钩藤多指标含量测定及化学计量学分析

目的 建立同时测定钩藤中绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、喜果苷含量的方法,基于化学计量学分析,评价钩藤的质量。方法 采用高效液相色谱(HPLC),KinetexC₁₈色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.6 μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸水(含0.5 g·L^-11-丁基-3-甲基咪唑氯盐)(B)为流动相,梯度洗脱,流速:0.8 mL·min^-1;检测波长327 nm(绿原酸)、246 nm(异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱和喜果苷);柱温:35 ℃;进样量:10 μL。结果 绿原酸、异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱和喜果苷分离良好,平均回收率分别为99.74%、103.25%、98.35%、99.45%、104.16%、97.98%。11批钩藤上述成分的含量测定结果分别为0.128 7～0.432 0、0.007 1～0.022 1、0.008 1～0.023 7、0.009 8～0.047 1、0.005 7～0.022 8、0.008 9～0.034 9 mg·g^-1。化学计量学分析表明不同产地的钩藤质量存在一定差异。结论 建立的钩藤多指标含量测定方法简单、准确,可为钩藤药材质量综合评价提供新的参考方法。     

野蔷薇根总黄酮对H2O2 诱导损伤的HUVEC 线粒体功能及凋亡通路的影响

目的探讨野蔷薇根总黄酮（TF-RM）对H2O2 诱导损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）线粒体功能及凋亡 通路的影响。方法将SD 雄性大鼠随机分正常对照组、维生素C 组（0.08 g·kg-1）、TF-RM 组（2.5 g·kg-1）, 每组10 只。灌胃给药,每天1 次,连续7 d,制备含药血清。采用H2O2（950 μmol·L-1）诱导HUVEC 损伤,并 分别与维生素C 及TF-RM 低、中、高剂量（5%、10%、15%）含药血清共培养24 h。采用DCFH-DA 荧光定量 法检测HUVEC 中活性氧（ROS）的含量;JC-1 染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;Fluo-4 染色法检测细胞内 Ca2+浓度;Western Blot 法检测B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋 白酶（Caspase）-9、Caspase-3 蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组HUVEC 内的ROS 水平、线 粒体膜电位下降率、Ca2+浓度以及Bax 蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）。与模型组比 较,TF-RM 各剂量组细胞内的ROS 水平、Ca2+浓度及Bax 蛋白表达量均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,Bcl-2 蛋白表达量升高（P < 0.05）;TF-RM 高剂量组的线粒体膜电位下降率明显降低（P < 0.05）;TF-RM 中剂量组的 Caspase 9 蛋白表达量明显降低（P < 0.05）。结论TF-RM 能够改善H2O2 诱导的HUVEC 线粒体功能损伤,发 挥对细胞凋亡的保护作用。