血液学多参数细胞计数分析仪等渗稀释剂制备及其质量参数的探讨

等渗稀释剂是保证多参数电子血细胞计数仪测定准确度的主要因素之一。根据红细胞膜的渗透特性和仪器的换能原理,本文提出了稀释剂有关无机盐浓度的可变量配方,以保证其等张作用,并介绍了PBS 加无机盐、抗凝剂、防腐剂组成可供七参数仪器使用的稀释剂制备方法。在国内首次提出用pH/气体、电导率、等张度、空白计数、稳定性五项指标评价其质量。     

人体微生态学概论与相关进展列举

概要性描述人体微生态学的历史、进展与现状，提出现代人体微生态学的编纂提纲，期待同道们的批评、斧正与加盟。结合作者近年来的研发与产业化实践，对人体微生态在肠道和阴道这两个微生态区域的相关研究进展进行较为系统的论述，认为在现代生命科学相关领域的教学与科研活动中，人体微生态学具有重要的作用和不可低估的发展前景。     

TEM-116型超广谱β-内酰胺酶对牛奶中抗生素的清除

目的利用TEM-116型超广谱β-内酰胺酶能降解具有β-内酰胺环的抗生素的特性清除牛奶中的此类抗生素。方法DelvotestSP试剂盒检测三个温度条件下所需的TEM-116型酶的剂量。结果37℃，反应0．5h，1．032IU／L的TEM-116型酶能把牛奶中青霉素G清除；23℃，0．5h，1．29IU／L的TEM-116酶能把牛奶中的青霉素G清除；4：C，8～12h，0．22IU／L的TEM-116酶能清除牛奶中的青霉素G。结论TEM-116型超广谱β-内酰胺酶在不苛刻的条件下很容易清除牛奶中残留的青霉素G。     

TEM-116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性研究

目的 研究TEM-116型ESBL天然酶与重组酶的动力学特性，并比较它们的差异。方法 采用紫外分光光度法检测酶促抗生素水解反应，以Lee-Wilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理，测定天然酶与重组酶的Km、Vmax及kcat，观察温度和pH对酶促反应的影响。结果 以Lee-Wilson改良双倒数方程数据处理法进行数据处理方便而准确地测定了天然酶与重组酶的Km与Vmax并计算出kcat,温度和pH对天然酶与重组酶酶促反应效应相似。天然酶与重组酶最优先的底物均为头孢哌酮，其次是头孢氨苄；对氨苄西林、阿莫西林、青霉素和哌拉西林有最高的催化效率。结论 天然酶与重组酶的动力学参数无显著差异。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

血清总蛋白测定不同双缩脲试剂及标准化评价

在１２家医院考察了国内三种高ＮａＯＨ浓度的双缩脲试剂的应用效果。用这些双缩脲试剂测定的血清总蛋白结果偏高，精密度不如Ｄｏｕｍａｓ配方。用Ｄｏｕｍａｓ双缩脲试剂测得蛋白原始标准（ＳＲＭ９２７ａ）和二份蛋白次级标准的吸光系数均为０．２９８２±０．００１６Ｌｇ￣（－１）（５４０ｎｍ），２５Ｃ时呈色曲线在６０分钟达到平衡。用吸光系数法测定三份定值冻干质控血清的总蛋白值，均较厂方标定值略高。表明有必要统一双缩脲试剂配方和方法，吸光系数法可作为蛋白次级标准的定标方法。     

The characteristics of enzyme kinetics of CTX-M-14 type extended-spectrum β-lactamase with Pro167 residue substitution

Objective To analyze and evaluate the characteristics of enzyme kinetics of CTX-M-14 type extended-spectrum β-lactamase(ESBL) with Pro167 residue substitution. Methods By molecular cloning and PCR techniques, CTX-M-14 gene was directionally cloned into plasmid pET28a( + ) from a clinical E. coli isolate and formed an expression vector to transform competent E. coli BL21 (DE3 ). Prol67 residue substitutions of P167G, P167Q, P167S and P167T were introduced to CTX-M-14 by site-directed muta-genesis based on overlap extension PCR with the former recombinant plasmid as PCR template, respectively.The wild-type CTX-M-14, recombinant CTX-M-14 protein and its variants were expressed and purified, then their steady-state kinetic parameters (Kcat, Km and Kcat/Km ) against β-lactam antibiotics were determined.Results The kinetic parameters of wild-type and recombinant CTX-M-14 had no statistically significant differences (P>0.1). The 1/Km, Kcat and Kcat/Km values of P167S variant against ceftazidime were 16-fold, 2.87-fold and 43.6-fold higher than those of recombinant CTX-M-14, respectively, and the Kcat/Km value of P167S variant against penicillin, ampicillin, cefazolin, cefuroxime, ceftriaxone, cefotaxime decreased( < 0.05). Compared with the kinetic parameters of recombinant CTX-M-14, the kinetic parameters of P167T variant against ceftazidime had no significant change, but the Kcat values of P167Q and P167G variants decreased dramatically(P<0.01). Conclusion There was no difference between the enzyme activities of wild-type and recombinant CTX-M-14. P167S variant could not only promote the enzyme affinity of CTX-M-14 to ceftazidime but also improve the conversion rate of enzyme-substrate complex in the ceftazidime hydrolysis. The comparison of the kinetic parameters of CTX-M-14 and its variants with Pro167 residue substitution showed that the increased activity of CTX-M ESBL variants against ceftazidime could not be simply explained with the enlarged cavity in active site that may be caused by the replacement of Pro167 residue by smaller amino acids.     

大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株aac（3）-Ⅱ基因保守区分析

常规分离鉴定47株大肠埃希菌，以标准纸片扩散法(K—B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定，耐药株经PCR检测aac(3)～Ⅱ基因保守区，扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3)-Ⅱ基因保守区之间的关系，结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3)-Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型，且高度耐药菌株皆为65位G、84位T。     

超广谱和耐酶抑制剂β-内酰胺酶的研究进展

产超广谱和耐酶抑制剂β-内酰胺酶是革兰阴性菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要原因。近几十年,这些酶的种类迅速增加,掌握它们的分类、构效关系和耐药模式等方面的知识,对临床合理使用抗生素和防止耐药菌的产生具有重要意义。对超广谱和耐酶抑制剂β-内酰胺酶的最新分类,它们水解β-内酰胺类抗生素的主要结构特点,及其氨基酸位点突变对构效关系的影响进行了介绍。