白芍总苷的生产工艺改进研究

目的探讨白芍总苷的生产工艺改进技术,对比了增加强制循环和传统提取白芍总苷的工艺。方法 :通过中试实验考察增加强制循环使多能灌体内乙醇温度均匀且处于高温状态以提高提取效率,在此基础上减少提取次数并且采用压榨技术回收药渣中吸附的药液以提高产能,节约成本。结果增加强制循环后第一次提取固体收率比不增加强制循环上升2到3个百分点,从含量收率来看打强制循环的第一次提取液普遍比不打强制循环高0.2到0.3个百分点左右。确定增加强制循环后,提取两次,就可以达到传统工艺提取3次的效果。结论增加强制循环配合药渣补水压榨可节省大量成本,为企业带来可观的经济效益。     

养阴通脑颗粒主要有效部位的转运研究

目的:研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞模型的吸收特性和转运机制。方法:利用MTT试验研究养阴通脑颗粒主要有效部位在Caco-2细胞中的安全浓度,用Caco-2细胞模型研究养阴通脑颗粒主要有效部位配伍后的转运情况,采用高效液相色谱法进行含量测定。结果:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素的吸收转运Papp皆<1.0×10-6cm·s-1,吸收转运Papp与难吸收药物阿替洛尔接近,其口服在体内的吸收从大到小的顺序为:葛根素>川芎嗪>黄芪甲苷。皂苷与黄酮配伍后,黄芪甲苷吸收转运Papp明显提高,促进吸收方向转运;黄酮、皂苷和生物碱的相互配伍对黄芪甲苷的外排作用明显,对川芎嗪和葛根素的吸收转运影响不明显。各有效部位代表成分的双向转运程度差异较大,Papp(B→A)明显大于Papp(A→B),提示这3个有效部位代表成分在Caco-2细胞单层模型中从BL侧到AP侧的外流转运较占优势。结论:黄芪甲苷、川芎嗪和葛根素可能为吸收不良的化合物,在其转运途径中可能受到了小肠顶侧膜的转运蛋白的外排作用。     

大鼠腰椎腹侧神经根牵拉模型的建立

目的 为了研究肌萎缩侧索硬化症致病机理和药物研发,建立第4 腰椎腹侧神经根牵拉大鼠模型,并用脑源性神经营养因子作为阳性药物进行模型的有效性验证?方法 首先对5 只SD 雄性大鼠进行手术,一周后用抗胆碱乙酰转移酶抗体进行免疫组织化学染色观察脊髓前角运动神经元数量的变化;预实验证明手术模型成功后,将40 只7 周龄SD 雄性大鼠随机分为四组,两组模型对照组及两个脑源性神经营养因子治疗组(手术后立刻预防性给药组和手术后一周治疗性给药组)?使用抗胆碱乙酰转移酶免疫组织化学染色观察运动神经元数量的变化?结果 大鼠手术后恢复良好,临床观察无异常?染色结果证明手术牵拉后,造成明显的脊髓前角运动神经元变性死亡?与对照组相比,用脑源性神经营养因子治疗的神经根牵拉动物,不管是预防性给药还是手术1 周后再进行治疗性给药都达到了良好的治疗效果,胆碱乙酰转移酶染色阳性神经元细胞数量显著增加( P <0.0001),结果分别为17.85%比93.06%;26.6%比87.27%?结论< /b> 成功的建立大鼠第4 腰椎腹侧神经根牵拉模型,为肌萎缩侧索硬化症的研究提供了一种有价值的动物模型?     

MAP30全长基因的克隆及在巴斯德毕赤酵母中的高效表达研究

目的研究毕赤酵母中高效表达全长MAP30蛋白及其生物活性。方法根据GeneBank公布的MAP30全序列设计特异性引物,以苦瓜基因组为模板,PCR扩增MAP30全长基因,将该基因插入pPIC9k载体中,经SacI酶切线性化后,电转化至GS115细胞,再通过G418筛选,最终获得了高拷贝重组GS115菌株。重组菌株在甲醇诱导下,SDS-PAGE分析表达的特异性条带,运用Pharmacia VDS图像分析软件进行条带密度扫描,得到各条带的扫描曲线图,计算出同一泳道目的蛋白条带峰面积相对于整个曲线所占的百分比,即蛋白纯度,并根据蛋白纯度和上清蛋白总量(Lowry法)计算出发酵上清液中目标蛋白含量。纯化时首先用75%的饱和硫酸铵盐析,然后用Phenyl Sepharose6FF疏水层析,再用CM-sepharoseFF阳离子层析。采用MTT法检测MAP30蛋白对人胃癌细胞株SGC7901的抑制作用。为验证重组MAP30蛋白结构的正确性,采用EDMAN降解法分析N末端8个氨基酸。结果重组菌株在甲醇诱导下,SDS-PAGE分析可见相对分子质量32000的特异性条带,重组蛋白占上清液总蛋白的67%;发酵液经硫酸铵沉淀、疏水和阳离子交换层析后,目的蛋白总回收率为32.4%。MTT法检测结果表明,重组MAP30蛋白具有明显的抑制人胃癌细胞SGC7901的活性,IC50为30μg/ml。N端的8个氨基酸测序进一步证实与理论一致。结论重组MAP30蛋白在毕赤酵母中正确表达,表达产物具有抑制肿瘤细胞的活性。     

面向浙江地方经济创办制药工程专业人才培养模式初探

进入21世纪后,传统医药在"回归自然"的世界潮流中再次焕发出强大的生命力,展示出广阔的发展前景.在世界药品市场上,天然药物的需求日益扩大,植物药市场份额达到近300亿美元,对中草药和中草药制品的需求也迅速增大.     

