IL-2增强肺炎支原体P1C核酸疫苗的肌注免疫效果

目的:研究IL-2对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1C核酸疫苗经肌注免疫BALB/c小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用.方法:将P1C-IL-2核酸疫苗肌注免疫BALB/c鼠,ELISA检测疫苗免疫后56天小鼠血清IgG和IgG亚类、支气管灌洗液中SIgA、IFN-γ和IL-4的水平;用2×107 Mp菌落形成单位鼻饲感染BALB/c鼠,建立感染小鼠模型,病理切片检测Mp感染后小鼠肺部炎症病理改变;将系列10倍稀释的支气管灌洗液接种于SP4固体平板,并进行菌落计数.结果:P1C-IL-2核酸疫苗免疫组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a、IFN-γ和IL-4水平均较P1C单基因疫苗组显著增高(P＜0.05),但两组支气管灌洗液中SIgA差异无显著性(P＞0.05).Mp感染后第1、3、6天P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠肺组织病理评分(HPS)较P1C单基因疫苗免疫组显著增高,但支气管灌洗液中的Mp菌落数明显减少;第9天后两组HPS和Mp菌落数差异无显著性.结论:IL-2能显著增强P1C疫苗肌注的免疫保护作用和免疫应答水平,但同时在Mp感染早期激发了较重的肺组织炎症.     

GFP-HPV16 E2及其删除突变体融合蛋白在真核细胞中的表达与定位

目的构建人乳头瘤病毒16型E2(HPV16 E2)及其N端(TAD)、C端(DBD)删除突变体与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,观察其在Hela细胞中的表达与定位。方法HPV16 E2基因经PCR扩增后,与pMD-T载体连接,经蓝白斑筛选、PCR、双酶切鉴定及序列分析后,将E2基因亚克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2。PCR扩增TAD、DBD基因片段,将其双酶切后插入pEGFP-C1,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD。将3种质粒转染Hela细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达与定位。结果重组载体经PCR、双酶切鉴定及测序证明插入片段序列正确,且在Hela细胞中能表达目的蛋白;GFP-E2融合蛋白在细胞核与细胞质中都有表达,但主要分布于细胞核;而GFP-DBD融合蛋白仅在细胞核内;GFP-TAD融合蛋白仅在细胞质中。结论构建的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2、pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD均在Hela细胞中表达,并确定了各自在细胞内的定位。     

结核分枝杆菌蛋白Rv0315的克隆表达及其抗原性研究

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315,其在E.coli BL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达,分子量（30.3kDa）与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%（45/48）和35.7%（30/84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。     

HBV感染者血清中HBV-LP检测的临床意义

乙型肝炎病毒感染人体后在血清中存在主要有三种形式,即42nm的Dane颗粒、22nm的小球形颗粒和管状颗粒。三种病毒颗粒均由三种膜蛋白即大蛋白、中蛋白（HBsAg＋PreS2-Ag）、和小蛋白（HBsAg）以不同的比例组装而成。其中,     

HPV16E6蛋白与hDaxx在HeLa细胞的定位及对凋亡的影响

目的 探讨外源人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16 E6)与人Daxx蛋白(hDaxx)在HeLa细胞内的亚细胞定位及诱导HeLa细胞凋亡的影响.方法 Western印迹法检测融合蛋白DsRed-HPV 16 E6和EGFP-hDaxx的表达.激光共聚焦显微镜观察HPV16 E6和hDaxx的亚细胞定位.将HeLa细胞分为对照组、TNF-α处理组、转染空载体组、转染HPV16 E6组、共转染HPV16 E6和hDaxx组.后4组均经TNF-α诱导.用流式细胞仪测定细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-8与Caspase-3的相对活性.结果 融合蛋白DsRed-HPV16E6和EGFP-hDaxx在细胞内表达并分布于胞质与胞核,出现共定位现象,且部分hDaxx从胞核转移至胞质.转染E6组凋亡率(21.4％±1.1％)低于转染空载体组(27.0％±0.9％,P＜ 0.01);与转染E6组相比较,共转染组凋亡率(32.5％±2.1％)显著升高(P＜0.01).转染E6组Caspase-8和Caspase-3相对活性分别为0.057±0.003、0.054±0.006,均低于空载体组(0.092±0.012、0.093±0.005,均P＜0.01);与转染E6组相比较,共转染组Caspase-8和Caspase-3相对活性(0.109±0.013、0.110±0.004)均显著升高(P值均＜ 0.01).结论 HPV16 E6使部分hDaxx从胞核转位至胞质,二者发生共定位.HPV16E6蛋白可抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡,bDaxx高表达可下调HPV16 E6蛋白这种作用.     

