结核分枝杆菌耐吡嗪酰胺机制研究进展

吡嗪酰胺是治疗结核病最有效的一线药物之一.近年来,耐药结核菌引发的感染率呈上升趋势使得结核分枝杆菌耐药机制的研究成为热点,至今吡嗪酰胺确切的作用机制及结核分枝杆菌对其耐药机制尚未阐明.本文就结核分枝杆菌对吡嗪酰胺耐药机制相关研究进展作一综述.     

ANGPTIA基因对不同肝癌细胞株生长的影响

目的：观察血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like4，ANGPTL4）基因对不同肝癌细胞株生长的影响。方法：用RT—PCR和Western印迹法检测9种不同肝癌细胞及永生化肝细胞中ANGPTL4的表达水平；选择ANGPTL4低表达的Huh-7、MHCC—LM3和中度表达的MHCC-97L共3个肝癌细胞株，以pEGFP-N1质粒为载体，用Lipofectamine2000脂质体转染ANGPTL4基因，用G418筛选结合FCM法对转染阳性细胞进行筛选，建立过表达ANGPTL4的稳定细胞株。制备细胞芯片，用Ki-67荧光免疫细胞化学技术检测3个稳定细胞株的体外增殖率，用裸小鼠体内成瘤实验观察ANGPTL4对这3个细胞株在裸小鼠体内生长的影响。结果：ANGPTL4mRNA在未转染肝癌细胞Huh-7和MHCC-LM3中低表达，在MHCC-97L细胞中中度表达，在Hep3B细胞中高表达。细胞芯片检测结果表明，与空载体组相比，稳定过表达ANGFFL4的Huh-7细胞体外增殖率较低（P=0．00074），而稳定过表达ANGPTL4的MHCC—LM3（P=0．07308）和MHCC-97L（P=0．01152）细胞株的体外增殖率则较高。体内实验证实，ANGPTL4可以明显抑制Huh-7细胞的裸鼠体内成瘤（P=0．00110），而促进MHCC-LM3细胞（P=0．05750）和MHCC-97L细胞（P=0．01891）的裸鼠体内成瘤。结论：ANGPTL4对不同肝癌细胞株的生长有不同影响，而对同一种细胞株体内和体外生长的影响基本一致。     

吡嗪酰胺耐药性结核分枝杆菌的噬菌体检测技术研究

目的 建立噬菌体生物扩增法（PhaB）快速测定吡嗪酰胺耐药性，并探讨其在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性测定中的应用价值。方法 应用建立的PhaB测定108株结核分枝杆菌临床分离株的吡嗪酰胺耐药性，并与绝对浓度法的药敏结果进行比较，对不符合的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定和序列测定分析。结果 PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的最佳测定条件为pH值5．5、药物浓度200μg／ml、37℃作用48h。用绝对浓度法检测108株结核分枝杆菌临床分离株，其中吡嗪酰胺敏感33株、耐药75株；用PhaB检测该108株结核分枝杆菌临床分离株，若以噬菌斑减少95％为判断标准。则吡嗪酰胺敏感32株，耐药76株。2种方法检测均为敏感的为28株，均为耐药的为71株，符合率为91．7％；2种方法检测结果不符的为9株，其中5株的PhaB结果与MIC结果相符，4株的结果不符，测序结果表明9株中有7株的PhaB结果与测序结果相符。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准，PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的敏感性为94．7％，特异性为84．8％，阳性预测值为93．4％，阴性预测值为87．5％，准确性为91．7％。结论 PhaB测定吡嗪酰胺耐药性简便、快速，3d即可获得药敏结果，可作为吡嗪酰胺耐药性的快速筛选方法。     

ANGPTL4 基因对不同肝癌细胞株生长的影响

目的:观察血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4, ANGPTL4 )基因对不同肝癌细胞株生长的影响. 方法:用RT-PCR和Western印迹法检测9种不同肝癌细胞及永生化肝细胞中ANGPTL4的表达水平;选择ANGPTL4低表达的Huh-7、MHCC-LM3 和中度表达的MHCC-97L共3个肝癌细胞株,以pEGFP-N1质粒为载体,用Lipofectamine 2000脂质体转染 ANGPTL4 基因,用G418筛选结合FCM法对转染阳性细胞进行筛选,建立过表达ANGPTL4的稳定细胞株.制备细胞芯片,用 Ki-67 荧光免疫细胞化学技术检测3个稳定细胞株的体外增殖率,用裸小鼠体内成瘤实验观察ANGPTL4对这3个细胞株在裸小鼠体内生长的影响.结果:ANGPTL4 mRNA在未转染肝癌细胞Huh-7和MHCC-LM3中低表达,在MHCC-97L细胞中中度表达,在Hep3B细胞中高表达.细胞芯片检测结果表明,与空载体组相比,稳定过表达ANGPTL4的Huh-7细胞体外增殖率较低( P=0.000 74),而稳定过表达ANGPTL4的MHCC-LM3( P =0.073 08)和MHCC-97L( P=0.011 52)细胞株的体外增殖率则较高.体内实验证实,ANGPTL4可以明显抑制Huh-7细胞的裸鼠体内成瘤( P ＝0.001 10),而促进MHCC-LM3细胞( P＝0.057 50) 和MHCC-97L细胞( P＝0.018 91)的裸鼠体内成瘤.结论:ANGPTL 4对不同肝癌细胞株的生长有不同影响,而对同一种细胞株体内和体外生长的影响基本一致.