免疫学调节活性，其生物学形状与MA-891和LXSN／MA-891细胞相比较没有明显差异，但可进一步用于肿瘤相关免疫基因治疗的研究。     

非小细胞肺癌患者外周血癌胚抗原和细胞角蛋白19表达与患者预后的关系

目的 探讨外周血中癌胚抗原(CEA)mRNA和细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应技术检测了84例NSCLC患者外周血细胞中CEAmRNA和CK19 mRNA的表达.结果 NSCLC患者外周血中CEAmRNA与CK19mRNA的阳性表达率分别为70.23%(59/84)和67.9%(57/84);NSCLC患者外周血中CEA与CK19的阳性表达率呈正相关(c=0.333).CEA与CK19呈阴性表达的NSCLC患者,其生存例数显著性多于阳性组(P＜0.01～0.05).接受化疗者CEA与CK19表达阳性者生存时间明显低于阴性表达者(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中CEA与CK19的表达呈正相关,检测血液中CEA和CK19表达有助于客观评估NSCLC预后.