基于胆汁酸代谢组学探讨芍药苷改善α-萘异硫氰酸酯诱导胆汁淤积的作用机制

目的 基于胆汁酸代谢组学及分子生物学探讨芍药苷调控胆汁酸改善胆汁淤积的作用及机制。方法 雄性SD大鼠连续7 d ig熊去氧胆酸（ursodesoxycholic acid,UDCA）或芍药苷,于实验第4天ig α-萘异硫氰酸酯（α-naphthylisothiocyanate,ANIT）建立胆汁淤积模型。通过血清生化指标、肝脏病理组织染色、胆汁酸体积流量明确芍药苷缓解胆汁淤积的药效学基础。收集大鼠胆汁进行胆汁酸代谢组学分析,收集肝脏检测法尼醇X受体（farnesoid X receptor,FXR）和胆酸盐外排泵（bile salt export pump,BSEP）表达。结果 药效学实验显示,与对照组比较,模型组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、γ-谷氨酰转移酶（γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT）、总胆汁酸（total bile acid,TBA）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）和直接胆红素（dire...     

芍药苷通过调控肠道菌群改善α-异硫氰酸酯诱导胆汁淤积大鼠的作用机制研究

目的 确证芍药苷对α-异硫氰酸酯(α-isothiocyanate,ANIT)诱导胆汁淤积大鼠的药效作用,通过16SrRNA技术探究芍药苷对肠道菌群的调节作用机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组及芍药苷高、中、低剂量(200、100、50mg/kg)组和熊去氧胆酸(60mg/kg)组,每组10只。给予药物干预7d,第4天igANIT(60mg/kg)诱导胆汁淤积模型。测定胆汁体积流量;检测血清中血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)活性及总胆红素(total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆汁酸(total bileacid,TBA)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;收集大鼠肠内容物进行肠道菌群测序,探索芍药苷对肠道菌群的影响。结果 与模型组比较,芍药苷有效改善胆汁体积流量(P<0.05),显著下调大鼠血清中肝功能指标AST、ALT、γ-GT活性及胆汁淤积指标TBIL、DBIL、TBA水平(P<0.01),改善肝细胞损伤。肠道菌群测序结果可知,芍药苷显著上调厚壁菌门与拟杆菌门比值及异杆菌属Allobaculum、布劳特氏菌属Blautia丰度(P<0.05),降低颤螺菌属Oscillospira、瘤胃球菌属Ruminococcus丰度(P<0.05、0.01)。结论 芍药苷可能通过改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠肠道菌群失调,从而发挥对胆汁淤积肝损伤的改善作用。     

基于紧密连接通路探讨芍药苷改善胆汁淤积的作用机制

目的 基于蛋白组学和实验验证探讨芍药苷通过紧密连接通路改善胆汁淤积的作用。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、熊去氧胆酸（60 mg/kg）组和芍药苷高、中、低剂量（200、100、50 mg/kg）组，每组8只。连续7 d ig相应药物，于第4天给药2 h后ig α-萘异硫氰酸酯（60 mg/kg）诱导肝内胆汁淤积大鼠模型。末次给药后，采用试剂盒测定大鼠血清中肝功能指标；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝脏组织病理变化；蛋白组学及生物信息学技术筛选芍药苷改善胆汁淤积的关键通路；分子对接确定芍药苷与相关靶点的结合能；qRT-PCR和Western blotting验证大鼠肝组织中关键靶点闭锁小带蛋白-1（zonula occludens-1，ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、密封蛋白1/2/3（Claudin 1/2/3）和连接黏附分子-A（junctional adhesion molecule-A，JAM-A）的表达。结果 药效学结果显示，与对照组比较，模型组大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyl transpeptidase，γ-GT）活性及总胆汁酸（total bile acid，TBA）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）、直接胆红素（direct bilirubin，DBIL）水平均显著升高（P<0.01），肝组织可见大量炎性细胞浸润，伴随着肝细胞变性坏死，而经芍药苷治疗后上述指标得到显著改善（P<0.05、0.01）。蛋白组学结果表明芍药苷主要通过凋亡途径、免疫炎症过程、代谢通路、细胞周期通路、胆汁酸分泌通路与紧密连接通路等发挥改善胆汁淤积的作用。选择紧密连接通路进行验证，验证结果表明，与对照组比较，模型组大鼠肝组织ZO-1、Occludin、Claudin 1、Claudin 2、Claudin 3和JAM-A mRNA表达水平均显著降低（P<0.01），ZO-1、Occludin和Claudin 3蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01），经芍药苷干预后以上紧密连接通路相关蛋白及基因表达显著升高（P<0.05、0.01）。结论 芍药苷可以多途径、多靶点缓解大鼠胆汁淤积，是治疗胆汁淤积的潜在药物，紧密连接通路可能是芍药苷改善胆汁淤积的关键通路。