二仙汤抗骨质疏松有效组分的指纹图谱、多成分含量测定及其镇痛和调节骨代谢作用研究

目的 建立二仙汤抗骨质疏松有效组分的指纹图谱及多成分含量测定方法,为基于二仙汤的抗骨质疏松组分中药的研制奠定基础。方法 HPLC指纹图谱检测采用Agilent ZorBax Extend C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈- 0.1%磷酸水溶液（含0.025%十二烷基硫酸钠）,梯度洗脱：0～30 min,4%～30%乙腈;30～50 min,30%～50%乙腈;50～60 min,50%～90%乙腈;体积流量1 mL/min;柱温25 ℃;检测波长270 nm。运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行相似度评价;通过对照品比对,对共有峰进行指认。样品含量测定的梯度洗脱调整为0～25 min,10%～18%乙腈;25～35 min,18%～19%乙腈;35～40 min,19%～25%乙腈;40～50 min,25%～32%乙腈;50～60 min,32%～55%乙腈;并测定8种有效成分的含量。以小鼠醋酸扭体和成骨细胞和破骨细胞为模型评价二仙汤有效组分的镇痛和对骨代谢的调控作用。结果 建立了二仙汤有效组分的HPLC指纹图谱,确定了16个共有峰,16批样品与对照指纹谱比较的相似度均在0.9以上。指认出其中8个共有峰（1、4、10～12、13、15、16号峰）,分别为新芒果苷、芒果苷、阿魏酸、仙茅苷、朝藿定B、淫羊藿苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱。含量测定的线性关系、重复性、稳定性、精密度及加样回收率考察符合要求。二仙汤抗骨质疏松有效组分在小鼠醋酸扭体模型上具有显著的镇痛作用,并可促进成骨细胞的形成和骨基质矿化,抑制破骨细胞的骨吸收。结论 建立的二仙汤抗骨质疏松有效组分HPLC指纹图谱及多成分含量测定方法可准确、高效、全面的对其质量进行评价,为其质量控制提供依据。     

基于大麻素2型受体和雌激素受体α研究升麻和黑升麻含药血清对成骨细胞功能的影响

目的 研究升麻Cimicifuga foetida和黑升麻含药血清基于大麻素2型受体（cannabinoid receptor type 2，CB2R）与雌激素受体α（estrogen receptorα，ERα）对成骨细胞骨形成的调控作用。方法 采用高分辨质谱法鉴定升麻和黑升麻中的化学成分；升麻与黑升麻含药血清或与CB2R反向激动剂AM630或ERα抑制剂ICI联合处理MC3T3-E1成骨细胞，CCK-8法测定细胞增殖活性；试剂盒测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性；茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成；Western blotting检测骨形成相关蛋白及CB2R与ERα的表达。结果 升麻和黑升麻中分别鉴定了12、14个化学成分，其中有3个共有成分。升麻和黑升麻含药血清可显著增加成骨细胞的增殖、ALP活性和骨矿化结节形成，增加CB2R和ERα及骨形成相关蛋白的表达。15%升麻含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖、ALP活性、骨矿化结节形成及骨形成相关蛋白表达的促进作用可被AM630和ICI所逆转，15%黑升麻含药血清对MC3T3-E1细胞骨形成的促进作用仅可被ICI所逆转。结论 升麻含药血清可通过CB2R与ERα双靶点促进成骨细胞的骨形成，黑升麻含药血清仅通过激活ERα增加成骨细胞的骨形成。