黄芪甲苷减轻环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢炎症反应

目的：研究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ, AS-IV)是否通过抑制核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB信号通路降低环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)诱导的早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency, POI)模型大鼠炎症反应。方法：动情周期正常的雌性SD大鼠80只,选取12只为正常对照组,其余68只大鼠用CTX腹腔注射诱导建立POI模型。将模型制备成功的60只大鼠随机分为5组,每组12只,分别为POI模型组、芬吗通组、低剂量AS-IV组、中剂量AS-IV组和高剂量AS-IV组,干预28 d后取样。采用ELISA法测定血清中17β-雌二醇(17β-estradiol, 17β-E2)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone, FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone, LH)水平;转录组测序筛选差异表达基因及功能富集;HE染色法观察卵巢组织病理变化并进行卵泡计数;免疫组织...     

逍遥散对慢性应激大鼠海马区Npas2基因表达的影响及其DNA甲基化修饰机制研究

目的采用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区神经PAS域蛋白2(neuronal PASdomain protein 2,Npas2)基因的表达及其DNA特定区域甲基化的修饰情况。方法将90只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组和逍遥散治疗组,共3组,每组30只。造模采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时每天给予逍遥散2 m L,连续造模21 d。采用RT-PCR一步法及免疫组织化学染色法测定各组大鼠海马区Npas2基因及其蛋白表达情况,基因甲基化检测采用SequenomMass ARRAY法。结果慢性应激损伤大鼠海马Npas2m RNA及其相应蛋白表达有明显变化,与空白对照组和逍遥散治疗组比较差异均有统计学意义,但其m RNA及相应蛋白表达变化趋势不一致,其基因某些特定区域的甲基化程度有升高的趋势(个别位点有统计学差异)。逍遥散治疗能够明显逆转慢性应激引起的Npas2m RNA及其相应蛋白的表达变化,相应区域DNA甲基化程度表现出下调趋势(个别位点有统计学差异)。结论 Npas2基因参与了慢性应激损伤过程,其表达变化可能与其基因某些特定位点的甲基化修饰变化有关,逍遥散能够逆转这种表达改变,可能是通过调节Npas2基因特定位点的甲基化程度发挥作用。     

人胎盘间充质干细胞移植通过降低超氧化物歧化酶1和解耦联蛋白-2的表达提高卵巢功能

目的探讨人胎盘间充质干细胞(h PMSC)移植治疗对环磷酰胺所致卵巢早衰(POF)模型SD大鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)和解耦联蛋白-2(UCP-2)表达的影响。方法将60只雌性SD大鼠随机分为4组(n=15):空白对照组,POF模型组,治疗对照组,h PMSC移植组。以首计量50 mg/kg、维持剂量8 mg/kg连续14 d给大鼠腹腔注射环磷酰胺溶液建立POF模型,观察大鼠动情周期变化,采用ELISA方法测定血清中雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)、活性氧族(ROS)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)水平;HE染色方法检测卵巢组织形态学及卵泡计数,VG染色法观察卵巢组织纤维化情况;采用免疫组织化学和Western blotting法测定SOD1和UCP-2蛋白表达。结果 ELISA结果显示:模型组血清FSH水平[(10.60±1.0)IU/L]明显高于空白对照组[(5.83±0.92)IU/L](P0.01),而E2、AMH水平[(35.52±10.27)ng/L、(2 090.6±397.5)ng/L]则明显低于空白对照组[(65.62±3.76)ng/L、(3 636.39±204.46)ng/L],差异有统计学意义(P0.01)。与空白对照组相比h PMSC移植组血清中ROS和8-OHd G升高(P0.05)。卵泡计数显示h MSC移植组闭锁卵泡数(5.36±1.11)显著低于治疗对照组(8.01±2.22)和POF模型组(11.21±1.69)(P0.05)。与治疗对照组相比,h PMSC移植组中ROS和8-OHdG显著下降(P0.05)。VG染色显示,与治疗对照组比,hP MSC移植组纤维化面积比例显著降低(P0.05)。Western blotting结果显示,与治疗对照组相比,hP MSC移植组中SOD1和UCP-2蛋白表达量显著下降(P0.05),而hP MSC移植组与对照组则差异无统计学意义(P0.05);免疫组织化学结果显示模型组中SOD1和UCP-2蛋白表达相较于治疗对照组是降低的,而hP MSC移植组相较于空白对照组则差异无统计学意义。结论 hP MSC移植改善POF模型SD大鼠氧化应激,降低SOD1及UCP-2表达,起到保护卵巢线粒体功能的作用。     

