我国西双版纳傣族群体HLAⅡ类基因的寡核苷酸分型

我们对73名西双版纳傣族正常健康个体用第11届国际组织相容性专题讨论会的方法进行了HLA Ⅱ类基因的 PCR/SSO 分型。结果表明傣族的 HLA Ⅱ类等位基因频率分布在与中国南方人群相似以外尚有其独特性.共捡出 DRB1 等位基因20种,其中基因频率超过0.10的依次为1602、0901、1502、1401及1202,未发现01、08及1001等位基因。DRB3仅捡出0202及0301,DRB5仅捡出0101和0102。DQA1共捡出6种等位基因以0102、0101、03频率为最高。以0502为最高频率的 DQB1共捡出9种等位基因。绝大多数个体(91.8%)均具有 DPA1、0201等位基因、与目前所报道的东方人材料相一致,DPB1 0501频率最高,其次为0202、0201与1301。各位点均呈 Handy-WeinKeng 平衡.     

K562细胞转染HLA-B分子对NK细胞杀伤功能的影响

为了研究不同HLA B分子对NK细胞杀伤活性的影响 ,我们分别构建pcDNA3 HLA B 390 5 2、B 2 70 4、B 5 1 0 2 2基因真核表达载体 ;借助脂质体将各质粒转染入K5 6 2细胞 ,经G4 1 8筛选 ,分别获得阳性表达细胞株 ;并应用LDH法检测转染细胞对不同个体外周血NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果显示 :与转染了空质粒的对照组相比 ,外周血NK细胞对K5 6 2 B39的杀伤率无明显影响 ,而对K5 6 2 B2 7,K5 6 2 B5 1的杀伤率降低。当使用针对NK细胞受体KIR3DL1的单抗DX9封闭NK细胞后 ,此抑制效应大部分消失。提示靶细胞表达HLA Bw4分子可明显抑制NK细胞的杀伤效应 ,而表达HLA Bw6分子对NK细胞杀伤功能无明显影响     

人类白细胞抗原-G突变体cDNA克隆及在K562细胞上的表达

目的：克隆人类白细胞抗原-G(Human leukocyte antligen-G，HLA-G)突变体cDNA，并使其在HLA-I类阴性的K562细胞上获得稳定表达，为研究配-受体之间的识别机制奠定基础。方法：用RT-PCR方法从人子宫蜕膜组织扩增出HLA-GcDNA，得到全长HLA-GPCR产物后，用桥式PCR方法进行定点点突变，将突变的目的基因亚克隆于逆转录，将突变的目的基因亚克隆于逆转录mG-pLNCX表达载体，采用感染的方法将重组质粒转入K562细胞，最后经G418筛选及有限稀释，利用单克隆抗体W6/32进行FACS及mRNA检测，观察HLA-G突变体在靶细胞表面的表达。结果：HLA-G突变体分子在经mG-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达。结论：成功构建了mG-pLNCX表达载体，并使HLA-G突变体分子在HLA-I类阴性的靶细胞K562细胞上获得稳定表达。     

人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达

目的：获得人KIR2DL1分子(killer lg—like receptor 2DL1)胞外区与人IgG Fc段的融合蛋白。方法：从人外周血单个核细胞中提取总RNA，通过RT—PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA，经Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后，定向插入真核细胞表达载体CD51negl中。构建的重组真核表达载体CD51negl—KIR2DL1。经酶切分析和测序鉴定后，通过DEAE—dextran／ehloroquine法转染COS—7细胞：瞬时表达后，取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS—PAGE及Western印迹，鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性。结果：序列测定证实，该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列。重组真核表达载体CD5lnegl—KIR2DL1转染COS—7细胞后，ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达。SDS—PAGE结果显示，该融合蛋白的相对分子质量(Mc)约为73000。Western印迹结果证实，该蛋白能被特异性单克隆抗体(mAb)EB6所识别。结论：KIR2DL1—Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS—7细胞中获得功能性表达，为KIR2DL1的功能及其配体MHC的研究奠定了基础。     

