肾衰泄浊汤及其拆方对UUO模型大鼠细胞外基质的影响

目的:基于补虚通腑泄浊法探讨中药复方肾衰泄浊汤及其拆方(补虚方、祛邪方)对UUO模型大鼠细胞外基质的影响。方法:将SD雌性大鼠72只按体重随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰泄浊汤组、补虚方组、袪邪方组、贝那普利组,每组12只,各组大鼠分别于灌胃给药后第7、14d处死,检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平;取肾脏组织行HE、Masson染色,并对肾小管损伤程度、肾小管间质纤维化评分;免疫组化法检测肾脏组织中ɑ-SMA、FN、PAI-1的表达情况。结果:同期模型组与假手术组比较,大鼠24h尿蛋白明显升高(P0.05),各治疗组与模型组比较,各治疗组24h尿蛋白定量减少(P0.05);模型组与假手术组比较,血尿素氮、血清肌酐均升高(P0.05),经治疗后各组血尿素氮、血清肌酐均有所下降,肾衰泄浊汤组疗效最显著(P0.05)。经HE、Masson染色后,从不同时间段观察模型组及各治疗组的病理表现,术后7d以炎症和坏死病变为主,术后14d以纤维化和炎症为主,特别是模型组更为明显。免疫组化结果显示,各治疗组ɑ-SMA、FN、PAI-1蛋白阳性表达均低于模型组,同时期各蛋白阳性表达强弱在中药各治疗组中依次为:补虚方组祛邪方组肾衰泄浊汤组,且表达差异有统计学意义(P0.05)。结论:肾衰泄浊汤及其拆方均可改善UUO大鼠肾功能,这种改善作用可能是通过抑制ECM沉积实现的,ECM沉积的中医病机可能是本虚标实,补虚通腑泄浊法是治疗的基本大法。     

基于外泌体miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用

【目的】基于循环外泌体(Exos)miR-30转运探讨益肾解毒法对尿毒症小鼠心肌自噬的作用。【方法】(1)建立5/6肾切除尿毒症小鼠模型，采用益肾解毒法中药复方(YSJD,8.0 g·kg^-1·d^-1)灌胃治疗3周后，通过超声系统评估小鼠心脏功能，采用苏木素-伊红(HE)染色法观察心脏组织病理学形态，Masson三相染色法评估心脏纤维化含量，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)活性，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡，免疫组织化学法检测心脏组织中LC3蛋白表达情况，透射电镜(TEM)观察心肌超微结构。(2)分离小鼠外周血Exos，与小鼠原代心肌细胞共培养，采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，免疫荧光染色法检测心肌细胞LC3表达，实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Exos中miR-30表达，采用Western Blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白表达。【结果】益肾解毒法治疗可明显防止尿毒症心肌病(UCM)诱导的心脏功能障碍、心脏形态变化和重塑...     

浅析慢性肾脏病心脏损害的病因病机

慢性肾脏病发生发展常伴随着心血管疾病的发生。慢性肾脏病伴心血管疾病中医病机病因较为复杂,其病机应为正虚邪伏。正虚以心脾肾亏虚为主,由于正虚使得水湿、痰浊、气滞、瘀血、毒邪病理产物产生,这些病邪潜伏人体又耗伤正气,加重了疾病的发生发展。因此在其治疗中既要避免扶正留邪,又要防止攻邪伤正,根据疾病的变化,采取相应的治疗。     

基于网络药理学研究肾衰方治疗CKD心肌损伤的作用机制

目的 采用网络药理学和分子对接的研究方法,预测肾衰方慢性肾病(chronic kidney disease, CKD)心肌损伤的作用机制。方法 利用TCMSP数据库、Herb本草组鉴数据库(http://herb.ac.cn/)和SWISS Target prediction数据库筛选活性成分靶点信息,然后通过Uniprot数据库筛选出人类靶点和规范基因名;使用Cytoscape 3.7.2软件作药物-有效成分-靶点网络图;选用GeneCards数据库收集疾病相关靶点;利用Venny 2.1建立“肾衰方”抗CKD心肌损伤的基因靶点数据库;利用String数据库构建主要成分靶点互作网络并筛选关键靶点;然后导入Cytoscape 3.7.2软件进行拓扑分析和构建PPI网络图,最后用DAVID平台进行Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)通路富集分析(P<0.05)和Gene Ontology(GO)生物学功能注释。结果 经过筛选,肾衰方活性化合物为252个;肾衰方与CKD心肌损伤共同靶点649个,其中AKT1、TNF、MAPK3、...     

中医药治疗慢性肾脏病心脏损害的研究概况

慢性肾脏病发生发展常伴随着心脏损害。我们认为慢性肾脏病心脏损害的病机为正虚邪伏。正虚以心脾肾亏虚为主,邪伏以"湿、瘀、毒"内蕴为主。将中医病机与现代中药分子生物学相结合,进一步探讨中医药防治慢性肾脏病心脏损害的作用机制并结合示意图进行概况,为临床选方用药提供一定思路。     

