何首乌扩增长度多态性反应及银染体系的建立

目的 通过对各主要影响因素的研究,建立适于何首乌扩增长度多态性（AFLP）反应体系及银染体系. 方法 采用改进的CTAB提取方法从何首乌的嫩叶中提取获得总DNA;从酶切DNA的量、时间等考察酶切体系,并设计正交实验进行预扩体系和选扩体系的优化. 结果 酶切体系DNA的适用量为400 ng,37 ℃酶切5 h;用较优的预扩增体系和选择性扩增得到的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,得到清晰的指纹图谱. 结论 所建立的反应体系可有效地应用于何首乌的分类鉴定和道地性鉴定.     

我国不同地区白木香核糖体DNA内转录间隔区碱基序列分析

目的:研究我国不同地区白木香核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)碱基序列的差异。方法:运用PCR法对白木香的ITS(包括ITS1,5.8S,ITS2)序列扩增后直接测序,用软件CLUSTALX和MEGA分析测序结果。结果:白木香ITS区总长度为680bp,其中ITS1为246bp,5.8S为163bp,ITS2为271bp。ITS序列在白木香种内的变异很小,只有6个变异位点,种内遗传距离为0.0%-1.1%。结论:ITS序列的差异为鉴别不同产区白木香及其近缘种提供了依据。     

不同方法提取高良姜挥发油的比较研究

为了比较不同方法提取的高良姜挥发油的效果,为高良姜挥发油化学成分分析、药材道地性研究和质量控制提供参考依据,先后用水蒸气蒸馏法、溶剂提取法和超声波辅助提取法提取高良姜挥发油,并分别用正油己烷、乙酸乙酯、乙醚和甲醇做稀释溶剂进行其气相色谱分析(GC),结果显示,不同盼方法提取的高良姜挥发油外观性状和产率不同,不同溶剂稀释的挥发油样品的GC峰的数目和主成分峰的"表观丰度"也有明显差别,水蒸气蒸馏法提取的挥发油样品的GC色谱在保留时间16 min以后没有明显的峰,而其他方法提取的样品出现明显的峰.经GC/MS分析,不同方法提取挥发油的化学成分种类和相对含量也有较大的差异.因此作者认为,用水蒸气蒸馏法提取高良姜挥发油进行药材质量控制有一定的局限性,超声波辅助石油醚提取挥发油具有温和、省时、提取的挥发性的成分较多等优点,是一种较理想的提取方法,可用于高良姜挥发油的化学成分分析、药材道地性研究和质量控制.     

南药高良姜基因组DNA提取方法的研究

目的 提取高质量的高良姜基因组DNA,用于药材分子鉴定、分子系统分类和分子进化等下游分子生物学研究.方法 在CTAB改良法基础上,采用4个方案提取DNA.结果 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA的OD260/OD280比值在1.8～2.0之间,产率为0.54～1.049 μg/mg干燥叶片.基因组DNA能被限制性内切酶EeoR Ⅰ和Mse Ⅰ完全酶切,经AFLP分析,得到了条带清晰的DNA指纹图谱.结论 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学研究要求.