hEGF和hbFGF的C端(78-154aa)融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达。方法:将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF5端的231bp的片段连接,克隆到表达载体pJN,构建出含融合基因的表达质粒pJRH。将pJRH转化BL21(DE3)表达菌株,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL)。Westernblot检测表达产物免疫学活性。表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化。结果:融合蛋白表达产量为30%,融合蛋白不仅能与肝素结合,而且具有促细胞增殖的活性。Westernblot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性。融合蛋白的等电点为5.2。结论:本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性。作为一个新的活性因子,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础。     

桃仁红花煎治疗无症状性高脂血症的作用研究

目的:探讨活血化淤理气通络经典方剂“桃仁红花煎”对无症状性高脂血症的治疗作用。方法:使用ShimadiuCL-7200型自动生化分析仪检测各组治疗前后患者血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A(APoA)、载脂蛋白B(APoB)水平,使用Griess法检测治疗前后患者血浆一氧化氮(NO)水平,使用邻苯三酚法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,使用巴比妥法检测血清丙二醛(MDA)含量。结果:治疗后,治疗组患者血浆TC、TG、LDL、MDA水平明显降低(P<0.05),而ApoA、HDL、NO水平,及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),APoB治疗前后无明显变化(P>0.05);对照组给予洛伐它丁治疗后,TC、TG、LDL水平明显降低(P<0.05),ApoA、HDL水平明显升高(P<0.05),而MDA、NO、ApoB含量及SOD活性无明显变化。结论:活血化淤理气通络中药可以降低血脂,并有可能防治高脂血症对血管造成损害.     

猪卵透明带-3β蛋白核心片断在E.coli中的表达

目的:探讨通过基因工程的方法在大肠杆菌中表达猪卵透明带蛋白pZP3b的核心片断。方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第44-306个氨基酸的pZP3β核心片断的DNA序列,克隆入pET-3c载体进而在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)pLysS中表达。结果:表达的pZP3β核心蛋白占菌体总蛋白的15%,并经Western-blot鉴定为目的蛋白。结论:pZP3β核心片断在大肠杆菌中获得较高的表达,有利于产物的纯化,为后续阐明pZP3β核心区域的性质和相关抗生育研究打下了基础。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子结构类似物在大肠杆菌中的高效稳定表达研究(英)

目的：用基因工程的方法获得高效稳定表达的重组人碱性成纤维细胞生长因子结构类似物。 方法： 利用定点突变技术，将天然hbFGF的第78与96位半胱氨酸替换为丝氨酸，通过载体pET-3c，突变基因被克隆并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plysS，IPTG诱导表达后，SDS-PAGE分析蛋白表达结果。 结果： 纯化后突变蛋白的可溶性成分大幅度增加，而二聚体与多聚体显著减少至纯化后总蛋白的8％以下。MTT法的结果表明，结构类似物蛋白具有良好的生物学活性。这种新的结构类似物蛋白能较好地替代天然hbFGF在临床上的使用。 结论： 在不影响生物学活性的条件下，对个别氨基酸残基进行突变以获得新的结构类似物的方法，能够有效提高外源蛋白在大肠杆菌中表达的稳定性及可溶性。     

中国仓鼠卵巢细胞表达系统在疫苗研制中的应用

分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位。在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中，最具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)。它是用来表达外源蛋白最多也最成功的一类细胞。本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述。     

杆状病毒表达系统在疫苗研究中的应用

目前使用的体外基因表达系统有多种。各有其优缺点。常用的大肠杆菌原核表达系统操作方便，表达稳定。但表达基因的分子量有限，不能对表达产物进行翻译后修饰。动物细胞表达具有良好的翻译后修饰功能，但成本高，操作复杂。杆状病毒表达系统是近年来日益受到重视的又一个重要的表达系统。现介绍如下。     

非全长型人卵透明带-3蛋白慢病毒表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中表达的研究

目的:构建含非全长型人卵透明带-3蛋白(hZP3)的慢病毒载体,转染293FT细胞获得重组慢病毒颗粒,感染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)使其表达hZP3。方法:将hZP3基因序列插入到慢病毒系统的入门载体pENTR-11中构建为pENTR-hZP3,采用LR重组酶将pENTR-hZP3和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成新重组载体pLenti6/V5-DEST-hZP3。将该重组载体和其它viruspower 3个质粒载体充分混合,用阳离子脂质体转染293FT细胞,培养和待细胞完全裂解后收集富含hZP3基因的病毒颗粒上清液,取适量上清液感染CHO-K1细胞,采用杀稻瘟Blastcidin筛选,挑单克隆对其扩增培养,进行基因水平和蛋白水平的鉴定。结果:获得的含hZP3基因的病毒颗粒上清液滴度为1×105TU/ml,随机挑取的16株单克隆细胞中,有9株表达hZP3。结论:成功构建含hZP3的慢病毒表达载体,获得表达hZP3的CHO株,为后续研究与开发奠定了基础。     

重组猪卵透明带-3β截短型蛋白的同源建模

目的:分析重组猪卵透明带-3β截短型蛋白(tunc-pZP3β)的结构,以及重组蛋白中产生强免疫原性的氨基酸序列的抗原表位。方法:利用生物信息学方法分析tunc-pZP3β的序列信息,并同源建模tunc—pZP3β的三维结构,分析抗原表位。结果:建立了tunc-pZP3β的模拟三维结构,显示出两段目的抗原表位氨基酸序列位于蛋白表面。结论:tunc-pZP3β从理论上保留着抗原表位。     

急性胰腺炎的预防和治疗

急性胰腺炎是多种病因引起胰酶在胰腺内被激活后导致胰腺组织自身消化的化学性炎症。不仅是局部炎症病变,而且是涉及多个脏器的全身性疾病,临床上主要表现为急性上腹痛、恶心呕吐、发热、血尿淀粉酶增高,大多数患者病情轻,有自限性,数日     

早产儿的观察和护理

早产儿又称未成熟儿,是指胎龄在37周以前出生的活产婴儿,由于早产儿呼吸中枢神经发育不成熟引起呼吸暂停,呼吸暂停是指呼吸停止超过20s;或虽然不到20s,但伴有心率减慢(<100次/min),并出现面色苍白、肌张力下降等。呼吸暂停是早产儿常见症状之一,发生率约20%～30%,极低体重儿