利用生物素-链霉亲和素进行骨髓间充质干细胞的表面标记

BACKGROUND: Currently, there is a lack of efficient, non-invasive way to transplant stem cells to the target organ or tissue. Exploring a way to guide targeting transplantation of stem cells and to improve the efficiency of stem cell homing is now one of focuses in the field of stem cells research. OBJECTIVE: To establish a simple and feasible method to chemically modify the cell surface using biotin-streptavidin reaction system, and to evaluate the efficiency of this method to label bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and its effects on cell biological functions. METHODS: Passage 3 BMSCs were obtained by whole bone marrow culture method and verified by flow cytometry. Biotin, streptavidin, sulfonated biotin-N-hydroxy-succinimide were used to equip the adhesion molecule ligand, sialyated LewisX (SLeX), to the BMSCs surface. The labeling rate of BMSCs was assessed using fluorescence microscope, the vitality of BMSCs was evaluated by trypan blue staining, and the proliferation of BMSCs was evaluated by cell counting kit-8 assay. Adipogenic and osteogenic inductions were used to evaluate the effect of the method on the multi-differentiation function of BMSCs. RESULTS AND CONCLUSION: After culture for 2 weeks, passage 3 BMSCs were obtained and confirmed by expressing CD90, CD29 and lack of CD34, CD45. Biotin, streptavidin, sulfonated biotin-N-hydroxy-succinimide were successfully used to equip sialyated LewisX (SLeX) to the BMSCs surface and had minor effects on the vitality, proliferation, and differentiation of BMSCs. This method was simple for surface modification and had a high modification rate of 88%. The homing of BMSCs modified by this method to the target organ or tissue could be greatly enhanced. Therefore, this method potentially could have extensive and important applications.       

巨噬细胞外泌体通过抑制自噬诱导高血糖对肾小球足细胞的损伤作用 #br#

目的观察高糖（HG）处理的Raw264.7巨噬细胞来源的外泌体（Exos）对足细胞的损伤作用,并探讨其作 用机制是否与抑制足细胞自噬相关。 方法将高糖处理Raw264.7细胞的外泌体（HG-Exos）和原代足细胞体外孵育 24 h,检测Exos在原代足细胞的内化情况。原代足细胞用HG提取不同剂量的Exos（0、7、14、28、56、112 mg/L）处理, 探讨HG-Exos对足细胞存活、自噬的影响。将原代足细胞分为对照组、HG-Exos组、氯喹组、HG-Exos+氯喹组、雷帕 霉素组、HG-Exos+雷帕霉素组,探讨HG-Exos诱导的细胞毒性是否会受到自噬调节剂的影响。采用透射电镜观察 自噬体生成情况;采用 CCK-8 法测定 Exos 对细胞活力的影响。采用 Western blot 法检测细胞中 LC3B、Beclin 1、 Nephrin蛋白的表达。 结果与正常葡萄糖处理的Raw264.7细胞相比,HG处理的Raw264.7细胞产生的Exos数量显 著增加（P＜0.05）。在激光共聚焦显微镜下观察到PKH67标记的Exos位于足细胞的核周区中。CCK-8法检测显示, 足细胞活力随 HG-Exos 刺激剂量的增加和时间的延长而降低。与 0 mg/L HG-Exos 组比较,7 mg/L、14 mg/L 和 28 mg/L HG-Exos组足细胞中Nephrin、Beclin 1、LC3B蛋白表达水平均明显降低,且含有双层膜结构的自噬小体数量显 著减少（P＜0.05）。雷帕霉素组、HG-Exos+雷帕霉素组Nephrin、Beclin 1、LC3B蛋白表达水平及自噬体数量均明显高 于HG-Exos组、氯喹组和HG-Exos+氯喹组（P＜0.05）。 结论高糖诱导的巨噬细胞Exos可降低足细胞活力以及增 加足细胞损伤,其作用机制与降低足细胞自噬有关。     

初探“玄府司使-周细胞”对肾纤维化的影响

肾纤维化的产生受多种肾脏疾病的病因影响,最终将导致终末期慢性肾脏病的发生。近年对肾脏周细胞的深入研究,发现其能影响肾纤维化的形成,对于慢性肾脏病的防治具有临床意义。基于中医"玄府"理论,发现其与周细胞存有密切关联,故文章将以"玄府司使-周细胞"为契合点深入其对肾纤维化的影响进行理论探讨。     

肾衰泄浊汤及其补虚、祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究肾衰泄浊汤及其补虚,祛邪组分对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法:通过结扎单侧输尿管建立UUO大鼠模型。SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,贝那普利组,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组;每组24只。手术后第3天,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组大鼠均按0. 8 g·mL-1肾衰泄浊汤浓缩剂给药,即给药剂量为8. 0 g·kg-1·d-1体质量灌胃;贝那普利组大鼠给贝那普利1. 5 mg·kg-1·d-1体质量灌胃,假手术组,模型组大鼠给等量生理盐水灌胃。术后第7,14,21天,分别用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织中周细胞及相关信号通路标志物表达情况。结果:与模型组比较,肾衰泄浊汤组,补虚方组,袪邪方组在UUO后第14,21天的间质损伤评分和间质胶原的积累均显著降低(P0. 05)。除假手术组外,各组在第14,21天的肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),血小板衍生生长因子A(PDGFA),神经/胶质细胞2型硫酸软骨素糖蛋白(NG-2),血管内皮生长因子A(VEGFA),血管内皮生长因子受体1(VEGFR1),血小板源性生长因子β(PDGF-β),血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)的蛋白表达均较第7天显著增加(P0. 05)。在手术后第21天,肾衰泄浊汤组的肾组织中NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-β蛋白表达均显著低于模型组(P0. 05)。与模型组比较,肾衰泄浊汤组在手术后第21天的肾组织中α-SMA,PDGFA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGF-β,PDGFR-βmRNA相对表达量均显著降低(P0. 05),并且肾衰泄浊汤组在手术后第21天α-SMA,NG-2,VEGFA,VEGFR1,PDGFR-βmRNA相对表达量显著低于贝那普利组(P0. 05)。结论:肾衰泄浊汤复方及其补虚,祛邪组分对UUO大鼠肾间质纤维化均具有拮抗作用,其作用机制与抑制周细胞及其相关细胞信号通路激活有关。