左金丸联合西妥昔单抗诱导KRAS突变肠癌细胞铁死亡作用研究

目的:探讨左金丸(ZJW)对KRAS突变的人结肠癌细胞西妥昔单抗(CET)抵抗的效果及机制。方法:采用Sanger测序法检测SW620、Lovo、HCT116、HT29和Caco2细胞KRAS基因突变状态；采用CCK-8法检测ZJW、CET、ZJW联合CET以及联合不同细胞死亡抑制剂对上述细胞存活率的影响，并观察ZJW联合CET对KRAS突变型细胞(SW620、Lovo及HCT116)耐药性的影响；流式细胞术、比色法和FerroOrange荧光探针检测和观察ZJW、CET以及它们联合作用对KRAS突变型细胞内ROS、GSH及Fe²⁺水平的影响；Western blot和Real-time PCR法检测ZJW联合CET对铁死亡相关通路蛋白和mRNA的调控作用。结果:KRAS突变型细胞为HCT116(KRAS^G13D),Lovo(KRAS^G13D),SW620(KRAS^G12V),KRAS野生型细胞为HT29和Caco2;与125μg/mL CET处理组比较，相同浓度CET明显降低KRAS野生型细胞Ca...     

左金丸逆转KRAS突变型大肠癌西妥昔单抗耐药的作用机制研究

目的 探讨左金丸(ZJW)对KRAS突变型大肠癌西妥昔单抗(CET)耐药的逆转作用及其机制。方法 (1)常规培养KRAS突变人结肠癌细胞HCT116，通过细胞增殖率(CCK-8法检测)确定ZJW无毒剂量(即10 mg·L^-1)，观察ZJW、CET的协同效应(ZJW 10 mg·L^-1与CET 100、200 mg·L^-1具有协同效应，本研究选择CET 100 mg·L^-1进行后续实验)。将处于对数生长期的HCT116细胞分为对照组、CET 100 mg·L^-1组(CET组)、ZJW 10 mg·L^-1组(ZJW组)、CET 100 mg·L^-1+ZJW 10 mg·L^-1组(ZJW+CET组)，作用48 h；采用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡情况，Western blot法检测细胞中核因子-κB p65(NF-κB p56)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达情况，免疫荧光法检测细胞中NF-κB p65、磷酸化...     

中药左金丸逆转胃癌顺铂耐药的作用机制

目的:探讨左金丸逆转胃癌顺铂耐药的作用机制。方法:体外实验采用人胃癌细胞株SGC-7901及人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,CCK-8法检测细胞增殖率;免疫蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测左金丸干预后各组基因蛋白表达量;同时构建RTKN基因慢病毒载体转染的胃癌细胞系并验证,结合CCK-8法、qRT-PCR和Western blot法检测RTKN基因干扰对胃癌细胞顺铂耐药性的影响。裸鼠体内实验将RTKN干扰的SGC-7901/DDP细胞移植到裸鼠皮下,分别给予左金丸干预4周后,记录移植瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,Western blot检测RTKN、p53、Ace-p53、HDAC1蛋白的表达量。结果:SGC-7901/DDP细胞中的RTKN表达量显著高于SGC-7901细胞,沉默RTKN显著降低SGC-7901/DDP细胞的耐药性;左金丸可显著降低SGC-7901/DDP细胞的耐药性,但沉默RTKN后其对SGC-7901/DDP细胞的耐药性及对裸鼠皮下移植瘤体积无明显影响,提示降低RTKN表达后,左金丸的抗肿瘤作用被抑制。结论:RTKN通过p53脱乙酰...     

左金丸醇提物调控糖代谢改善结肠癌细胞西妥昔单抗抵抗的作用机制

目的 探讨左金丸醇提物通过能量代谢糖酵解对人结肠癌细胞西妥昔单抗(cetuximab,CET)抵抗的调节机制。方法 将人结肠癌SW620细胞分为对照组、CET组和左金丸醇提物联合CET组，CET组加入含有100μL不同浓度(0.5、1、2、4和8 mg/mL)的CET的培养液，左金丸醇提物联合CET组加入含有100μL不同浓度(0.5、1、2、4和8 mg/mL)的CET以及50μg/mL左金丸醇提物的培养液，对照组不作处理，每组设4个复孔。培养24、48和72 h后采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖。应用Western blot法检测各组表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷酸化EGFR(phosphorylated EGFR,p-EGFR)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)和p-mTOR等EGFR通路上下游蛋白的表达情况。采用相关试剂盒分别检测细胞葡萄糖摄取、乳酸产...