丁香茄生物碱对人非小细胞肺癌体外作用及其机制研究

目的研究丁香茄生物碱对人非小细胞肺癌A549抗肿瘤转移作用及其机制。方法采用MTT法检测丁香茄生物碱对非小细胞肺癌A549细胞毒活性;划痕实验和Transwell细胞侵袭实验检测药物对肿瘤细胞体外迁移和侵袭作用的影响;ELISA法检测药物对细胞金属基质蛋白酶2(MMP-2)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)表达的变化。结果丁香茄生物碱可显著抑制肿瘤细胞的增殖(P0.05);抑制A549细胞的迁移和侵袭,高剂量抑制率为63.4%;与对照组比较,丁香茄生物碱组MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论丁香茄生物碱可对人非小细胞肺癌A549增殖,抑制肿瘤细胞侵袭,其作用机制可能与抑制MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

葛根总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究葛根总黄酮对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:以HUVECs为研究对象,实验分为空白组、模型组、阳性药组(10μmol·L~(-1)依达拉奉)和葛根总黄酮10,20,40,80,160 mg·L~(-1)组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测葛根总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及NO含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中内皮素-1(ET-1)含量;采用二氯荧光乙酰乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0.01),SOD活性,NO水平和e NOS蛋白表达显著降低(P0.01),MDA,ET-1水平,细胞ROS水平和VCAM-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,葛根总黄酮(40,80,160 mg·L~(-1))可以显著提高氧化应激损伤的HUVECs的存活率(P0.05,P0.01),葛根总黄酮(20,40,80 mg·L~(-1))可显著增加SOD活性,升高NO水平,显著降低MDA,ET-1水平,显著降低细胞ROS水平,显著升高e NOS,降低VCAM-1的表达(P0.05,P0.01)。结论:葛根总黄酮对H2O2诱导HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD,MDA,ET-1,NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白e NOS,VCAM-1的表达有关。     

基于网络药理学和分子对接技术探究生脉注射液对急性心肌梗死与短暂性脑缺血发作异病同治的机制

摘要：目的:采用网络药理学方法和分子对接技术,对生脉注射液治疗急性心肌梗死（AMI）与短暂性脑缺血发作（TIA）的异病同治机制进行研究。方法:通过TCMSP数据库、ETCM数据库和SwissADME对生脉注射液进行活性成分的收集与筛选,在PharmMapper中收集活性成分对应的人类靶点。在DisGeNET和GeneCards数据库获取两种疾病靶点,与生脉注射液靶点取交集得到关键靶点,并利用Cytoscape3.7.2绘制药物-靶点网络图。通过STRING数据库对交集靶点进行蛋白质互相作用分析并筛选出关键靶点,用R语言clusterProfiler程序包对核心靶点进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,并用R语言绘图。选取核心成分与部分靶点用Autodock Vina进行分子对接。结果:筛选得到生脉注射液25种活性成分,对应62个关键靶点。GO功能注释与KEGG富集分析结果表明,生脉注射液治疗AMI与TIA主要涉及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、白细胞介素17（IL-17）等信号通路。分子对接结果显示生脉注射液关键成分与相关靶点有较强的结合活性。结论:生脉注射液中的菊黄质、（1S,2R,4S）-冰片β-D-吡喃葡萄糖苷、去氧三尖杉酯碱、叶含长管贝壳杉素A等活性成分,主要作用于丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、半胱氨酸蛋白酶3（CASP3）、热休克蛋白90AA1（HSP90AA1）、表皮生长因子受体（EGFR）等靶点,通过促进细胞增殖、改善血流状况、减轻炎性损伤、抑制细胞凋亡等途径发挥治疗AMI和TIA的作用。本研究揭示了生脉注射液对AMI与TIA异病同治的多成分、多靶点、多通路的作用机制,为其后期实验研究和临床应用提供参考依据。     

痰喘宁合剂平喘、镇咳、祛痰作用研究

目的研究痰喘宁合剂平喘、镇咳、祛痰作用。方法采用卵蛋白所致大鼠哮喘模型,观察大鼠气道阻力(RL)的变化,运用ELISA法检测分析各组大鼠血清中Ig E、IL-4、IL-17和TNF-α水平,并在镜下进行实验大鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF) WBC及EOS计数,HE染色观察肺组织病理变化并对其评分。采用氯化乙酰甲胆碱及磷酸组胺引喘豚鼠,观察痰喘宁合剂的平喘作用。采用氨水引咳小鼠、枸橼酸引咳豚鼠,观察痰喘宁合剂的镇咳作用。采用小鼠气管段酚红排泌量实验,观察痰喘宁合剂的祛痰作用。结果痰喘宁合剂可降低哮喘大鼠气道阻力,降低血清IL-4、IL-17和TNF-α水平,减少BALF中WBC及EOS数量,改善肺组织损伤情况,延长豚鼠引喘潜伏期(P <0.05或P <0.01);延长豚鼠及小鼠咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数(P <0.05或P <0.01);增加酚红排泌量(P <0.05或P <0.01)。结论痰喘宁合剂具有平喘、镇咳、祛痰作用。