环氧化酶2过表达对铝盐致大鼠海马神经元损伤的影响

目的:研究环氧化酶2(COX-2)过表达与铝盐致大鼠海马神经元损伤间的关系.方法:原代海马神经元培养7d,予以铝盐负荷(终浓度200 μmol/L )建立大鼠海马神经元损伤模型,以神经元转染COX-2过表达腺病毒(MOI=100),Western Blot检测COX-2的蛋白表达水平,酶化学法检测海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及MTT值,倒置荧光显微镜观察海马神经元病理形态变化.结果:COX-2过表达腺病毒转染的神经元COX-2蛋白表达增加(P＜0.01),SOD活性、MDA含量、LDH漏出率、MTT值,以及大鼠海马神经元细胞的形态和结构未见明显异常变化.而COX-2过表达腺病毒转染在铝盐负荷基础上的海马神经元细胞MTT值和SOD活性明显下降,LDH漏出率和MDA含量明显上升(P＜0.01或P＜0.05),表现为严重的细胞损伤.结论:单纯的一定程度COX-2过表达不会造成神经元明显损伤,但可增加神经元对铝盐损伤的敏感性.     

咖啡酸对大鼠海马神经元铝盐损伤的保护作用

目的建立氯化铝致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,观察咖啡酸对神经元铝盐损伤的保护作用。方法新生24h内SD大鼠海马神经元原代培养,7d后用免疫组化鉴定纯度;并分成空白对照组(NaCl200μmol.L-1)、铝负荷模型组(AlCl3200μmol.L-1)、铝和不同浓度的5-LO抑制剂咖啡酸(10-6、10-7、10-8mol.L-1)混合处理组。以HE染色,MTT测定,LDH漏出率,SOD活性和MDA含量为观测指标。结果神经元纯度超过95%。铝负荷致神经细胞数目明显减少,神经元突起减少变短,原代培养海马神经元活力降低,LDH漏出明显增多,SOD活性降低,MDA含量升高。咖啡酸能剂量依赖性地减轻铝盐所致的原代培养的海马神经元损伤,提高神经细胞的活力,减少LDH漏出,明显阻遏铝负荷所致的神经元SOD活性的降低和MDA含量的升高。结论咖啡酸对铝负荷所致的原代培养大鼠海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抑制5-LO活性,进而抑制炎症反应和氧化应激有关。     

5-LO表达对铝盐致海马神经元损伤的影响

目的观察5-LO表达对铝盐致原代培养海马神经元损伤的影响。方法将5-LO过表达重组体腺病毒(Ad5-LO)和5-LO RNAi重组体腺病毒(Ad5-LO-RNAi)转染原代培养7 d的海马神经元,实验随机分为7组:空白对照组(NaCl 200μmol.L-1)、空载腺病毒组(MOI=100)、5-LO过表达腺病毒组(MOI=100)、5-LO RNAi腺病毒组(MOI=100)、空载腺病毒(MOI=100)+铝盐负荷组(AlCl3200μmol.L-1)、5-LO过表达腺病毒(MOI=100)+铝盐负荷组(AlCl3200μmol.L-1)、5-LO RNAi腺病毒(MOI=100)+铝盐负荷组(AlCl3200μmol.L-1)。采用荧光显微镜观察海马神经元形态变化,以RT-PCR和Western blot方法分别检测神经元5-LO mRNA和蛋白表达,以MTT测定和LDH漏出率检测神经元存活情况,以生化方法测定海马神经元SOD活性和MDA含量变化。结果空载腺病毒+铝盐负荷组神经元数目明显减少,胞体萎缩,突起减少变短,5-LO mRNA和蛋白表达增多,MTT值降低,LDH漏出率增多,SOD活性降低,MDA含量增加。与空载腺病毒+铝盐负荷组比较,5-LO过表达腺病毒处理使铝盐负荷神经元上述指标的变化更加明显;5-LO RNAi腺病毒处理能明显阻遏铝盐负荷组海马神经元上述指标的变化。结论 5-LO过表达可增加大鼠海马神经元对铝盐损伤的易感性,而抑制5-LO表达能够减轻铝盐对大鼠海马神经元的损伤。     

环氧化酶2在铝负荷致大鼠海马神经元损伤中的作用

目的:研究环氧化酶2(COX-2)在铝盐致大鼠海马神经元损伤中的作用。方法:原代海马神经元培养7 d,予以铝盐负荷(终浓度200 μmol·L^-1)建立大鼠海马神经元损伤模型,以COX-2特异性干扰腺病毒(MOI=100)转染神经元,Western blotting检测COX-2蛋白表达水平,酶化学法检测海马神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率及MTT值,倒置荧光显微镜观察海马神经元病理形态变化。结果:COX-2特异性干扰腺病毒转染的神经元COX-2蛋白表达下降,SOD活性、MDA含量、LDH漏出率、MTT值以及大鼠海马神经元的形态和结构未见明显异常变化,但其明显提高了铝盐负荷基础上的海马神经元存活率和SOD活性,显著降低了LDH漏出率和MDA含量,并改善了铝盐负荷后神经元的病理学形态。结论:海马神经元COX-2表达的适度沉默,不会影响海马神经元的形态和功能,但对于铝负荷导致的神经元损伤有保护作用。     

美洛昔康对铝负荷致大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:观察美洛昔康对铝负荷致海马神经元损伤的保护作用。方法:离体培养新生SD大鼠海马神经元7d,分成空白对照组(200μmol·L-1NaCl)、铝模型组(200μmol·L-1AlCl3)、美洛昔康小、中、大剂量(10-8、10-7、10-6mol·L-1)组,给药24h后,检测各组神经元光密度值、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并观察神经元形态。结果:与空白对照组比较,铝模型组光密度值降低、LDH漏出率升高、SOD活性减弱、MDA含量升高(P<0.01),神经元形态发生明显损伤;与铝模型组比较,美洛昔康各剂量组光密度值升高、LDH漏出率降低、SOD活性增强、MDA含量降低(P<0.01或P<0.05),神经元形态出现明显改善。结论:美洛昔康对于铝负荷致离体海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应和氧化应激有关。