慢性应激损伤对大鼠海马GABRD基因表达的影响及逍遥散干预机制的研究

目的:用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区GABRD基因的表达情况。方法:以45只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组15只。造模方法采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2 mL/只·d,连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。运用Agilent表达谱芯片筛选各组差异基因,并选取GABRD基因,采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法对各组大鼠海马区域GABRD基因mRNA及其蛋白表达情况加以验证。结果:Agilent表达谱芯片结果显示慢性应激模型组大鼠海马GABRD下调,逍遥散干预后有上调趋势,但无统计学意义。RT-PCR及免疫组化法验证结果显示:慢性应激模型组大鼠海马GABRD mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,中药复方逍遥散可从蛋白水平纠正这种下调的表达变化。结论:γ-氨基丁酸A受体δ亚型表达变化参与了慢性应激损伤的过程,逍遥散可能通过调控这一基因的表达而发挥对慢性应激损伤所致一系列神经、精神紊乱症状的保护性调节作用。     

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区Cacnb4基因表达的影响

目的:本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况。方法:以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只。造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2m L/(只·d),连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况。结果:慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化。结论:电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。     

小鼠卵巢玻璃化冻融过程中重组人卵泡刺激素干预对血管内皮生长因子(VEGF)及整合素αvβ3表达的影响

目的:观察重组人卵泡刺激素(r FSH)对小鼠卵巢血管内皮生长因子(VEGF)以及整合素αvβ3表达的影响。方法:将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、300 IU/L r FSH干预玻璃化冻存组(r FSH-VG)。通过对冻融卵巢内各级卵泡计数、免疫组织化学观察VEGF和整合素αvβ3在卵巢不同细胞中的定位,Western blotting检测VEGF、整合素αv和整合素β3蛋白表达量。结果:各级卵泡计数、VEGF及整合素β3的蛋白表达均为r FSHVG组优于VCG组(P0.05),整合素αv的表达组间均无统计学差异(P0.05)。结论:玻璃化冻融过程中添加r FSH可以上调VEGF及整合素β3蛋白的表达。     

小鼠卵巢玻璃化冻存过程中FSH干预对VEGF及VEGFR-2表达的影响

目的通过在玻璃化冻存不同时段给予小鼠卵巢组织重组人促卵泡刺激素(rFSH)干预,观察rFSH对VEGF以及VEGFR-2表达的影响,探索卵巢玻璃化冻存过程中最佳的FSH保护途径。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3IU.mL-1FSH干预玻璃化冻存组,包括全程添加FSH组(OG-FSH)、冻存前添加FSH组(BG-FSH)以及冻存后添加FSH组(AG-FSH)。通过形态学技术观察正常卵泡百分比;采用免疫组织化学技术观察卵巢不同细胞VEGF以及VEGFR-2的表达;通过Western-blot方法观察并分析不同玻璃化冻存时段的FSH干预对卵巢VEGF以及VEGFR-2蛋白表达量的影响。结果正常卵泡百分比、VEGF及VEGFR免疫组织化学和Western-blot检测结果组间比较差异均有统计学意义。其中,OG-FSH组各项检测指标均高于其他各组(P<0.05),且BG-FSH、AG-FSH组与FCG相似,高于VCG组(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH干预有利于提高正常卵泡数,以及VEGF、VEGFR-2蛋白的表达。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨浓缩当归丸对缓解卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的影响

