UPLC同时测定清热止咳颗粒中7种黄酮类成分含量

目的 建立同时测定清热止咳颗粒中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷含量的方法。方法 采用超高效液相色谱法。采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱) ,流速0.3 mL·min^-1,检测波长280 nm,柱温30 ℃。结果 芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷分别在0.324～6.480（r=0.999 9）,1.337～26.75（r=0.999 7）,0.687～13.80（r=0.999 6）,1.347～26.95（r=0.999 8）,2.770～55.40（r=0.999 2）,0.330～6.600（r=0.999 8）,0.242～4.840（r=0.999 6）μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系;并且芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、木蝴蝶素A-7-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷平均加样回收率分别为99.41%、101.80%、99.42%、98.47%、101.71%,102.27%和97.64%,RSD范围分别是2.32%、1.69%、2.38%、2.45%、1.24%、1.77%和1.91%。结论 建立的超高效液相色谱(UPLC)方法操作简便、稳定、准确且可行,可用于清热止咳颗粒的质量控制。     

狂犬病毒载体的构建与鉴定

目的构建狂犬病毒载体,为新型疫苗研究提供依据。方法将狂犬病毒减毒株SAE基因组分段扩增,然后经逐步拼接得到全基因组克隆,并在其中引入转录终止-起始元件和多克隆位点获得重组质粒pSAETOPO。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和西尼罗病毒prME基因分别克隆至pSAETOPO,然后将带有这两个基因的狂犬病毒全长cDNA切下并克隆至pcDNA3.1(+)载体。将获得的重组质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME转染细胞,分别观察辅助病毒对外源基因表达的影响。结果获得狂犬病毒载体质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME,经酶切分析和序列测定表明所构建克隆是正确的。pcSAE-GFP及pcSAE-ME转染细胞后,在辅助病毒存在下可表达相应外源基因。结论构建的狂犬病毒载体质粒可表达外源基因,为进一步获得表达外源基因的重组狂犬病毒奠定了基础。     

大肠菌群两种培养方法比较

公共场所监测是卫生管理工作中的重要一环,传统的公共场所大肠菌群监测采用三步发酵法,此法操作比较繁琐,费工费料。为了选择一种简单易行,结果可靠的新方法,我们采用了纸片法与发酵法作对比实验,两法无显著性差异,结果如下: 材料与方法 1.材料来源①110份样品采自我市范     

狂犬病病毒核蛋白基因-重组犬2型腺病毒的构建研究

目的获得具有感染性的狂犬病病毒核蛋白-犬2型腺病毒,并对重组病毒生物学和免疫学特性进行初步探讨。方法对克隆的犬2型腺病毒全基因组E3区进行部分缺失后,插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因和牛生长激素polyA构成的长2392bp的表达盒,然后通过AscⅠ和PvuⅠ双酶切,游离重组全基因组,转染犬肾细胞系。结果盲传5代后,细胞产生典型病变。经鉴定,确定得到了狂犬病病毒核蛋白-重组犬2型腺病毒（CAV-2-RN）。Western blot检测表明,狂犬病病毒核蛋白在重组犬2型腺病毒中得到了表达。结论重组病毒可以诱导受试犬产生针对犬2型腺病毒和狂犬病病毒核蛋白的特异性抗体。     

彝药小儿腹痛草中微量元素测定及红外光谱的研究分析

采用电感耦合等离子体发射光谱仪,对彝药小儿腹痛草中的微量元素进行测定分析。结果表明,小儿腹痛草中含有Ca,Mg,Fe,Cu,Zn,Mn等多种元素。采用FTIR对小儿腹痛草进行特征谱的测定,为彝药鉴定提供科学依据。     

犬IL-18 cDNA的克隆及其免疫学特性

目的：获得犬白介素-18(cIL-18)基因并探讨其作为基因疫苗佐剂的免疫效果。方法：从犬的外周血中分离白细胞，经ConA刺激培养5～12h。提取犬白细胞总RNA作为模板，通过RT-PCR技术扩增cIL-18 cDNA。将其克隆到载体pMD18-T中测序，并与已发表的序列进行比较。将cIL-18 cDNA克隆入pIRES1 neo中，构建cIL-18真核表达载体。以200txg：200txg的比例，与狂犬病病毒糖蛋白表达载体plGneo混合免疫犬，并与糖蛋白单独免疫犬的免疫应答进行比较。结果：扩增获得单一长约0．6kh核酸带，测序证明长度为582bp，编码193个氨基酸，与从犬肺巨噬细胞中扩增的cIL-18基因的序列完全一致。以构建的表达载体pIIL18与pIGneo混合免疫与用pIGneo单独免疫相比较，前者抗狂犬病病毒特异性抗体的水平显著低于后者；但混合免疫组犬外周血淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激的反应性显著高于糖蛋白单独免疫组。结论：cIL-18全长为582bp，其真核表达载体具有增强细胞免疫应答的能力，同时可显著抑制体液免疫应答。本研究为cIL-18作为基因疫苗佐剂的研究奠定了基础。     

