LAMP技术在肺部非典型感染病原体检测中的应用

目的探讨利用现代生物技术开发一套可以快速、准确而且高通量检测肺部3种常见非典型感染病原体的检测方法。方法采用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对导致肺部非典型感染的肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌3种常见病原体的特异性DNA片段进行扩增,结合基因芯片杂交技术鉴定这3种肺部非典型感染的病原体。结果采用LAMP技术对目的核酸进行扩增,肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌3种致病菌特异性核苷酸片段同时布阵在一张芯片上,证明该鉴定系统可检测出的DNA浓度为104拷贝大小,特异性高,芯片质量稳定。结论 LAMP技术结合基因芯片杂交技术可发挥独特的检测优势,能为常见的肺部非典型感染病原体最终鉴定提供进一步佐证,可提高检验鉴定结果的准确性,具有简便快速、灵敏度高、特异性好等优势。     

NVP-BEZ235对低氧诱导下大鼠心肌及主动脉的影响

目的:评价磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路双重抑制剂NVP-BEZ235对于低氧诱导下大鼠心肌及主动脉的影响。方法:低氧组和NVP-BEZ235干预组置于实验室特制的低压低氧仓内饲养,对照组于常氧环境中饲养。NVP-BEZ235干预组给予35 mg/kg NVP-BEZ23隔天灌胃,低氧组及对照组隔天给予生理盐水灌胃。21 d后计算大鼠右心室质量(RVW)/体质量(BW)值;各组大鼠左心室心肌组织行苏木素伊红染色,并测量心肌血管数量及血管内径;胸主动脉行苏木素伊红染色、Russell Movat染色及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色;检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果:(1)低氧组大鼠较对照组RVW/BW明显升高(P=0.0002),NVP-BEZ235干预组大鼠较低氧组RVW/BW明显降低(P=0.0021)。(2)左室心肌组织HE染色可见低氧组大鼠心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增宽;NVP-BEZ235干预组心肌排列较整齐,细胞间距倾较低氧组有所减小;3组大鼠心肌血管数量及管径差异无统计学意义(P均0.05)。(3)病理染色可见低氧组大鼠胸主动脉弹性纤维排列紊乱,局部胞浆空泡变;NVP-BEZ235干预组大鼠胸主动脉的改变较低氧组有所减轻。低氧组大鼠胸主动脉管壁中层α-SMA表达较对照组不均匀增加;NVPBEZ235干预组大鼠胸主动脉α-SMA表达较低氧组相对减少。(4)低氧组大鼠血清VEGF水平较对照组明显升高(P=0.0027),NVP-BEZ235干预组较低氧组VEGF水平明显降低(P=0.0060)。结论:NVP-BEZ235可以抑制低氧诱导下大鼠心肌及主动脉的改变,并抑制低氧诱导的血清VEGF的升高。     

LAMP联合基因芯片技术在肺炎衣原体检测中的应用

目的 开发一种可以快速、准确检测肺炎衣原体的检测方法.方法 采用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对肺炎衣原体的特异性DNA保守片段进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,观察是否可在芯片相应的区域出现杂交信号.结果 只有肺炎衣原体DNA经LAMP反应后出现特异性的扩增条带,经LAMP扩增后的产物与基因芯片杂交,仅肺炎衣原体区域出现杂交信号.结论 LAMP技术联合基因芯片技术具有高度敏感性、高度特异性的特点,可快速准确地检测肺炎衣原体.     

多聚肌苷酸-多聚胞苷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究多聚肌苷酸-多聚胞苷酸[Poly(I:C)]对肺腺癌A549细胞活力的影响,探讨Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡机制.方法 用Poly(I:C)和脂质体3000转染A549细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting用于检测凋亡相关蛋白、实时定量PCR检测细胞因子β干扰素(IFN-β)、趋化因子-10(CXCL-10)的表达.使用pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK和caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK抑制凋亡蛋白后,观察Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡的变化.RNA干扰实验敲低黑色素瘤分化相关抗原5(MDA5)、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的表达,进行上述指标的检测.结果 200 ng/ml Poly(I:C)转染后,肺腺癌A549细胞的存活率为74.92％±6.24％,较转染前(95.32％±3.05％)降低(t=2.883,P=0.041).100、200、400 ng/ml的Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡率分别为9.97％±0.88％、23.63％±1.41％、32.57％-±2.39％,与对照组(0.74％±0.15％)相比,差异均有统计学意义(t =4.489,P=0.002;t=11.616,P=0.000;t=16.932,P=0.000).此外,死亡受体途径蛋白如TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3明显升高,同时MDA5/RIG-Ⅰ通路激活以及1FN-β、CXCL-10的表达上调.pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK、caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK使细胞凋亡率分别降至3.17％±0.66％、5.35％±0.64％,与不加抑制剂(15.87％ ±0.93％)相比,差异有统计学意义(t=8.643,P=0.001;=6.824,P=0.002).RIG-Ⅰ、MDA5敲低后,Poly(I:C)诱导的TRAIL、IFN-β、CXCL-10表达下调.结论 Poly(I:C)能降低A549细胞的存活率,通过激活死亡受体途径诱导A549细胞的凋亡,并且MDA5/RIG-Ⅰ可能参与了该凋亡途径,此过程可能与IFN-β、CXCL-10有关.     

