毛兰素注射液在大鼠体内药动学研究

目的 阐明毛兰素注射液在SD大鼠体内药动学规律。方法 SD大鼠分别单次和隔天、每隔一个半衰期一次多剂量静脉注射毛兰素注射液。采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)测定大鼠静脉注射后不同时间大鼠血浆中毛兰素的血药浓度。结果 大鼠单次静脉注射25,50,100 mg·kg^-1毛兰素注射液的主要药动学参数为：T_1/2β分别为3.66,3.75,3.89 h; AUC_0-12分别为1 453.0,3 041.6,6 731.6 ng·mL^-1·h;AUC_0-∞分别为1 462.0,3 077.3,6 788.7 ng·mL^-1·h;Vd分别为11.67,10.37,3.38 L·kg^-1;CL分别为0.049,0.089,0.024 L·kg^-1·h^-1;MRT分别为0.18,0.28,0.21 h;50 mg·kg^-1剂量的毛兰素注射液隔日给药5次其药动学参数与单次给药相近;而50 mg·kg^-1剂量的毛兰素注射液每隔一个半衰期一次给药5次的T_1/2β为5.43 h,AUC_(S0)(0-t)为9 800.8 ng·mL^-1·h。结论 毛兰素注射液在大鼠体内的动力学过程与剂量相关,毛兰素注射液单剂量给药的体内药动学符合开放型二房室模型,T_1/2β与给药剂量与关,表明毛兰素在大鼠体内的消除过程符合一级动力学规律。隔日多剂量给药的消除过程亦符合一级动力学规律;而每隔一个半衰期一次多剂量给予50 mg·kg^-1剂量的毛兰素其在大鼠体内则呈非线性消除。     

鸦胆子油乳注射液对喉癌Hep-2细胞抑制作用研究

目的 探讨鸦胆子油乳注射液对喉癌Hep-2细胞增殖活性、凋亡水平、细胞周期及侵袭迁移的影响.方法 不同浓度鸦胆子油乳注射液作用Hep-2细胞后,利用MTT法检测鸦胆子油乳注射液作用后细胞增殖抑制情况;利用Hoechst33258观察细胞的凋亡现象;流式细胞仪检测分析细胞周期分布、凋亡情况;Transwell实验分析细胞侵袭迁移能力的变化情况.结果 经鸦胆子油乳注射液处理后,Hep-2细胞的增殖能力明显受到抑制(P＜0.05),且在一定浓度范围内,呈时间和剂量依赖性;细胞核出现致密的固缩形态及颗粒状荧光,鸦胆子油乳注射液诱导了细胞凋亡;细胞周期都被阻滞在G2/M期;鸦胆子油乳注射液呈剂量依赖性的抑制Hep-2细胞侵袭迁移能力(P＜0.05).结论 鸦胆子油乳注射液可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖及侵袭迁移能力,可能与其引起肿瘤细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡有关.     

毛兰素注射液在大鼠体内药动学研究

目的 阐明毛兰素注射液在SD大鼠体内药动学规律。方法 SD大鼠分别单次和隔天、每隔一个半衰期一次多剂量静脉注射毛兰素注射液。采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)测定大鼠静脉注射后不同时间大鼠血浆中毛兰素的血药浓度。结果 大鼠单次静脉注射25,50,100 mg·kg^-1毛兰素注射液的主要药动学参数为：T_1/2β分别为3.66,3.75,3.89 h; AUC_0-12分别为1 453.0,3 041.6,6 731.6 ng·mL^-1·h;AUC_0-∞分别为1 462.0,3 077.3,6 788.7 ng·mL^-1·h;Vd分别为11.67,10.37,3.38 L·kg^-1;CL分别为0.049,0.089,0.024 L·kg^-1·h^-1;MRT分别为0.18,0.28,0.21 h;50 mg·kg^-1剂量的毛兰素注射液隔日给药5次其药动学参数与单次给药相近;而50 mg·kg^-1剂量的毛兰素注射液每隔一个半衰期一次给药5次的T_1/2β为5.43 h,AUC_(S0)(0-t)为9 800.8 ng·mL^-1·h。结论 毛兰素注射液在大鼠体内的动力学过程与剂量相关,毛兰素注射液单剂量给药的体内药动学符合开放型二房室模型,T_1/2β与给药剂量与关,表明毛兰素在大鼠体内的消除过程符合一级动力学规律。隔日多剂量给药的消除过程亦符合一级动力学规律;而每隔一个半衰期一次多剂量给予50 mg·kg^-1剂量的毛兰素其在大鼠体内则呈非线性消除。     

