人参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及纯化

研究提取人参叶中的总RNA,采用RT-PCR扩增人参叶Cu/Zn-SOD基因,构建pET-28（a）-Cu/Zn-SOD原核表达载体。使用Escherichia coli BL21（DE3）感受态细胞进行IPTG诱导表达。利用镍离子亲和层析进行纯化,并采用黄嘌呤氧化酶法测定目的蛋白的酶活。经RT-PCR扩增的人参Cu/Zn-SOD基因序列与GenBank数据库中公布的高丽参Cu/Zn-SOD基因序列同源性为99.00%。经IPTG诱导,目的蛋白的表达量约为44.42%,相对分子质量为16.30 kDa。纯化后的蛋白酶活可达到10 596.69 U·mg^-1。通过分子生物学方法,成功构建了人参pET-28（a）-Cu/Zn-SOD原核表达载体,为进一步研究人参Cu/Zn-SOD生物学功能奠定了基础。     

鹿角托盘水溶性蛋白的提取分离与鉴定

目的:对鹿角托盘中的水溶性蛋白进行提取分离和鉴定。方法:采用中性缓冲液浸提和中空纤维膜过滤技术提取鹿角托盘水溶性总蛋白,经采用SDS-PAGE电泳、BCA蛋白浓度测定法,基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱技术及数据库(NCBI)检索进行蛋白分析鉴定。结果:鹿角托盘水溶性总蛋白的收率为8%,蛋白纯度为86%。在水溶性总蛋白中鉴定出5种蛋白,分别为:β-3亚型血红蛋白、抗菌肽1、肽聚糖识别蛋白、β-c亚型血红蛋白、Pre-pro血清白蛋白。结论:鹿角托盘中的水溶性蛋白与药材临床疗效密切相关。     

几种蛋白酶对蛤蟆油黏影响的研究

目的 考察几种蛋白酶对蛤蟆油黏度的影响.方法 以蛤蟆油黏度为评价指标,考察碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶对蛤蟆油黏度的影响.结果 碱性蛋白酶对蛤蟆油黏度的影响最大,酶解30 min即可使黏度由最初的374.72 cP降至8.40 cP;而木瓜蛋白酶和胰蛋白酶对蛤蟆油黏度的影响较小,酶解时间较长,酶解120 min可依次由374.72cP降到233.58cP和47.39cP;胃蛋白酶对蛤蟆油的黏度影响不明显.结论 采用碱性蛋白酶对蛤蟆油进行酶解,可明显降低其黏度,此方法 时间短、效果好.     

不同生长时期人参中6种皂苷含量的变化

目的:研究不同生长时期人参中6种皂苷含量的变化。方法:采用高效液相色谱法对不同生长时期的18批人参样品中6种皂苷的含量进行检测。结果:人参根中皂苷Rg1的含量在展叶期出现峰值,皂苷Re、Rf、Rb1的含量均在展叶期和果后参根生长期出现峰值,皂苷Rb2的含量在结果期和果后参根生长期出现峰值,皂苷Rd的含量在果后参根生长期出现峰值;人参茎中6种皂苷的含量在人参整个生长发育时期均变化不明显;人参叶中6种皂苷的含量均随着人参的生长而不断增加。结论:人参中6种皂苷的含量随着人参的生长而有所变化。