何首乌扩增长度多态性反应及银染体系的建立

目的 通过对各主要影响因素的研究,建立适于何首乌扩增长度多态性（AFLP）反应体系及银染体系. 方法 采用改进的CTAB提取方法从何首乌的嫩叶中提取获得总DNA;从酶切DNA的量、时间等考察酶切体系,并设计正交实验进行预扩体系和选扩体系的优化. 结果 酶切体系DNA的适用量为400 ng,37 ℃酶切5 h;用较优的预扩增体系和选择性扩增得到的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,得到清晰的指纹图谱. 结论 所建立的反应体系可有效地应用于何首乌的分类鉴定和道地性鉴定.     

我国不同地区白木香核糖体DNA内转录间隔区碱基序列分析

目的:研究我国不同地区白木香核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)碱基序列的差异。方法:运用PCR法对白木香的ITS(包括ITS1,5.8S,ITS2)序列扩增后直接测序,用软件CLUSTALX和MEGA分析测序结果。结果:白木香ITS区总长度为680bp,其中ITS1为246bp,5.8S为163bp,ITS2为271bp。ITS序列在白木香种内的变异很小,只有6个变异位点,种内遗传距离为0.0%-1.1%。结论:ITS序列的差异为鉴别不同产区白木香及其近缘种提供了依据。     

不同倍性何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类的含量比较

目的:考察二倍体与三倍体何首乌中二苯乙烯苷、蒽醌类成分的含量差异。方法:采用Inertsil ODS-3C18柱,分别用乙腈-水(25∶75)、甲醇-0.1%磷酸(85∶15)作为流动相,在320 nm和254 nm处检测2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、蒽醌类成分的含量。结果:广东德庆二倍体何首乌中二苯乙烯苷的含量最高,广西靖西三倍体何首乌中结合型蒽醌的比例达到了85%。结论:不同倍性何首乌中化学成分存在差异。     

正交实验设计优化白木香ISSR-PCR反应体系的研究

利用正交实验设计的方法,对白木香ISSR-PCR(简单重复序列区间-多聚酶链式反应)反应体系中的5种主要因素(dNTP、Mg2 、模板DNA、引物和Taq酶)在4个水平上进行优化筛选,建立了白木香ISSR-PCR反应的最佳体系(25μ1)为:dNTP 0.2 mmol/L、Mg2 2.5 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA 100 ng和Taq酶1.0 U.通过梯度PCR反应得到相应引物的最佳退火温度为49.2℃.这一体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究白木香的遗传多样性提供了标准化程序.     

白木香基因组DNA的提取及AFLP银染体系的建立

用改良的CTAB法提取不同居群的白木香基因组DNA，通过优化AFLP技术中关键步骤的参数，建立适合白木香的AFLP银染反应体系。结果表明，改良的CTAB法提取的白木香基因组DNA纯度高，完整性好，满足AFLP分析的要求；250ng的基因组DNA用EcoRI和MseI37℃消化3h后可以被完全酶切，酶切产物和接头经16℃连接过夜后，用带有一个选择性碱基的引物和带有3个选择性碱基的引物分别进行预扩增和选择性扩增，扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，用AgNO3染色得到了清晰的指纹式样，为下一步的遗传分析奠定了基础。     

白木香的遗传差异及ISSR分子鉴定

目的采用简单重复序列区间（ISSR）扩增技术，对不同地区白木香的遗传变异、亲缘关系及分子鉴定进行研究。方法筛选随机引物进行ISSR扩增，通过UPGMA聚类，研究白木香各居群间的遗传关系，构建居群亲缘关系的分子系统树；利用特异性条带对白木香进行指纹分析鉴别。结果共筛选出7条有效引物，经ISSR扩增得到80条带，平均每条引物扩增出11．4条带，其中多态性条带47条，多态性程度达58．8％，居群间遗传距离为0．0733～0．4213。结论ISSR分子标记可作为白木香居群遗传多态性、居群亲缘关系和分子鉴别的有效手段；引物IS-8可以进行白木香种内和种间的鉴别。     

南药高良姜基因组DNA提取方法的研究

目的 提取高质量的高良姜基因组DNA,用于药材分子鉴定、分子系统分类和分子进化等下游分子生物学研究.方法 在CTAB改良法基础上,采用4个方案提取DNA.结果 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA的OD260/OD280比值在1.8～2.0之间,产率为0.54～1.049 μg/mg干燥叶片.基因组DNA能被限制性内切酶EeoR Ⅰ和Mse Ⅰ完全酶切,经AFLP分析,得到了条带清晰的DNA指纹图谱.结论 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学研究要求.