雷帕霉素诱导鼻咽癌CNE-1细胞自噬及其机制研究

目的　探讨雷帕霉素在诱导人鼻咽癌CNE-1细胞发生自噬过程中的作用及在此过程中FIP200基因的表达变化情况。方法　应用CCK-8法检测不同浓度雷帕霉素处理CNE-1细胞4、12、24、48小时后对细胞增殖能力的影响；在激光共聚焦显微镜下观察自噬小体形成过程中LC3颗粒的聚集情况；qRT-PCR及Western blot检测雷帕霉素处理CNE-1细胞48小时后对LC3、p62及FIP200基因的表达水平的影响。结果　CNE-1细胞经不同浓度雷帕霉素处理4小时，各组细胞的增殖能力无明显差异（P >0.05），在处理12小时后，雷帕霉素对CNE-1细胞增殖活性产生抑制作用，且呈浓度依赖性（P <0.01）；在激光共聚焦显微镜下可见细胞经雷帕霉素处理48小时后出现较明显的LC3颗粒聚集；CNE-1细胞中的自噬相关基因LC3、p62，在雷帕霉素处理48小时后，与对照组相比前者表达升高（P <0.01），后者表达量降低（P <0.01），FIP200基因表达水平升高（P <0.01）。结论　雷帕霉素能抑制鼻咽癌CNE-1细胞的增殖活性，诱导细胞发生自噬，FIP200可能在调控鼻咽癌细胞自噬性死亡中发挥作用。     

miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖

 目的:探讨过表达微小RNA（microRNA-7,miRNA-7）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,也称Akt）通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降（P<0.01）;real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论: 过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。     

HPLC测定毛兰素乳液型注射液中毛兰素及有关物质含量

目的 建立一种测定一类新药毛兰素乳液型注射液中毛兰素及有关物质鼓槌联苄含量的方法。方法 采用Agilent XDB C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-水(30∶30∶40),检测波长：232 nm;流速：1.0 mL·min^-1。结果 毛兰素及有关物质鼓槌联苄达到完全分离;毛兰素在5.562 5~89.0 μg·mL-1内线性关系良好(Y=13 504X+2 146.6,r=0.999 9),平均回收率100.8%;有关物质鼓槌联苄在9.292~46.462 μg·mL^-1内亦有良好线性关系(Y=14.033 1X+2.388 6,r=0.999 9),平均回收率达99.8%。结论 本法灵敏,准确,专属性强,可用于测定注射液中毛兰素的含量和有关物质的检查。     

HPLC测定毛兰素乳液型注射液中毛兰素及有关物质含量

目的 建立一种测定一类新药毛兰素乳液型注射液中毛兰素及有关物质鼓槌联苄含量的方法。方法 采用Agilent XDB C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-水(30∶30∶40),检测波长：232 nm;流速：1.0 mL·min^-1。结果 毛兰素及有关物质鼓槌联苄达到完全分离;毛兰素在5.562 5~89.0 μg·mL-1内线性关系良好(Y=13 504X+2 146.6,r=0.999 9),平均回收率100.8%;有关物质鼓槌联苄在9.292~46.462 μg·mL^-1内亦有良好线性关系(Y=14.033 1X+2.388 6,r=0.999 9),平均回收率达99.8%。结论 本法灵敏,准确,专属性强,可用于测定注射液中毛兰素的含量和有关物质的检查。     

天花粉蛋白诱导Syk(L)基因去甲基化抑制喉癌Hep-2细胞生长研究

目的 探讨天花粉蛋白通过全长型脾络氨酸激酶[full-length form of spleen tyrosine kinase,Syk（L）]基因去甲基化途径恢复Syk（L）表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭迁移的的抑制作用。方法 采用CCK-8法及Transwell实验检测不同浓度天花粉在不同时间点对Hep-2细胞增殖及处理72h后细胞侵袭迁移能力的影响;采用MS-HRM法、Q-RT-PCR及Western blot法检测不同浓度天花粉蛋白对Hep-2细胞Syk（L）基因甲基化水平及其表达的影响。结果 CCK-8结果显示,天花粉蛋白对喉癌Hep-2细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度、结果时间依赖性;Transwell结果显示,天花粉蛋白能显著抑制Hep-2细胞的侵袭迁移能力;MS-HRM结果显示,天花粉蛋白可以逆转Hep-2细胞Sky（L）基因的高甲基化状态,恢复Syk（L）mRNA及蛋白的表达。结论 天花粉蛋白通过逆转Syk（L）基因启动子CpG岛的甲基化状态,使喉癌Hep-2细胞中Syk（L）基因表达活化,恢复Syk mRNA及蛋白的表达,最终发挥抑癌基因的作用抑制Hep-2细胞恶性生物学行为,具有开发并成为抗肿瘤药物的潜在价值。