氯化钴化学模拟低氧与低氧环境对大鼠肺动脉成纤维细胞的作用比较

目的 比较氯化钴(CoCl2)化学模拟低氧及低氧环境对于原代大鼠肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖、迁移、表型转化的作用.方法 分离培养原代大鼠PAFs,利用CoCl2刺激细胞,或通过低氧细胞培养(1% O2)刺激诱导PAFs,通过CCK-8试验、细胞划痕、细胞迁移、表型转化标志蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达的实验结果比较CoCl2与低氧环境对于PAFs的作用.结果 与对照组相比,100 μmol/mL CoCl2刺激对PAFs的细胞增殖活力、迁移能力、细胞表型转化能力的作用无明显影响(P>0.05);而1% O2可以明显提高PAFs的细胞增殖活力和迁移活力,并可以使α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达上调(P<0.05).结论 CoCl2化学模拟低氧与低氧环境对PAFs的促增殖、促迁移、促表型转化作用存在差异.     

NVP-BEZ235在肺癌中的研究及应用进展

NVP-BEZ235是一种新型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双重抑制剂,已有的研究结果证实NVP-BEZ235在肺癌治疗中联合其他药物有着较为理想的效果.对于EGFR突变肺癌亚型、KRAS突变肺癌亚型,NVP-BEZ235的治疗可能有潜在应用价值.     

PI3K/Akt/mTOR信号通路与低氧性肺动脉高压研究进展

肺动脉高压是一种预后不良的疾病,在我国因各种肺部慢性疾病引起的低氧性肺动脉高压近年来呈上升发病趋势.磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylionsitol-3-kinases,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(protein-serine-threonine kinase,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响细胞的增殖、迁移、凋亡以及蛋白合成、细胞周期等活性参与肺动脉血管重塑以及低氧性肺动脉高压的形成.本文综述了PI3K/Akt/mTOR信号通路在低氧性肺动脉高压中的研究现状,以期为低氧性肺动脉高压的发病机制研究及治疗寻找新的思路.     

NVP-BEZ235对低氧大鼠肺血管管周肥大细胞的影响

目的 评价PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235对低压、低氧诱导的大鼠肺血管管周肥大细胞的分布以及脱颗粒状态的影响。方法 低氧组SD雄性大鼠于低压低氧培养箱（50.5 kPa）内培养,治疗组隔天给予NVP-BEZ235（35 mg/kg）干预,对照组匹配饲养条件并在当地气压常氧环境饲养,21 d后全部动物以5%戊巴比妥钠麻醉后取材。肺组织固定后进行石蜡包埋并行苏木素伊红染色和甲苯胺蓝染色。结果 低氧组大鼠肺血管管周肥大细胞数量较对照组增多,聚集明显。低氧组不同管径的肺血管（<50 μm,50~100 μm,>100 μm）管周的肥大细胞聚集情况及脱颗粒细胞比例较对照组增多,具有统计学差异（P<0.05）,而NVP-BEZ235干预组较低氧组肺血管管周肥大细胞数量减少（P<0.05）,且能降低管径50~100 μm的肺血管周围低氧组脱颗粒的肥大细胞比例（P=0.000 3）。结论 NVP-BEZ235可以抑制低压低氧诱导的大鼠肺血管管周肥大细胞的聚集及中等管径血管管周脱颗粒细胞比例。     

肺动脉成纤维细胞在低氧性肺动脉高压中的作用

近年来肺动脉成纤维细胞(pulmonary arterial fibroblasts,PAF)在低氧性肺动脉高压病理过程中的作用得到重视.低氧可以诱导肺动脉成纤维细胞产生一系列表型的改变,如增殖增强、分泌蛋白的异常等.低氧还可以促进PAF与其他细胞相互作用,如平滑肌细胞、炎性细胞、循环纤维细胞等,从而进一步加速血管重塑及肺动脉高压的形成.PAF在低氧诱导下所发生的变化受多种机制的调控,包括多条信号通路、线粒体来源的活性氧簇调控及其他机制等.PAF在低氧性肺动脉高压中的作用及作用机制有待更深入的研究.