茅苍术根际自毒物质鉴定及其对幼苗生长的影响

目的 鉴定茅苍术根系分泌物中的自毒物质，研究其对茅苍术种子萌发、幼苗生长及生理生化的影响，并初步探究自毒物质的作用机制。方法 利用气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析茅苍术根系分泌物成分，利用单物质浇灌试验鉴定自毒物质，设计盆栽实验分析自毒物质对茅苍术种子萌发及幼苗生长的抑制作用，采用分光光度法测定幼苗过氧化氢和丙二醛含量及超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶的活性，并用半定量GC-MS法测定自毒物质处理后茅苍术中苍术素、?-桉叶醇、茅术醇和苍术酮的含量。结果 鉴定出2,4-二叔丁基酚、邻苯二甲酸二丁酯、硬脂酸甲酯、棕榈酸等8种自毒物质，这些物质显示出抑制种子发芽及幼苗生长的作用，并对幼苗造成氧化胁迫和损伤，同时抑制了苍术素、?-桉叶醇、茅术醇和苍术酮的合成。结论 鉴定出了茅苍术根系分泌的8种自毒物质，发现了自毒物质可能通过氧化胁迫作用抑制种子萌发、幼苗生长及活性成分的生物合成，为揭示苍术连作障碍提供了基础。     

霍山石斛类黄酮-3-O-糖基转移酶（DhUF3GT）基因克隆与原核表达分析＊

目的 克隆霍山石斛类黄酮-3-O-糖基转移酶（DhUF3GT）基因并进行生物信息学分析，为进一步培育高黄酮含量的霍山石斛药材提供理论依据。方法 根据前期霍山石斛转录组数据筛选出的基因DhUF3GT，克隆该基因，并对cDNA的核酸序列进行生物信息学分析，同时构建DhUF3GT-pET28（a）重组质粒进行原核表达分析。结果 测序结果显示，霍山石斛DhUF3GT基因cDNA序列有1289 bp，包含一个长度为1239 bp的开放阅读框，编码412个氨基酸，GenBank中的登录号为OM460827。生物信息学分析表明：DhUF3GT蛋白属于亲水性稳定蛋白，理论相对分子质量为45.668 KD，等电点（PI）为5.98，具有多个磷酸化位点和两个糖基化位点，不含信号肽，亚细胞定位于叶绿体。系统进化树表明，该序列与同科植物铁皮石斛同源性最高，具有UGT家族的“PSPG Box”保守区域。SDS-PAGE电泳显示，成功表达出原核重组蛋白DhUF3GT-pET28（a）。结论 成功克隆出霍山石斛DhUF3GT基因序列，并获得其序列特征及原核表达蛋白，这有助于霍山石斛DhUF3GT功能的进一步研究及类黄酮化合物的生物合成机制的阐明。     

PMP柱前衍生化反应结合多元化学计量法和一测多评法的羊栖菜质量研究

目的：建立区分羊栖菜饮片和配方颗粒的HPLC指纹图谱及一测多评方法,筛选关键差异标志化合物,为提升羊栖菜的质量控制标准提供参考。方法：依据糖类化合物的PMP柱前衍生化反应原理,利用HPLC测定羊栖菜饮片和配方颗粒的指纹图谱;采用系统聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法筛选差异标志成分;以岩藻糖为参照物,建立一测多评法测定羊栖菜饮片和配方颗粒的主要单糖含量。结果：建立的指纹图谱及一测多评方法能有效区分羊栖菜饮片和配方颗粒,以岩藻糖、D-半乳糖、D-葡萄糖以及2个未知化合物(5、10号峰)为差异标志化合物。但配方颗粒中仅D-甘露糖和岩藻糖含量与饮片相比有显著性差异。结论：该研究建立的羊栖菜饮片、配方颗粒指纹图谱和4个单糖成分含量测定方法稳定可靠,可用于羊栖菜饮片和配方颗粒的质量控制。     

基于AHP-CRITIC复合熵权法和灰色关联度分析的生地黄炒炭工艺优选

目的:筛选生地黄炭的最佳炮制工艺参数,为生地黄炭质量控制提供综合评价模型。方法:以生地黄炭饮片6个有效成分(梓醇、地黄苷D、焦地黄苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、5-羟甲基糠醛)的质量分数、吸附力、得率和外观性状评分共9个评价指标,采用L₉(3⁴)正交试验设计和单因素考察,结合层次分析法(AHP)-指标权重确定方法(CRITIC)复合熵权确定各评价指标的权重系数,以直观分析、方差分析及复合熵权法结合灰色关联度分析法对正交试验结果进行综合评价,优选生地黄炭最佳炮制工艺。结果:优选的生地黄炭最佳炮制工艺参数为：温度200℃,炒制20 min,转速25 Hz。结论:AHP-CRITIC复合熵权法和灰色关联度分析法结合正交试验进行生地黄炭炮制工艺优化,各指标权重系数客观且真实,优选的炒炭工艺稳定可行,重复性良好,可以为生地黄炭炮制工艺标准及质量标准的建立提供试验依据。