结核感染T细胞检测在肺外结核诊断应用价值

目的探讨结核感染T细胞检测在肺外结核诊断应用价值。方法选取本院2012年1月-2013年12月依据结核病原学、组织病理学、诊断性治疗有效及影像学支持临床诊断肺外结核病例80例,25例非结核肺部疾病以及8例健康对照。选用英国Oxford Immunotec Ltd.生产的结核感染T细胞检测试剂盒,按照使用说明操作六部法进行检测。利用蛋白芯片技术检测结核杆菌三种抗原的IgG抗体、痰抗酸染色涂片检查及痰结核分枝杆菌培养(采用改良罗氏法)。结果T-SPOT.TB在肺外结核病阳性率为81.3%、敏感度为84.2%、特异度97.1%、诊断效率87.6%。肺外结核组TSPOT.TB检测阳性率明显高于非结核疾病和健康对照组,差异有统计学意义(P0.01)。肺外结核疾病各组间敏感度、特异度、诊断效率比较差异无统计学意义(P0.05)。肺外结核疾病利用T-SPOT.TB和结核杆菌蛋白芯片检测方法配对比较,前者明显高于后者,差异有统计学意义(P0.01)。结论肺外结核多脏器及临床表现差异性及复杂性,需要临床经验、有效的辅助检查诊断,T-SPOT.TB检测是结核病诊断金标准之外的非常有效辅助诊断方法,可节约诊断时间及不必要检查,可更好利用医疗资源同时减轻患者负担,更好防治结核病。     

ELISA一、二步法检测二对半结果不一致的原因分析

ＥＬＩＳＡ一、二步法检测二对半结果不一致的原因分析江苏省苏州市第五人民医院检验科（２１５００７）吴兴福，陈苏芳，是贻芬ＥＬＩＳＡ以其高度的特异性、敏感性等优点，在临床上被广泛应用于各种抗原、抗体的检测，乙肝病毒（ＨＢＶ）标志物的检测也不例外。鉴于经典...     

改革《临床检验基础》实验教学内容提高学生临床综合素质

分析几年来我系〈临床检验基础〉的教学及实验教学现状,在前期理论教学改革工作基础之上,对〈临床检验基础〉实验教学的内容进行了系列改革,既提升了学生的动手能力和结合临床的意识,又使教学内容体现出学科新知识和新进展,反映检验医学现状与趋势,培养学生综合分析问题与解决问题能力,提高了学生的临床综合素质.     

嗜水气单胞菌内源性感染菌株的分离与药敏分析

目的:分析嗜水气单胞菌内源性感染菌株分离、鉴定与耐药情况,为临床合理用药提供参考。方法:采用科玛嘉双相显色培养基,MicroScan autoSCAN4细菌鉴定仪,按《全国临床检验操作规范》流程操作。结果:分离的菌株经MicroScan autoSCAN4细菌鉴定仪鉴定为嗜水气单胞菌,符合率99.99%;该菌对β-内酰胺类(青霉素类)、亚胺培南(泰能)耐药;对头孢类、大环内酯类、喹诺酮类、磺胺类敏感。结论:嗜水气单胞菌在免疫力低下并患有基础疾病(肝炎、恶性肿瘤、有侵袭性手术伤)患者,易引起败血症、弥漫性血管内凝固症(disseminated intravascu-lar coagulopaties,DIC)、休克导致死亡。