大鼠坐骨神经切断后Src抑制的蛋白激酶C的底物的表达变化

目的 探讨大鼠坐骨神经切断后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在神经中的表达变化及其意义.方法 制备成年SD大鼠坐骨神经切断模型.通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经切断后SSeCKS表达的时空变化.结果 Western blotting显示,大鼠坐骨神经切断后,近端SSeCKS的表达逐步升高,伤后2d达到高峰,之后逐渐下降.远端SSeCKS表达于12h达到高峰,之后呈下降趋势.免疫组织化学方法结果表明,SSeCKS在神经断端处高表达,成簇状聚集;在远离断端处表达明显降低,分布亦较为均一.免疫荧光双标记结果显示,SSeCKS与S100、NF200及GAP43有部分共定位.结论 大鼠坐骨神经切断后,可以引起SSeCKS的表达变化,其可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导,并与损伤后神经的再生及功能修复有关.     

LPS对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的研究细菌脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate，SSeCKS）表达和细胞内定位的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法用植块培养法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞，用抗大鼠CD31抗体进行细胞鉴定。LPS刺激体外培养的RPMVEC，用定量PCR、免疫印迹方法检测LPS刺激RPMVEC不同时间SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；用0．05μmol／L蛋白激酶C（PKC）抑制剂（Calphostin C）预处理RPMVEC30min后再用LPS刺激6h，免疫荧光细胞化学法观察Calphostin C对LPS诱导SSeCKS与纤维状肌动蛋白（filamentous—actin，F-actin）细胞内定位和结构改变的影响。结果定量PCR结果显示LPS刺激RPMVEC1h后SSeCKS表达水平达到最高，Westernblot结果与定量PCR结果相一致，同时，LPS以时间依赖的方式诱导SSeCKS磷酸水平增加。免疫荧光结果显示LPS刺激后，F-actin发生重构，细胞内形成应力纤维，SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足末端聚集；Calphostin C部分抑制LPS对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论LPS能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加和细胞内定位改变，PKC参与I娲诱导内皮细胞F-ac，6n的重构和SSeCKS重新分布；提示SSeCKS可能与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

术后应用氟马西尼对异氟烷麻醉后苏醒和认知功能的影响

目的探讨术后应用氟马西尼对异氟烷麻醉后苏醒和认知功能的影响。方法给予异氟烷全身麻醉的患者72例随机分为对照组（安慰剂组）34例和观察组（氟马西尼组）38例,然后对两组患者术后苏醒及认知功能的情况进行统计及比较。结果观察组拔管后自主呼吸恢复时间：（11.23±2.84）min,轻度唤醒时间：（14.65±3.02）min,术后5 h时MMSE评分：（2.94±3.22）分。对照组拔管后自主呼吸恢复时间：（13.12±3.54）min,轻度唤醒时间：（16.98±2.87）min,术后5 h时MMSE评分：（24.42±3.86）分。两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论异氟烷麻醉术后应用氟马西尼,对于苏醒和认知功能有积极的作用,值得在临床广泛推广。     

中西医等结合疗法治疗小儿脑瘫神经兴奋综合征、情感性焦虑综合征的疗效分析

目的探讨中西医等综合疗法治疗小儿脑瘫神经兴奋综合征、情感性焦虑综合征的作用机制。方法头针、按摩、点穴、中药的离子疗法。结果疗效显著,对于小儿脑瘫早期治疗疗效很好。结论头皮有些穴位对于运动、语言、情感、感觉、智能、思维等这些区域有调节反射作用,所以头针、头部点穴、中药离子疗法作用头部的相关区域直达病灶,迅速改善症状,提高了生活质量,降低了致残率。     

β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖的机制

目的探讨β1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖的机制.方法将不同浓度的β-1,4-GalT-Ⅰ表达质粒转染雪旺氏细胞,采用Westem blot方法检测增殖相关信号分子cyclin D1、p16INK4以及p27Kipl的表达水平,Northem blot方法检测p19ARF的表达变化.结果随着β-1,4-GalT-Ⅰ在雪旺氏细胞中的表达增加,cyclin D1表达降低,而p16INK4a和p19ARF呈现相反的变化;p27Kipl变化不明显.结论β-1,4-GalT-Ⅰ影响雪旺氏细胞增殖可能与cyclin D1、p16INK4a和p19ARF介导的信号传导途径有关.     

