苗药水冬瓜叶化学成分的HPLC-HESI-HRMS分析

目的 采用HPLC-HESI-HRMS技术对苗药水冬瓜叶中的化学成分进行定性分析。方法 采用Thermo Fisher Hypersil GOLD aQ C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），以0.1%甲酸水溶液-乙腈（0.1%甲酸）为流动相梯度洗脱；质谱使用HESI离子源，正离子和负离子模式下采集数据。同时采用HPLC比较7-羟基香豆素、断氧化马钱苷、金丝桃苷、异槲皮苷对照品与样品中化合物17，20，24，25保留时间（t_R）差异性，比较薄层色谱荧光特征与比移值（Rf值），并参考文献中有关7-羟基香豆素、断氧化马钱苷、金丝桃苷、异槲皮苷质谱裂解碎片特征综合进行验证。结果 通过高分辨质谱正、负离子质谱信息、数据库及相关文献数据对照，共推测出苗药水冬瓜叶中38个化合物，包括3个氨基酸类化合物，5个生物碱类化合物，10个有机酸类化合物，3个苯丙素类化合物，3个芳香含氧衍生物类化合物，3个萜类化合物，6个黄酮类化合物，1个酰胺类化合物，4个其他类化合物。验证结果表明，7-羟基香豆素、断氧化马钱苷、金丝桃苷、异槲皮苷对照品分别与化合物17，20，24，25的t_R相比差异均<0.1 min；在药材样品溶液、7-羟基香豆素、断氧化马钱苷、金丝桃苷、异槲皮苷对照品色谱相应的位置上分别显相同颜色的蓝色荧光斑点，Rf值一致；文献表明化合物17，20，24，25分别与7-羟基香豆素、断氧化马钱苷、金丝桃苷、异槲皮苷具有相似的质谱裂解碎片特征。结论 初步鉴定出化合物17，20，24，25分别为7-羟基香豆素、断氧化马钱苷、金丝桃苷、异槲皮苷。HPLC-HESI-HRMS对苗药水冬瓜叶中化学成分的初步推测具有一定的科学性，为阐明苗药水冬瓜叶药材的药效物质基础提供依据。     

玄参愈伤、不定根和内生菌产哈巴俄苷的比较

目的:诱导玄参愈伤、不定根产生,分离内生菌,并比较其中有效成分哈巴俄苷的含量。方法:玄参嫩叶片消毒切成小块接种于含不同激素水平的MS,N6培养基诱导愈伤;不定根诱导采用液体培养:将愈伤小块先转入不含激素MS液体培养基,100 r.min-1室温震荡培养,待开始出现不定根后转入含0.05 mg.L-1NAA+2 mg.L-16-BA的MS液体培养基继续震荡培养,内生菌分离采用常规方法。哈巴俄苷含量测定采用紫外分光光度法,测定波长255 nm。结果:MS培养基+NAA0.05,0.2,2 mg.L-1+6-BA 2 mg.L-1均能诱导出质地较疏松、生长较快的愈伤组织;接种1.5 g愈伤30 d左右可得到100 mL满瓶不定根;从玄参鲜块根分离出4株可产哈巴俄苷的内生菌。玄参愈伤组织、不定根及四株内生菌发酵液的哈巴俄苷含量依次分别为:0.411,0.099 5,0.451,0.444,0.489,0.440 g.L-1.结论:玄参愈伤组织中哈巴俄苷含量是不定根的4倍,内生菌发酵液哈巴俄苷含量可达到与愈伤相当水平,具有开发应用的潜力。同时为研究玄参与内生菌相互作用打下基础。     

在有限条件下进行药理学实验教学改革

在有限的办学条件下,充分利用现有资源,训练学生药理学实验基本技能,强化学生对药理实验中“量”的理解,注意提高学生学习兴趣,培养学生独立思考的能力和实事求是的科学精神,增设命题式设计性实验,加强生命伦理教育,使用现代教学手段,努力提升学生综合素质,使学生初步建立较完善的药理学实验学科体系,达到高职高专人才培养的要求。     

2个丹参鲨烯合酶基因的克隆和鉴定

目的 克隆与鉴定丹参Salvia miltiorrhiza鲨烯合酶基因。方法 基于丹参基因组的基因预测结果设计引物,通过RT-PCR方法,克隆丹参鲨烯合酶基因。利用生物信息软件对基因序列进行了结构分析,对基因编码多肽进行了序列同源性比较和保守结构域分析,利用实时定量RT-PCR方法对基因进行表达模式研究。结果 通过RT-PCR方法扩增得到2个丹参鲨烯合酶基因（SmSQS1和SmSQS2）,它们编码的多肽具有鲨烯合酶相关结构域和保守基序。这2个基因具有不同的外显子/内含子结构特征,具有不同的组织特异性表达模式和时间表达模式。结论 丹参基因组中存在2个鲨烯合酶基因,它们具有不同的基因结构特征和表达模式,可能在丹参甾体类和三萜类化合物生物合成中起不同作用。     

救顽汤对慢性湿疹模型大鼠作用研究

目的通过观察救顽汤对慢性湿疹大鼠模型皮损、脾脏指数,初步评价救顽汤治疗慢性湿疹作用。方法随机将60只雄性SD大鼠分为6组,每组10只,分别为空白组、模型组、阳性组、救顽汤低剂量组、中剂量组、高剂量组。除空白组外,各组大鼠运用2,4-二硝基氯苯(DNCB)复制慢性湿疹动物模型。模型建立后连续给药10 d,比较各组间皮损程度、脾指数。结果与空白组相比较,模型组大鼠皮损评分显著升高,脾脏指数降低(P<0.01);与模型组相比较,救顽汤高剂量、中剂量组给药后皮损评分明显降低,脾脏指数升高(P<0.01),低剂量组无差异(P>0.05)。结论救顽汤能有效减轻慢性湿疹大鼠模型的皮损程度,降低皮损评分,具有明显的治疗作用。救顽汤能有效升高湿疹模型降低的脾指数,其治疗慢性湿疹的作用机制可能与提高机体免疫有关。     

细胞滴片间接免疫荧光实验技术的探讨

目的：探讨在有限条件下简化细胞滴片间接免疫荧光实验操作技术。方法：以大鼠胸腺细胞为抗原,兔抗鼠抗血清为一抗,FITC羊抗兔IgG荧光抗体为二抗做细胞滴片的间接免疫荧光染色,荧光显微镜观察结果。结果：细胞悬液浓度在10^5—10^6个／ml为宜,新鲜细胞固定后可长期保存备用,冻存细胞则不能使用;固定剂可选10％甲醛、甲醇等,也可不用固定剂;粘片剂也可不用;平整的试管架代替湿盒更方便。结论：细胞滴片的间接免疫荧光实验操作步骤可简化,以减少实验开支。