三七总皂苷对慢性肾衰竭大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2 信号通路的 影响

目的研究三七总皂苷（PNS）对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭（CRF）大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2 信号通路的影 响,探讨其延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法将65 只雄性SD 大鼠随机分为正常组10 只、造模组 55 只,正常组常规饲养,造模组采用250 mg·kg-1·d-1 腺嘌呤混悬液连续灌胃28 d 复制CRF 大鼠模型。将造模 成功大鼠随机分为模型组、贝那普利组（10 mg·kg-1）及PNS 低、中、高（40、80、160 mg·kg-1）剂量组,灌胃给 药,每日1 次,连续28 d。检测大鼠24 h 尿蛋白（24 h U-pro）及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的含量;采用 HE 染色法观察肾组织病理形态,Masson 染色法观察肾间质纤维化程度;采用ELISA 法检测血清及肾组织匀浆 中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血清中胱抑素C（Cys-C）的含量;采用Western Blot 法分析肾组织中血管紧张素Ⅱ受 体Ⅰ型（AT1R）、细胞外调节激酶（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达情况;Real-time PCR 法检测 肾组织中AngⅡ、AT1R、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA 的表达;免疫组化法检测肾组织中AT1R 蛋白的表 达。结果与正常组比较,模型组大鼠的24 h U-pro、Scr、BUN、Cys-C 水平显著升高（P < 0.01）,血清、肾 组织匀浆中的AngⅡ含量明显增加（P < 0.01）,肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA 表达均明显上调（P < 0.01）,AT1R、p-ERK1/2 蛋白表达均明显上调（P < 0.01）。与模型组比较,给药组大鼠的Scr、BUN、24 h U-pro 及Cys-C 水平均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,血清、肾组织中的AngⅡ含量均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA 表达均明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,AT1R、p-ERK1/2 蛋 白表达均明显下调（P < 0.05,P < 0.01）。结论三七总皂苷可改善CRF 模型大鼠的肾功能和肾脏的病理学改 变,其机制可能与调控Ang Ⅱ/AT1R/ERK1/2 信号通路有关。     

水蛭、三七及其配伍对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化作用机制比较

目的 观察水蛭-三七单味药与药对改善慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾脏病理形态及对蛋白磷酸酶2A（PP2A）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 将55只雄性SD大鼠随机分为正常组11只、造模组44只。正常组常规饲养，造模组进行0.25 g·kg^-1·d^-1腺嘌呤连续灌胃28 d复制CRF模型。将造模成功后的大鼠随机分为模型组、水蛭组（3 g·kg^-1·d^-1）、三七组（3 g·kg^-1·d^-1）与水蛭-三七组（3 g·kg^-1·d^-1），每组9只，正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃，连续30 d。实验结束后，测定各组大鼠血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）含量；苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色和电镜观察肾脏病理形态学改变；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肾组织PP2A、AMPK、mTOR mRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织PP2A、AMPK、磷酸化（p）-AMPK、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肾脏病理结构变化明显，血清SCr、BUN含量明显升高，肾组织PP2A mRNA表达增加，PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显升高，p-AMPK/AMPK明显降低（P<0.05）；与模型组比较，药物干预治疗后各组大鼠肾脏病理形态学明显改善，血清中SCr、BUN含量均明显降低，肾组织PP2A mRNA表达下降，PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显降低，p-AMPK/AMPK明显升高（P<0.05），水蛭-三七组效果更为明显。正常组、模型组及治疗各组肾组织AMPK、mTOR mRNA表达差异未见统计学意义。结论 水蛭-三七对改善CRF大鼠肾纤维化的疗效明显优于单味药，其对CRF大鼠肾纤维化的改善可能与调节PP2A/AMPK/mTOR信号通路有关。