宁夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布频率

目的 了解宁夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布频率,为临床使用CYP2D6底物药物提供依据.方法 采用等位基因特异扩增(ASA-PCR)技术,分析了180例回族体检者的CYP2D6基因型.结果 CYP2D6*10基因点突变结果中野生型纯合子频率为32.3%,杂合子频率为38.3%,突变型纯合子频率为29.4%,突变型等位基因频率为48.6%.结论 宁夏回族人群CYP2D6*10突变基因频率与国内外其他民族有一定差异,在临床应用经CYP2D6代谢的药物时应考虑个体间的代谢速率差异,确保用药安全有效.     

补阳还五汤有效部位配伍对脑缺血大鼠及其神经功能的影响

目的:研究补阳还五汤主要有效部位配伍后对大鼠脑缺血损伤的保护作用及神经功能的影响.方法:采用正交实验设计方法,将组成补阳还五汤3个主要有效部位(黄酮、生物碱、总苷)用量配比不同的9个组合,将66只SD大鼠随机分为11个组,补阳还五汤9个组方组、模型组和正常组每组6只,将补阳还五汤主要有效部位组合用生理盐水溶解配成混悬液,再灌注同时灌胃给药,评价其对神经功能损伤的保护,并测定血浆中的超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.结果:与模型组相比,补阳还五汤9个有效部位组方均能使大鼠的神经功能缺损症状减轻,且各时间点大鼠血浆中SOD活力均有所增加,MDA含量均有所降低,其中Com6、Com8和Com9效果较突出.结论:补阳还五汤有效部位组方能减轻脑缺血大鼠神经功能损伤,具有较好的脑保护作用.     

浙贝母环阿屯醇合成酶基因5`-RACE快速扩增及序列分析

[目的]克隆浙贝母环阿屯醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)5`末端cDNA序列。[方法]利用简并引物及RT-PCR方法获得CAS的核心基因,应用cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术快速克隆5`末端片段,采用NCBI网站上的Protein Blast软件进行氨基酸同源性比对。[结果]从浙贝母叶片中成功地克隆出一条长691bp的CAS基因5`末端cDNA片段,含起始密码子及163bp的5`延伸区。对5`末端的150个氨基酸同源性分析表明,该片段与C.asiatica,G.glabra,A.thaliana,W.somnifera的CAS同源性分别达72%,66%,71%,71%。[结论]上述结果表明所克隆的片段为浙贝母CAS的5`末端序列,为下一步CAS全长基因的克隆及CAS在浙贝母次生代谢中的功能研究打下基础。     

3'-甲氧基葛根素对缺血再灌注大鼠脑内氨基酸动态变化的实验研究

目的:研究脑缺血时3’-甲氧基葛根素对谷氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸的抑制作用,探讨脑缺血损伤再灌注过程中其对神经损伤的保护机制。方法:制作大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用脑微透析技术收集大鼠纹状体细胞外液中的氨基酸类神经递质,并3’-甲氧基葛根素灌胃治疗;HPLC荧光检测用药前后4种氨基酸的含量变化。结果:3’-甲氧基葛根素可降低缺血时脑组织中兴奋性氨基酸Asp,Glu的浓度,同时使抑制性氨基酸Tau,GABA含量明显降低。结论:3’-甲氧基葛根素能降低缺血引起的脑内兴奋性氨基酸的毒性,调节脑内兴奋性氨基酸的含量。因此,该药改善脑内氨基酸的变化状态是改善和保护急性期脑梗死大鼠脑内神经保护作用机制之一。     

浅谈实验动物饲养管理和使用计划中 “灾难计划”的制定与实施

作为一个健全的实验动物饲养管理和使用计划的必须组成部分,"灾难计划(disaster plan)"的制定对任何研究机构均是非常重要的。目前,国内多数实验动物饲养和使用机构均会制定一份突发事件下的紧急预案(emergency operation plan,EOP),但多数机构均没有制定完善的运营连续性计划(business continuity plan,BCP)。本文将就"灾难计划"中"灾难"的定义、如何制定和实施完善的"紧急预案"、如何制定和实施完善的"运营连续性计划"等内容分别进行浅述,以期呈现一个完整并专业的实验动物饲养管理和使用计划中的"灾难计划"。