狂犬病病毒糖/核蛋白基因疫苗和IL-18在犬的免疫试验研究

目的　检测狂犬病病毒糖 /核蛋白“二价”基因疫苗及IL - 18在犬体内的免疫效果 ,并确定不同包裹剂对基因疫苗免疫效果的影响。方法　本试验以 pIRES1neo和人用灭活苗分别作为阴、阳性对照 ,以糖 /核蛋白双基因共表达载体 pIGN单独或与IL - 18的真核表达载体pIIL18混合 ,以司苯 -甘油混合或以生理盐水溶液形式 ,按每条犬 2 0 0 μgDNA/ml,接种 3次 (其中 1组第 3次加强免疫时采用浓缩的狂犬病灭活苗 ) ,间隔 2周的免疫程序 ,经股四头肌进行注射免疫。通过间接ELISA、细胞中和试验及淋巴细胞转化试验分别检测体液和细胞免疫水平。结果与结论　结果显示 ,1.所有试验组在第 3次加强免疫后特异性抗体和中和抗体水平显著高于阴性对照组 ;pIGN pIIL18组诱导的细胞免疫水平高于无 pIIL18的 pIGN免疫组 ;2 .以司苯 -甘油作为包裹剂的基因疫苗诱导产生的免疫应答水平与裸质粒 (生理盐水溶液 )形式的基因疫苗间无显著差异 ;3.以糖 /核蛋白二价基因疫苗pIGN作为基础免疫 ,再以狂犬病浓缩灭活苗加强免疫后 ,能迅速诱导较高的体液免疫应答水平。以上结果说明 ,狂犬病病毒糖 /核蛋白“二价”DNA疫苗具有实际应用于免疫预防的潜力。     

某市2003年至2006年食品抽样检测结果分析

目的：比校某市2003年至2006年食品抽样检测合格率。方法：采用随机抽样检查的方法采集食品样品进行检测。结果：食品检测合格率在逐年提高,但经统计学检验无显著性差异。结论：总体比较,食品抽样检测合格率在逐年提高,但各类食品之间合格率仍有较大差异。     

表现型为视神经萎缩的NDUFV1基因新移码突变

目的 对一个视神经萎缩的儿童进行致病基因研究，并分析其对蛋白结构的影响。方法 收集该患儿及家属病历资料，进行视力、视野、眼底、OCT、VEP等眼科检查，及神经科查体、头颅MRI等全身检查，并随访1年。采集患儿及家长外周血，提取DNA进行全外显子的二代基因测序，并对突变基因进行致病性分析和蛋白结构分析。结果 患儿表现为双眼视力下降、视神经萎缩，VEP呈低振幅，无明显感觉及、肌张力异常，头颅MRI未发现明显脑白质病变。DNA测序显示编码线粒体复合物I（complex I）的核基因NDUFV1基因外显子1中出现杂合的移码突变c.53_54delTG，缬氨酸变为丙氨酸，引起新读码框在20位置过早形成终止编码（p Val18AlafsX20）；内含子8中存在杂合的点突变（c.1162+4A>C）。蛋白结构分析显示complex I的NDUFV1亚单元重要结构缺失。结论 在儿童视神经萎缩且无脑白质异常的病例中，发现新的NDUFV1基因突变，有助于拓宽对NDUFV1基因表现型和基因型关系的认识。     

狂犬病病毒糖/核蛋白基因疫苗中间试验生物安全评价

目的　本试验应用狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA疫苗- pVGN免疫4 0条无狂犬病疫苗免疫史的家犬,共免疫3次。通过观察受试犬的临床表现,监测抗性基因的转移,检测质粒及其主要元件在主要脏器和注射组织的分布、存留及整合,观察主要脏器组织病理学变化,分析疫苗对妊娠母犬及其子代的影响,来评价该疫苗的生物安全性。结果表明,该DNA疫苗可在动物体内诱导良好的体液免疫反应。同时,受试犬未出现任何异常临床表现;DNA疫苗中的卡那霉素抗性基因未在免疫犬肠道正常菌群中发生转移,DNA质粒也未经肠道菌群、尿液和唾液排放到体外;在心、脾、肾和注射部位均能检测到质粒的存在,并分别能存留约18、14 - 18、14和2 6周以上,但质粒DNA未与上述组织的基因组DNA发生整合;在主要代谢器官肝脏中始终未检测到质粒DNA或其主要元件;上述各主要脏器未出现组织病理学变化;对妊娠母犬和其子代无不良影响。说明本狂犬病“二价”DNA疫苗不仅具有良好的免疫原性,而且具有很好的安全性。