N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V的调控研究

本项目属于糖生物学的研究范畴。糖生物学是继蛋白质和核酸研究的另一新兴领域,正是由于蛋白质和核酸化学的成熟才带动了在分子水平上研究生命现象时代的出现,糖生物学的成熟必将带动分子生物学的另一场突破。糖链作为信息分子,参与糖蛋白的分拣、投送、分子识别和细胞识别;糖复合物的糖链能控制细胞的分裂和分化,调节细胞的生长和衰老,在免疫性疾病治疗上也有极其广泛的     

在大鼠诱发肝癌中β1，4半乳糖基转移酶的高效液相层析测定

研究大鼠诱发肝癌与β１，４半乳糖基转移酶（β１，４ＧＴ）的相关性。用高效液相层析（ＨＰＬＣ）纯化了荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－２Ｇｎ－ＰＡ），用β１，４ＧＴ的荧光标记受体底物的ＨＰＬＣ测定方法测定了大鼠诱发肝癌中肝组织的酶活性，发现随着诱癌周数的增加，肝脏酶活性逐渐增高，在第１４周癌前期时酶活性达到最高，以后有所回落，但仍保持在高于对照组的水平。同时我们也发现，在胎鼠（孕２０ｄ）及出生第一天中酶活性与癌前期相似，说明在肝组织增生期此酶非常活跃。     

β1—4半乳糖基转移酶受体底物的动力学

研究β1-4半乳糖基转移酶（β1-4GT）与受体底物的亲和性、其底物的天线偏爱性以及糖基对亲和性的影响，以及β1-4GT对不同底物的天线特异性（branchspecificity）。用两种荧光标记的底物1（Gnβ1－2Mal－6（Gnβ1—2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1—4Gn－PA）和底物2（Gnβ1－2Mal—6（Gnβ1－2Mal－3）Mβ1—4Gnβ1－4（Fucal－6）Gn－PA），用正常雄性大鼠的肝组织的高尔基体作为酶，测定β1－4GT的不同底物的Km值[1]。结果：底物1和2的Km值分别为2．31×10－3mol／L和3.12×10－3mol／L；对底物1，α1，3天线的N-乙酰氨基葡萄糖基比α1，6天线的反应性强，形成Gnβ1－2Mal－6（Gβ1－4Gnβ1－2Mal—3）Mβ1—4Gnβ1－4Gn—PA产物是Gβ1－4Goβ1—2MQl一6（Goβ1－2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1－4Gn－PA的2．10倍左右；对底物2，α1，3天线的N-乙酰氨基葡萄糖基比α1，6天线的反应性更强，形成Gnβ1－2Mal－6（Gβ1－4Gnβ1－2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1－4（Fucα1－6）Gn－PA的产物是Gβ1－4Gnβ1－2Mal－6（Gnβ1－2Mal－3）Mβ1－4Gnβ1－4（Fucα1—6）Gn－PA的4.59倍左右。结论：核心岩藻糖对酶与受体底物的亲和性有一定影响。     

β1—4半乳糖基转移酶受体底物的动力学

研究β１－４半乳糖基转移酶（β１－４ＧＴ）与受体底物的亲和性、其底物的天线偏爱性以及糖基对亲和性的影响，以及β１－４ＧＴ对不同底物的天线特异性（ｂｒａｎｃｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）。用两种荧光标记的底物１（Ｇｎ β１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４Ｇｎ－ＰＡ）和底物２（Ｇｎβ１－２Ｍβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕ     

FGF21对HepG2细胞TGF-β信号通路的影响

目的研究FGF21对TGF-β/Smads信号通路中相关蛋白和mRNA表达的影响。方法采用Western blot法检测HepG2 cells的TGF-1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7的蛋白表达水平和采用Q-PCR方法检测HepG2 cells的TGF-β1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7的mRNA表达水平。结果在不同FGF21浓度下,TGF-β1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7蛋白和mRNA表达水平不同(P<0.05)。结论 FGF21通过促进TGF-β信号通路中的信号分子或受体的表达,或者通过下调此信号通路的阻断分子而抑制肿瘤发生。     

TGF-β1对人肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达的影响及意义

目的 通过观察转化生长因子β1（TGF-β1）对肝癌细胞株HepG2的成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）表达的影响,探讨其抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 采用Western blot方法检测不同诱导时间（0、0.5、2、6、12、16、24h）、不同TGF-β1浓度（0、0.01、0.1、1、5ng/ml）对HepG2的FGFR4表达的影响.同时观察TGF-β1与不同FGFs联合应用对肝癌细胞增殖的影响.结果 在相同TGF-β1浓度下,FGFR4的表达随时间的延长而增强（P＜0.01）,HepG2细胞数随时间的延长而减少（P＜0.01）.在相同诱导时间下,FGFR4的表达随TGF-β1浓度的增大而增强（P＜0.01）,HepG2细胞数随TGF-β1浓度增加而减少（P＜0.01）.TGF-β1对FGF1、FGF2、FGF7效应均有显著增强作用,可使相应HepG2细胞数显著增加（P＜0.01）;对FGF21效应具有显著抑制作用,可使相应HepG2细胞数显著减少（P＜0.01）.结论 TGF-β1可诱导肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达,与FGFs合用可影响肝癌细胞的增殖.     

FGF21对大鼠肝癌模型中TGF-β信号通路的影响

目的研究FGF21通过TGF-β／Smads信号通路延缓肝癌发生发展的分子机制。方法采用Westernblot法检测各组大鼠肝癌组织的TGF-β1,TGF-β R Ⅱ,Smad2,3,4,7的蛋白表达水平,采用Q-PCR法检测各组大鼠肝癌组织的TGF-β1,TGF-β R Ⅱ,Smad2,3,4,7的mRNA表达水平。结果在不同FGF21浓度下,TGF-β1,TGF-β R Ⅱ,Smad2,3,4,7表达水平不N（P〈0．05）。结论FGF21通过促进TGF-β／Smads信号通路中的信号分子或受体的表达,或者通过下调此信号通路的阻断分子而抑制肿瘤发生。     

在大鼠诱发肝癌中β1,4半乳糖基转移酶的高效液相层析测定

研究大鼠诱发肝癌与β１，４半乳糖基转移酶（β１，４ＧＴ）的相关性，用高效液相色层析（ＨＰＬＣ）纯化了荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－２Ｇｎ－ＰＡ），用β１４ＧＴ荧光标记受体底物的ＨＰＬＣ测定方法测定了大鼠诱发肝癌中肝组织的酶活性，发现随着诱癌周数的增加，肝脏酶活性逐渐增高，在第１４周癌前期时酶活性达到最高，以后有所回落，但仍保持在高于对照组的水平，同时