目的：探讨浓缩当归丸改善卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的作用及机制。方法：36只成年雌性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、雌二醇(E₂)/地屈孕酮片组、浓缩当归丸高、中、低剂量组,每组6只。除正常组外,其余各组大鼠每日腹腔注射乙烯基环己烯(VCD)80 mg·kg^-1造模,连续14 d。从第15天起,模型组灌胃生理盐水2 mL·kg^-1;雌二醇/地屈孕酮片组灌胃芬吗通0.3 mg·kg^-1;浓缩当归丸高、中、低剂量组灌胃浓缩当归丸2.08、4.16、8.32 g·kg^-1,每日1次,连续给药28 d。测定大鼠卵巢指数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中相关激素E₂、促卵泡激素(FSH)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)和抗缪勒管激素(AMH)水平,以及血清过氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)含量;硫代巴比妥酸(TAB)法检测血清丙二醛(MDA)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察卵巢形态学变化;免疫组化法(IHC)检测卵巢组...     

EGF通过PI3K/AKT通路介导小鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的探讨表皮生长因子（EGF）介导,经PI3K/AKT信号通路调控小鼠卵巢颗粒细胞增殖的作用与机制。方法取分离纯化的小鼠卵巢颗粒细胞,添加10ng·mL^-1的EGF对其培养24h后,然后再添加20μM浓度的P13K抑制剂LY294002处理细胞72h,利用CCK-8检测颗粒细胞增殖情况;应用Real-time PCR法检测AKT mRNA的表达;应用Western blot法检测体外培养小鼠颗粒细胞中总AKT（t-AKT）及磷酸化AKT Thr308位点（p-AKTThr308）蛋白的表达情况。结果 （1）10ng·mL^-1的EGF对小鼠颗粒细胞增殖效应明显,能够显著提高AKT基因在颗粒细胞中的表达（P〈0.05）,能显著性促进t-AKT及p-AKTThr308蛋白的表达（P〈0.05）。（2）PI3K特异性抑制剂LY294002明显抑制EGF促进颗粒细胞增殖的效应（P〈0.05）。结论EGF能活化小鼠颗粒细胞的PI3K/AKT信号通路,促进颗粒细胞生长、增殖。     

妇科养荣胶囊改善化疗所致小鼠卵巢功能损伤的效果

目的:观察妇科养荣胶囊(Fu Ke Yang Rong capsule,FKYRC)对卵巢损伤小鼠卵巢储备功能和生育力的保护作用。方法:通过成年雌性小鼠一次性腹腔注射120 mg/kg环磷酰胺和10 mg/kg白消安建立卵巢损伤小鼠模型,于造模前7 d至造模后60 d每日对卵巢损伤小鼠用高、中、低剂量(6 g/kg、4 g/kg和2 g/kg)FKYRC(H组、M组、L组)连续灌胃给药;同时,于造模前7 d一次性皮下注射给予Gn RHa(38 mg/kg)作为阳性对照组(Gn RHa组),用生理盐水(0.2 m L/d)代替FKYRC连续灌胃作为卵巢损伤对照组(模型组),另设正常对照组:非卵巢损伤正常小鼠腹腔注射给予等体积DMSO(NC组)。分别于造模后30 d和60 d取材,计数卵巢组织中各级卵泡数量,检测血清E2、FSH、抑制素B(INHB)和抗苗勒氏管激素(AMH)水平,检测卵巢组织中翼状螺旋/叉头转录因子2(FOXL2)和AMH蛋白的表达水平。并观察造模60 d后各组妊娠率和窝仔数。结果:各给药组和模型组小鼠血清E2低于NC组(P0.05),但FSH水平组间无统计学差异(P0.05)。造模各组卵泡数明显低于NC组(P0.05),且H组和Gn RHa组造模后60 d时卵巢组织中窦前卵泡与窦卵泡数较高,但各干预组与模型组比较无统计学差异(P0.05)。模型组小鼠卵巢组织中FOXL2和AMH蛋白表达水平显著低于各FKYRC干预组(P0.05),H组的妊娠率(80.00%)显著高于模型组(36.36%)(P0.05)。结论:连续FKYRC(6 g/kg)给药60 d后可明显改善烷化剂所致卵巢损伤小鼠的卵巢储备功能和生育能力,其机制可能与上调颗粒细胞中FOXL2和AMH的表达水平相关。