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[目的]在CHO-K1细胞中表达重组MBL并进行检测。[方法]构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-mbl,用阳离子转染试剂Transfast转染CHO-K1细胞,G418筛选稳定转染的细胞。应用RT-PCR、ELISA及免疫荧光检测重组MBL的表达。[结果]RT-PCR从稳定转染pcDNA3.1(+)-mbl的CHO-K1细胞中检测到mbl基因的表达,夹心ELISA并未从转染细胞上清中检测到重组MBL,免疫荧光表明稳定转染pcDNA3.1(+)-mbl的CHO-K1细胞能够在胞浆中表达重组人MBL。[结论]成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-mbl并转染CHO-K1细胞,转染的细胞能够表达重组人MBL。 相似文献
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目的 构建pQE-hishbFGF表达载体,通过一步纯化得到6×HishbFGF蛋白质。方法 用PCR扩增目的基因hbFGF ,连接到pQE40载体上,转化到Top10菌株筛选重组子,经测序后将质粒转化到表达菌M15上,经IPTG诱导表达,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得6×HishbFGF蛋白质,ELISA鉴定产物 ,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性。结果 hbFGF基因插入pQE载体中,在M15中6×HishbFGF的表达量达到20%,且为可溶性表达。经一步纯化后得到N端带 6个组氨酸的hbFGF蛋白,纯度为96%,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性。结论 6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物,降低了生产成本,为大规模生产hbFGF及hbFGF的应用研究奠定了基础。 相似文献
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