HLA-E的表达对RSA及PIH患者外周血γδT细胞细胞毒效应的影响

探索HLA-E分子的表达对习惯性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)及妊高症(pregnancy-induced hypertension,PIH)患者外周血γδT细胞细胞毒效应的影响。通过固相抗体法体外分离并扩增外周γδT血细胞作为效应细胞,以HLA-E转染的LcL721.221细胞(.221E)及滋养层细胞JAR作为靶细胞,采用4 h乳酸脱氢酶(LDH)释放试验观察NK细胞对靶细胞的细胞毒效应。结果显示,来自RSA、PIH及正常对照组的γδ细胞均不能有效杀伤HLA-E转染的.221E细胞及JAR细胞,但未经HLA-E转染的LcL721.221细胞则被溶解;抗HLA-E单抗3D12及抗CD94单抗HP-3B1的阻断可以分别部分恢复效应细胞对靶细胞LcL721.221E的杀伤,但对JAR细胞没有影响;与正常对照组相比,RSA及PIH患者外周血γδT细胞对.221、.221E及JAR细胞的细胞毒活性没有显著性差异(P>0.05)。这说明HLA-E分子的体外表达可以保护靶细胞防止γδT细胞的杀伤,该保护机制主要是通过γδT细胞受体CD94/NKG2对靶细胞表面HLA-E分子的识别来实现的;滋养层细胞对γδT细胞杀伤的抵抗可能存在MHC I类非依赖的机制。     

HLA-DQBI等位基因与妊娠肝内胆汁淤积症的相关性研究

妊娠肝内胆汁淤积症 (intrahepatic cholestasis of preg-nancy,ICP)是常见的妊娠并发症 ,该病常致早产及死胎 ,围产儿死亡率远高于正常妊娠。本病病因至今未明 ,流行病学证实本病具有明显复发性及家族性 [1 ] 。近来有资料表明妊娠后母胎免疫失调可能与本病密切相关 [2 ]。出于 ICP遗传背景考虑及人白细胞抗原 (hum an leucocyte antigen,HL A)及基因型与自身免疫性疾病的密切关联 ,本研究从免疫遗传学角度采用聚合酶链反应序列寡核苷酸 (PCR- SSO)探针杂交法对江苏籍汉族 ICP患者 HL A- DQBI等位基因多态性进行了探讨。一、资料…     

084 HLA-B27和强直性脊椎炎

HLA-B27与强直性脊椎炎呈强关联,但它在强直性脊椎炎中作用仍不详,对HLA-B27分子的结构特征、抗原肽与B27亚型以及CTL细胞对抗原肽-B27复合体表位识别进行深入的研究,有助于了解其在强直性脊椎炎发病中的确切作用,本文拟就有关方面的研究进展作一综述.     

强直性脊柱炎与HLA-DPB1等位基因关联的研究

强直性脊柱炎与ＨＬＡＤＰＢ１等位基因关联的研究蒋黎华范丽安杨珏琴姚芳娟周嘉陵许荣钟丽民强直性脊柱炎（ＡＳ）发病机制中有一个重要发现是其与人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ｂ２７之间的强相关，但其关联机制迄今不明。近年来有人认为，与某些肠本课题受国家自然科学基...     

HLA-G与移植免疫

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-Ⅰb)HLA-G参与抗原递呈,通过相应受体调节NK细胞及T淋巴细胞功能,是一个 重要的免疫调节分子。HLA-G分子的免疫调节作用已从母胎免疫耐受扩展到肿瘤免疫、抗感染免疫和器官移植免疫等领域, 近年来在移植免疫方面取得了重要进展。     

混合淋巴细胞反应强度与个体间组织相容程度的定量关系

本文报道经ABO、Rh、HLA-R·S抗原鉴定核实的9对同卵双生同胞间MLR呈阴性,刺激指数最高不大于2;亲子间MLR呈低强度,刺激指数最高不大于7;一对异卵双生间二个单倍型不同,MLR呈高强度,刺激指数为10.90;无关间MLR强度一般较高,刺激指数大于7,但也有呈低反应者。MLR强度与个体间组织相容程度呈密切的定量关系。