消脂化纤汤联合BM-MSCs移植对NASH肝硬化小鼠肝细胞再生的影响研究

目的 探讨消脂化纤汤联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植，对改善实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝硬化炎症损伤及肝细胞再生的效应及机制。方法 62只SPF级健康雄性C57BL/6小鼠随机分为6组：空白对照组、模型对照组、自然恢复对照组、消脂化纤汤组、BM-MSCs移植组、消脂化纤汤联合BM-MSCs移植组，每组8只。除空白对照组和BM-MSCS组外，其余5个组小鼠均采用蛋氨酸-胆碱缺乏饮食联合四氯化碳腹腔注射制备NASH肝硬化模型，共12周，12周末随机处死6只小鼠验证模型成功。分离健康小鼠BM-MSC并进行体外培养，取第三代培养细胞通过小鼠尾静脉注射进行移植。依据实验设计，各组小鼠于第13周开始给予相应干预措施，共4周。第16周末处死各组小鼠，提取血液并分离血清；在无菌低温条件下取小鼠肝脏并制备肝脏组织匀浆上清液，并分离肝脏原代细胞，提取肝脏细胞总mRNA。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)含量；检测肝组织肝再生增强因子(ALR)水平；检测肝细胞白介素17受体(IL-17R)信号通路关键分子IL-17RA、肿瘤坏死因子受体...     

基于IL-23/IL-17轴探讨消脂化纤汤联合BM-MSCs移植对实验性NASH肝硬化小鼠的作用效应

目的：基于IL-23/IL-17轴探讨消脂化纤汤联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝硬化小鼠的作用。方法：56只健康SPF级C57BL/6小鼠随机选出8只用于骨髓间充质干细胞的分离与培养，8只小鼠作为空白对照组，其余40只小鼠采用蛋氨酸胆碱缺乏饮食(MCD)联合10%四氯化碳(CCl4∶橄榄油=1∶9)腹腔注射共8周制备实验性NASH肝硬化小鼠模型。造模成功后将其分为模型组、自然恢复组、中药干预组、BM-MSCs移植组和中药干预联合BM-MSCs移植组。BM-MSCs移植组经尾静脉注射BM-MSCs，中药干预组给予消脂化纤汤方灌胃，中药干预联合BM-MSCs移植组予以消脂化纤汤方灌胃联合尾静脉注射BM-MSCs。BM-MSCs移植在第9周进行，灌胃均为每日2次，连续4周，12周末处死小鼠并采集血液及标本。采用全自动生化分析仪检测血清生化指标(ALT、AST、ALB),ELISA法测定血清及肝组织炎性因子IL-23、IL-17水平，ELISA法测定血清及肝组织中肝细胞再生增强因子(ALR)表达，RT-qPCR法检测肝脏淋巴细胞中IL-17、IL-23mRNA的表达。结果：小鼠一般状态观察，与空白对照组比较，模型组小鼠精神萎靡，活动减少，毛色暗，进食减少，体质量逐渐降低；各干预组较模型组均有不同程度改善；与空白对照组比较，模型组和自然恢复组小鼠血清ALT及AST活性、血清及肝组织炎性因子(IL-23、IL-17)水平、肝脏淋巴细胞中IL-17和IL-23 mRNA相对表达水平明显升高(P<0.05)，血清及肝组织ALR水平、ALB含量降低(P<0.05)；与模型组比较，中药干预组、BM-MSCs移植组、中药干预联合BM-MSCs移植组小鼠血清ALT及AST活性、血清及肝组织炎性因子(IL-23、IL-17)水平、肝脏淋巴细胞中IL-17和IL-23 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.01)，血清及肝组织ALR水平、ALB含量升高(P<0.01)；与BM-MSCs移植组和中药干预组比较，中药干预联合BM-MSCs移植组改善最为明显(P<0.05)。结论：消脂化纤汤联合BM-MSCs移植对改善实验性NASH肝硬化小鼠肝脏功能、促进BM-MSCs移植转/分化及肝脏细胞再生具有良好效应，其机制可能与抑制机体IL-23/IL-17炎症轴过度激活，改善肝脏免疫微环境相关。