人类S期激酶相关蛋白2表达质粒的构建

目的:克隆人类S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因,构建其表达质粒,为今后进一步研究Skp2的生物学功能提供基础。方法:采用RT-PCR技术扩增人类Skp2 eDNA全长序列,运用DNA重组技术将其重组于pcDNA3.1/myc- His A质粒,构建Skp2表达质粒。结果:通过酶切电泳分析及DNA测序分析证实,实验成功构建了Skp2表达质粒。结论:Skp2表达质粒pcDNA3.1/mye-His A-Skp2构建成功,为进一步研究Skp2的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊断和预后中的作用奠定了基础。     

内科卧床病人并发肺动脉栓塞的临床分析

目的对内科卧床病人并发的肺动脉栓塞进行临床分析,探讨诊断、治疗及预防的对策。方法肺栓塞患者32例,分析一般状况、临床特点,对28例急性肺栓塞采用静脉尿激酶溶栓和肝素抗凝治疗。结果内科卧床病人急性肺栓塞发病率为28%;70岁以上为60%;其中70%有深静脉血栓,最多见的原发病为脑卒中,为60%;初诊误诊率为65.62%,总死亡率为25%;静脉溶栓有效率为85.71%。结论肺栓塞有很高的误诊率和死亡率,应对高龄的、长期卧床的并有深静脉血栓倾向的病人给予必要的预防;溶栓与抗凝疗法是治疗急性肺栓塞的有效手段之一。     

经腹彩色多普勒超声(TACS)及经阴道彩色多普勒超声(TVCS)联合诊断切口妊娠

目的总结切口妊娠经腹彩色多普勒超声(TACS)及经阴道彩色多普勒超声(TVCS)的声像图特征,提高切口妊娠的早期诊断率,降低子宫切除率。方法对50例切口妊娠行TACS及TVCS检查。结果 TACS及TVCS联合诊断切口妊娠符合率较高。结论联合TACS及TVCS,能显著提高切口妊娠诊断率。     

高脂血症大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物表达的变化

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物（SSeCKS）的表达变化,探讨高脂血症对SSeCKS表达的影响。方法高脂饮食组（n=8）和正常饮食组（n=8）SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测血清总胆固醇及甘油三酯;用HE染色观察心脏病理学改变;用免疫组织化学法检测SSeCKS在心脏的表达;用免疫荧光双标法观察SSeCKS在心脏中的细胞定位。结果高脂饮食组总胆固醇和甘油三酯较正常饮食组明显升高（P〈0.05）;病理学观察发现高脂饮食组形成高脂性心脏病变;免疫组织化学检测发现高脂饮食组中SSeCKS表达主要分布在心内膜、心间质;免疫荧光双标发现SSeCKS与心脏组织内皮细胞和α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞部分共定位。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏SSeCKS表达升高,SSeCKS可能参与了心脏结构重塑及细胞凋亡,从而促进动脉粥样硬化心脏病的发展。     

Src抑制的蛋白激酶C底物在细胞因子诱导的C6胶质瘤细胞中表达的改变

目的研究肿瘤坏死因子（TNF-α）对培养的C6胶质瘤细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C Kinase Substrate,SSeCKS）表达的影响。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的C6胶质瘤细胞随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,运用实时荧光定量PCR（Realtime PCR）、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位。结果细胞因子TNF-α可引起C6胶质瘤细胞中蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）底物的广泛磷酸化,并以时间及浓度依赖的方式上调PKC底物SSeCKS的表达。免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于细胞质,浓集于细胞伸长的足突中。TNF-α刺激后,SSeCKS向核周迁移。这些改变可被PKC的抑制剂Ro-31-8220部分抑制。结论TNF-α可诱导C6胶质瘤细胞中PKC的活性,上调SSeCKS表达,这些改变与PKC的活性相关,提示SSeCKS可能参与胶质细胞中炎症信号的转导。